编制说明-桑黄全产业链生产技术规范

——《桑黄全产业链生产技术规范》地方标准编制说明一、任务来源（一）任务来源2024年04月，上海市农业科学院完成了《桑黄全产业链生产技术规范》上海市地方标准草案等书面材料，向上海市农业农村委员会提出申报。2024年06月，上海市市场监督管理局以《关于下达2024年度第二批上海市地方标准制修订项目计划的通知》（沪市监标技[2024]299号）批准项目立项。（二）起草单位本标准由上海市农业科学院，上海国森生物科技有限公司，上海菇林源菌业专业合作社，上海市金山区廊下镇光明经济合作社，上海沅渊智能科技有限公司，上海橙蓝果蔬专业合作社等单位共同起草。单位的人员参与资料收集、文本完成、市场调研、实验室比对、数据处理等工作。二、标准编制目的和意义（一）标准编制目的自“健康中国2030”规划实施以来，食疗养生已成为“健康中国”建设的重要组成部分。特别是在新冠病毒肺炎疫情爆发后，全国上下对大健康产业的关注度显著提升。在没有特效药的情况下，增强自身免疫成为了对抗病毒的关键手段。在此背景下，食药用菌因其营养、安全且集多种功能于一身的特点，逐渐成为了保健养生品研发的重要资源，并日益成为大健康产业不可或缺的一部分。桑黄是一种珍稀的药用真菌，最早记载于2000多年前的《神农本草经》中，描述为“久服轻身不老延年”；明代李时珍的《本草纲目》对桑黄及其药效有明确记载。现代药理研究表明，桑黄具有增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗菌、保肝、降血糖、预防和治疗类风湿性关节炎、抑制尿酸和抗过敏等功效作用,在食药用菌中具有广阔的资源利用前景。我国桑黄的栽培技术起于90年代末，于2010年逐渐走向成熟，2016年种植规模成10倍的增长。新冠疫情后，食疗养生的观念日趋人心，随着市场需求的增长，上海的桑黄栽培规模及产量逐年倍增，奉贤、金山、崇明陆续建成了桑黄栽培基地。目前全国多数地区桑黄的人工栽培以传统大棚为主，受季节及环境条件的影响，尚无法满足日益增长的市场需求；同时，大棚栽培的标准化技术规范难以形成，导致市场上产品参差不齐，栽培过程还会因环境条件控制不当引起霉菌污染，造成栽培子实体的安全性隐患。上海市农业科学院桑黄研究团队自2012年起探索桑黄的设施化栽培，并选育出适合设施化栽培的优良桑黄品种，经过十余年的技术攻关，已建立了适合桑黄设施化的栽培技术体系，形成一套技术规范。经过多年的科研攻关，通过常温常压等离子体诱变（ARTP）技术获得了一株高产黄酮、多糖的优良菌株——‘沪桑2号’。该菌株在浙江淳安进行栽培后，经检测分析表明其子实体总黄酮含量高达5.9%，显著优于原始菌株，并具有较强的清除自由基能力。近三年，桑黄栽培规模及产量逐年倍增，奉贤、金山、崇明陆续建成了桑黄栽培基地，更在全国率先实现了桑黄的工厂化栽培，相比于大棚栽培，工厂化栽培环境稳定可控，产品质量稳定。同时，人工种植的桑黄从栽培到走向市场需要菌种培养、栽培管理、采收、采后干制、切片、运输等全链条的规范化技术规程，而目前不论是地方还是行业标准都缺乏涉及全产业链的生产标准，建立桑黄全产业链栽培技术规范对形成安全优质桑黄子实体产品尤为重要。优良的种源、标准化的生产技术是确保桑黄产品优质和质量稳定的前提要素，本项目将在上海建立桑黄全产业链栽培技术规程，并推广应用到全国，有助于推动我国桑黄产业的高效绿色发展，开创我国新兴高附加值农业产业的发展模式。（二）标准编制意义通过优良种源的推广应用，设施化绿色生产技术规程的建立，为上海郊区珍稀食药用菌健康产业发展起到示范和引领作用，对上海郊区的乡村振兴、珍稀食药用菌大市场的繁荣发展具有重要科学意义。根据农业资源条件、经济与技术发展水平等因素，系统分析并确定桑黄全产业链生产技术规范的相关要素，共包括生产环境、菌种生产及质量、原辅料、菌袋制作与培养、出菇管理、病虫害防控、加工及贮运、管理要求八部分，建立桑黄全产业链栽培技术规程，并推广应用到全国，有助于推动我国桑黄产业的高效绿色发展，开创我国新兴高附加值农业产业的发展模式。三、编制过程（一）第一阶段：草案阶段1、成立编写组在接到标准制定任务后，2024年7月成立了标准项目编写组，包括上海市农业科学院李正鹏、杨焱等、上海国森生物科技有限公司徐苟伢等、上海菇林源菌业专业合作社李青恩等、上海市金山区廊下镇光明经济合作社金涛等、上海沅渊智能科技有限公司刘玉东等、上海橙蓝果蔬专业合作社马一清等共14人，围绕资料收集、走访调研、标准内容、实验设计等方面，制定了详细的实施方案和技术路线，明确了编写组人员各自的任务和分工。2、收集和分析相关参考文献2024年7月，收集国内国外相关法律法规、标准、书、文章，为标准起草提供了参考。GB3095-2012《环境空气质量标准》规定了环境空气功能区分类、标准分级、污染物项目、平均时间及浓度限值、监测方法、数据统计的有效性规定及实施与监督等内容。GB5749-2006《生活饮用水卫生标准》规定了生活饮用水水质卫生要求、生活饮用水水源水质卫生要求、集中式供水单位卫生要求、二次供水卫生要求、涉及生活饮用水卫生安全产品卫生要求、水质监测和水质检验方法。GB/T12728-2006《食用菌术语》规定了食用菌形态结构、生理生态、遗传育种、菌种生产、栽培、病虫害和保藏加工等方面有关的中英文术语。NY/T1935-2010《食用菌栽培基质质量安全要求》规定了食用菌栽培基质的术语和定义、要求、包装、运输和贮存。NY/T2375-2013《食用菌生产技术规范》规定了食用菌生产中对栽培场地和场所环境、生产投入品、培养料制备、接种、发菌期管理、出菇期管理、病虫害防控、采收、修整、包装、保鲜、运输和储存的技术要求。NY/T4075-2022《桑黄等级规格》规定了段木或代料栽培桑黄的术语和定义、要求、包装标识和储运要求。3、调研情况2024年8月，编写组在上海市奉贤区、松江区、金山区、崇明区等地区开展桑黄全产业链生产企业开展相关调研工作，听取一线人员的意见和建议。调研发现，桑黄市场需求量逐步增加，但存在生产不够稳定，成品率不够高等问题，急需进行研究和改进，如栽培环境、设施匹配、出菇周期（有效成分含量）等关键环节。编制组多次赴外省市走访安徽金寨尚臻生物科技有限公司，吉林桑黄生物科技集团有限公司，浙江千济方医药科技有限公司，海宁宏欣农业生物科技有限公司并通过现场调研桑黄工厂的厂区规划与建设，总结桑黄生产的基本配置与合理布局。4、试验验证情况在充分调研和分析总结基础上，针对生产企业存在的各类急需解决的问题，2024年8月2025年4月，经合已有数据，针对桑黄全产业链生产的关键技术环节在上海国森生物科技有限公司、上海菇林源菌业专业合作社、上海市金山区廊下镇光明经济合作社、上海沅渊智能科技有限公司、上海橙蓝果蔬专业合作社开展相关实验，重点包括原料配方、栽培环境、设施匹配、出菇周期（有效成分含量）等，并对这些参数进行验证，最后形成整套可实施的技术规程并在企业大规模推广应用。（二）第二阶段：征求意见阶段在以上收集和分析相关参考文献，调研、试验验证工作的基础上，编写组按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定形成标准征求意见稿。2025年6月至8月，编写组向18个相关教学机构、科研机构、技术推广机构、生产企业等单位及20位专家、有针对性地进行征求意见，形成征求意见汇总处理表。收到16家单位及18位专家回函，2个没回函。回函中有建议或意见的有16家单位，共有81条意见。经过研究和甄别，采纳55条意见，不采纳23条意见，部分采纳3条意见。（三）第三阶段：送审阶段2025年8月—2025年12月，编写组根据征求意见过程中的意见，如文本格式、文本内容、标准引用规范、语言规范等，对标准材料进一步修改完善形成了送审稿。（四）第四阶段：审定阶段2026年月日，受上海市农业农村委委托，上海市种植业标准化委员会组织相关专家，召开了上海市地方标准《桑黄全产业链生产技术规范》验收会。邀请专家，对标准送审稿进行了认真审查。在听取标准起草组汇报的基础上，专家组审查了标准文本及编制说明，提出如下修改意见。四、标准编制原则（一）政策性制定本文件直接关系到相关生产企业和广大消费者的利益。因此，在制定过程中严格贯彻国家有关方针、政策、法规和规章。与同体系标准及相关的各种基础标准以及配套使用的标准相衔接。（二）先进性对本文件中有关内容的确定，充分分析产业发展需求和现状，收集行业内哪些相关单位的先进经验，广泛征询行业有关专家、生产基地、科研院所等多方面意见的基础上，确立各项技术指标参数，力求反映本研究领域的国内先进经验等，使标准中所规定的技术内容桑黄全产业链生产生产的稳定性和成品率，提升生产企业的经济效益。本文件为首次制定。经查询，目前还没有与本文件相关的国际、国内行业标准，具有先进性。（三）规范性：在本文件征求意见稿的编制过程中力求做到技术内容的叙述正确无误，文字表达准确和简明易懂，标准的构成严谨合理；内容编排、层次划分等符合逻辑。（四）科学性本文件是项目组多年来在桑黄全产业链生产相关工作上的积累，同时参考国内相关技术方案和研究进展，对前期研究及调研、栽培试验结果集成而制定的，内容科学、准确、可靠。（五）适用性本文件内容在上海国森生物科技有限公司、上海菇林源菌业专业合作社、上海市金山区廊下镇光明经济合作社、上海沅渊智能科技有限公司、上海橙蓝果蔬专业合作社等合作基地进行规模化生产验证，确保参数的适用性，有较强的推广性。五、标准的主要技术内容（一）生产环境根据生产规模，划分作业区，规划道路与设施。应规划原料储存、拌料、装料、灭菌、冷却、接种、培养、出菇、加工、投入品储存、产品储存、检测、盥洗和废弃物暂存等专用区域或场所，严格划分有菌区、清洁区，有关区域应设置醒目的平面图、标志、标识等。生产厂房、设备与设施均按NY/T528规定执行。接种室外设缓冲间，两者门不能同一朝向；室内安装有空气过滤装置的换气设备；配有紫外灯。接种室洁净度应达到万级，接种区域安装百级层流罩。培养室采用多层架式立体培养，培养架设有横梁托撑，床架层数4层～8层，可2个～3个培养架堆叠，培养架底层离地面0.1m～0.2m，最顶层离房顶1.2m～1.5m，上下层间距0.3m～0.35m，培养架排与排之间留有0.3m～0.5m的走道；安装有空气过滤装置的换气设备，保持良好的通风。单个出菇室栽培面积50m2～100m2为宜，冷库模式彩钢板菇房或是保温集装箱，配置控温控湿设备，建筑材料能经受长期高湿环境。出菇架一般以不易生锈的材料建造，通常出菇架为4层～8层，与地面间隔0.2m～0.3m，层间距0.40m～0.55m，架宽1.0m～1.2m，出菇架之间留有过道。单个出菇大棚面积以200m2～400m2为宜，配置控湿设备，建筑材料能经受高湿环境。大棚密封性、排水性能良好；设有前后通风口，建造方向顺应当地栽培季节的主要风向，形成对流，通风口安装窗纱防虫进入。采用生石灰消毒土壤，使用旋耕机将地表10cm土壤旋耕成小颗粒，筑畦65cm～70cm宽度畦面，两畦之间预留28cm～32cm水沟，畦高18cm～22cm。畦面铺遮阳网或无纺布用于隔绝土壤。生产基地应远离污染源，符合NY/T2375的要求。水源质量应符合GB5749的要求。环境空气质量应符合GB3095的要求。栽培前应从以下方面对基地环境进行调查和评估：基地的水源水质、土壤环境质量及大气环境质量；基地的历史使用情况、对桑黄质量安全是否存在影响；周围农业、工业和生活废水、废气、固体废物或者其他有毒有害物质排放情况。（二）菌种生产与质量菌种应优质高产、抗病抗逆性强、适应性广、商品性好，从具有生产资质的单位购买，并可追溯菌种的来源及分类归属。二级菌种（原种）、三级菌种（栽培种）可由生产基地统一制作。菌种生产应符合NY/T528食用菌菌种生产技术规程的规定，菌种质量应符合NY/T1846的规定，用于生产的菌种必须种性纯正、生命力旺盛、无病虫害。表4母种感官感官要求项目检验方法要求菌丝体特征肉眼观察黄色至黄褐色，菌丝整齐、浓密，生长旺健，棉毛状或绒毛状菌丝分泌物肉眼观察有褐色色素分泌菌落边缘肉眼观察菌落颜色较中心浅，边缘整齐杂菌菌落肉眼观察无虫（螨）体肉眼观察无菌种背面外观肉眼观察培养基不干缩，颜色均匀、无暗斑、接种块部位有色素气味鼻子闻嗅菌种具有特有的清香味，无酸、臭、霉等异味表5原种、栽培种感官要求项目检验方法要求菌丝体特征肉眼观察菌球黄色至黄棕色，向外有一圈放射状触角，生长旺健均一培养液肉眼观察培养液呈黄棕色，澄清杂菌肉眼观察无气味鼻子闻嗅有桑黄菌种特有的清香味，无酸、臭、霉等异味（三）原辅料培养料是桑黄赖以生存和繁殖的基础，培养料的种类、配比对桑黄的生长发育具有重要作用。此外，培养料的透气性、含水量、pH等理化特性，也是影响桑黄生长的重要因素，对桑黄产量和质量均有较大的影响。桑黄栽培主要用木屑、麸皮、石膏等原辅料。可供栽培桑黄的原辅料种类繁多，但不是任何原辅料都能栽培出高质量的桑黄。原辅料的选择包括原辅料种类的选择、原辅料的质量和原辅料种类间配比的选择。可供桑黄栽培的原辅料共同的特点是富含木质素、纤维素、半纤维素、多糖类、有机氮、维生素和无机盐，不含或少含抑制桑黄菌丝生长和子实体发生的有害物质。1、木屑木屑选用0.5cm～1cm颗粒度占比大于75%的桑树木屑或主要为阔叶树木等硬杂木屑和农林副产品等其他主料，符合NY5099和NY/T1935中主料的规定。新鲜木屑可及时使用，如不能及时使用，需加水充分预湿，每隔5d～10d需补水翻堆，进行好气发酵，发酵时间不少于1个月。木屑粉碎后，根据栽培习惯，有的主张现粉现用，有的提倡发酵堆置一段时间后再使用。据报道，堆置好的木屑持水力好，理化性质更稳定，栽培桑黄时，菌丝生长快，产量集中，周期短。但堆置过程中，要注意定期浇水和翻堆，避免厌氧发酵和长霉，底部变酸发臭的木屑要用清水淋洗后才能使用。为防止通气不良，木屑堆不宜过高，堆场周围必须保持清洁，注意驱虫，同时，注意保护水体环境，对污水进行处理。图1浇水预湿图2搅拌预湿图3补水翻堆（1）五种木屑栽培‘沪桑2号’子实体成分分析表6五种木屑化学成分含量样品纤维素半纤维素木质素粗蛋白总糖钾磷HN330.53±13.87e279.40±1.88c127.42±1.08b21.85±1.08a8.93±0.01c20.54±0.19a0.33±0.02aSZ437.82±0.27c332.38±12.11a135.70±0.34a20.89±0.14a4.54±0.07d18.36±0.46b0.19±0.01cSS392.37±16.63d214.96±1.37d126.34±2.61b16.41±0.95b14.58±0.10a14.13±0.11d0.20±0.01cYS553.16±3.30a302.66±3.13b116.91±1.79c15.65±0.80b14.54±0.09a16.37±0.01c0.25±0.01bYL510.27±1.62b299.21±12.04b137.37±4.93a16.08±0.56b10.93±0.02b11.51±0.29e0.20±0.02c注：HN、SZ、SS、YS、YL分别表示浙江海宁桑树、陕西榆林枣树、陕西榆林桑树、湖北宜昌桑树、湖北宜昌栎树木屑；数据为平均值±标准差(n=3)，单位为mg·g-1；同列不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。湖北宜昌桑树木屑纤维素含量最高，陕西榆林枣树木屑半纤维素含量最高，陕西榆林枣树、湖北宜昌栎树木屑木质素含量较高，浙江海宁桑树、陕西榆林枣树木屑粗蛋白含量较高，陕西榆林、湖北宜昌桑树木屑总糖含量较高，浙江海宁桑树木屑钾、磷含量最高。表7不同木屑栽培的瓦尼桑黄子实体多糖、总三萜、总酚和黄酮含量样品多糖总三萜总酚黄酮HN2.07±0.04c0.63±0.01a16.09±0.06a15.59±0.38aSZ3.06±0.19a0.39±0.01c6.50±0.06b3.38±0.07cSS2.73±0.18b0.41±0.01c3.15±0.03e2.26±0.03dYS1.20±0.03d0.48±0.02b4.63±0.08d3.63±0.20cYL1.27±0.01d0.47±0.01b5.86±0.11c4.93±0.22b不同木屑栽培的瓦尼桑黄子实体活性成分含量、粗多糖单糖组成、醇提物抗氧化及体外肿瘤细胞抑制活性方面均存在较大差异。浙江海宁桑树木屑的纤维素含量最低，粗蛋白、钾、磷含量较高。浙江海宁桑树木屑栽培的瓦尼桑黄子实体的总酚、黄酮和总三萜含量较高，其醇提物抗氧化活性和体外肿瘤细胞抑制率最大。（2）不同木屑栽培的‘沪桑2号’子实体高效液相色谱图桑黄醇提物中主要含有多酚类、黄酮类和三萜类化合物。浙江海宁桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体的醇提物在254nm波长下相较于其它4种样品具有较多的峰（图4），且极性较低的化合物更丰富。而陕西榆林枣树、陕西榆林桑树、湖北宜昌桑树、湖北宜昌栎树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物峰较少且吸光值低，所含的化合物多为极性较大的。几种桑黄子实体醇提物HPLC分析的共有峰主要在5min~14min出峰，说明桑黄中极性较大的次级代谢产物如多酚类在不同木屑栽培的子实体中都有存在，而弱极性的如黄酮和三萜类在海宁桑树木屑栽培的子实体中更丰富。图4样品高效液相色谱图注：(a)标准品；(b)‘沪桑2号‘子实体醇提物；(a)1~5分别为灵芝醇B、灵芝酸DM、黄芩素、Hispidin、原儿茶醛；(b)1~5分别为浙江海宁桑树、陕西榆林桑树、陕西榆林枣树、湖北宜昌桑树、湖北宜昌栎树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物。（3）‘沪桑2号’子实体粗多糖的多糖含量和单糖组成浙江海宁桑树、陕西榆林枣树、陕西榆林桑树、湖北宜昌桑树、湖北宜昌栎树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体粗多糖的多糖含量分别为43.9%、25.57%、24.57%、39.07%、32.11%。如表7所示，5种桑黄子实体的粗多糖均含有岩藻糖、葡萄糖胺、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸，陕西榆林桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体粗多糖中木糖占比最高，其他4种粗多糖中葡萄糖占比较高。浙江海宁桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体粗多糖中葡萄糖和葡萄糖醛酸占比较为突出，表明其葡聚糖含量丰富。陕西榆林枣树和桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体粗多糖的单糖组成较为复杂，相较其他样品还含有阿拉伯糖，可能与当地的树种生长特性有关。表8五种木屑栽培的‘沪桑2号’子实体粗多糖单糖组成及摩尔比项目ItemHNVPSZVPSSVPYSVPYLVP岩藻糖Fucose3.691.572.072.092.62鼠李糖Rhamnose--1.00--阿拉伯糖Arabinose-4.712.88--葡萄糖胺Glucosamine2.381.001.151.721.18半乳糖Galactose9.294.266.504.265.25葡萄糖Glucose20.784.248.098.526.66木糖Xylose1.006.434.02--甘露糖Mannose9.072.942.752.643.35半乳糖醛酸GalA1.222.002.641.001.00葡萄糖醛酸GluA10.582.651.921.752.53注：HNVP、SZVP、SSVP、YSVP、YLVP分别表示浙江海宁桑树木屑、陕西榆林枣树木屑、陕西榆林桑树木屑、湖北宜昌桑树木屑、湖北宜昌栎树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体粗多糖；-表示未检出。（4）‘沪桑2号’醇提物对DPPH和ABTS自由基清除能力不同木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物对DPPH和ABTS自由基的清除率见图5。浙江海宁桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物对DPPH的清除率最高，湖北宜昌桑树木屑和湖北宜昌栎树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体的醇提物次之，陕西榆林枣树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体的醇提物在高浓度下的清除率较高，在低浓度下清除率较低。五种桑黄子实体的醇提物DPPH清除率的IC50值见表9，浙江海宁桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体的醇提物具有最好的抗氧化活性，IC50为0.016±0.002mg/mL，这与其较高的总酚含量、黄酮含量和三萜含量有关；湖北宜昌两种木屑栽培的桑黄子实体也具有较好的DPPH自由基清除活性，其总酚和黄酮的含量相对较高，也说明总酚和黄酮是桑黄中主要的抗氧化活性物质。ABTS自由基清除能力的结果见与DPPH自由基清除的结果基本相同，浙江海宁桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体的醇提物具有最好的清除ABTS自由基的能力，IC50为0.065±0.001mg/mL，其次是湖北宜昌栎树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物。浙江海宁桑树木屑和湖北宜昌栎树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体均具有较高的黄酮含量（表8），说明ABTS自由基清除能力与黄酮的含量密切相关。图5五种不同木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物对DPPH和ABTS自由基清除率注：HNVT、SZVT、SSVT、YSVT、YLVT分别表示浙江海宁桑树、陕西榆林枣树、陕西榆林桑树、湖北宜昌桑树、湖北宜昌栎树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物。表9五种木屑栽培‘沪桑2号’子实体醇提物对DPPH和ABTS自由基清除率的IC50样品SampleDPPHABTSHNVT0.016±0.002e0.065±0.001eSZVT0.263±0.01b1.962±0.06aSSVT0.654±0.01a1.751±0.03bYSVT0.073±0.014c0.615±0.1cYLVT0.065±0.012d0.128±0.020d注：HNVT、SZVT、SSVT、YSVT、YLVT注同图5；同列不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。（5）‘沪桑2号’醇提物体外抑制肿瘤细胞活性对5种不同木屑栽培的桑黄子实体醇提物进行了抑制HepG-2、MCF‐7和Hela三种肿瘤细胞生长的试验，结果见图6。浙江海宁桑树、湖北宜昌桑树和湖北宜昌栎树木屑栽培的桑黄子实体醇提物对几种肿瘤细胞均具有较好抑制效果，并成剂量依懒性。而陕西榆林枣树和陕西榆林桑树木屑栽培的桑黄子实体醇提物对几种肿瘤细胞的抑制活性均较低或无活性。5种醇提物对HepG-2细胞的抑制效果优于MCF‐7和Hela细胞，从对HepG-2细胞的抑制率结果来看，浙江海宁桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体的醇提物具有最好的抑制效果，在高浓度下其抑制率与阳性药物相近，在50µg/mL下，其抑制率也显著高于其它样品，这与子实体中较高的多酚和黄酮含量有关。湖北宜昌桑树和湖北宜昌栎树木屑栽培的桑黄子实体醇提物在高作用浓度下对HepG-2细胞具有较好的抑制效果。从对MCF‐7细胞的抑制率结果来看，陕西榆林枣树和陕西榆林桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物没有抑制MCF‐7细胞的活性，并在一定程度上刺激肿瘤细胞生长。湖北宜昌桑树和湖北宜昌栎树木屑栽培的桑黄子实体醇提物在高作用浓度下对MCF‐7细胞活性具有一定的抑制效果，在低浓度下活性较低。浙江海宁桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物在高浓度下对MCF‐7细胞的抑制率优于阳性药物，并显著高于其它样品。从对Hela细胞的抑制率结果来看，浙江海宁桑树、湖北宜昌桑树和湖北宜昌栎树木屑栽培的桑黄子实体醇提物均有抑制效果，浙江海宁桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物表现更为突出。陕西榆林枣树和陕西榆林桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物没有抑制Hela细胞生长的作用，中低浓度下刺激了细胞活力。有研究表明，桑黄类真菌对炎症、糖尿病、肝癌、衰老和阿尔茨海默病这5种疾病的抗病靶点共486个，其中114个与炎症相关，284个与肝癌相关。从桑黄菌丝体中提取出的黄酮对小鼠肿瘤具有抑制作用，并且具有剂量依赖性。同等药量下，桑黄黄酮的抑制肿瘤活性要高于多糖。桑黄总三萜能同时通过激活线粒体凋亡途径和内质网应激途径诱导MCF‐7、Hela、A549、Caco-2细胞的凋亡。本研究中，五种桑黄样品对肿瘤细胞的抑制作用结果表明，浙江海宁桑树木屑栽培的‘沪桑2号’子实体醇提物对HepG-2、MCF‐7和Hela三种肿瘤细胞都具有最强的抑制效果，这与其较高的总酚、黄酮和三萜含量有关，也说明总酚、黄酮、三萜是桑黄中的主要抑制肿瘤细胞的活性物质。图6‘沪桑2号’子实体醇提物对HepG-2、MCF‐7和Hela细胞抑制率注：SSVT、SZVT、YSVT、YLVT、HNVT注同图5；CK为5-氟尿嘧啶；不同小写字母表示相同质量浓度醇提物比较差异显著（P<0.05）。（2）麸皮麸皮是小麦加工面粉后得到的副产物，主要由小麦的皮层和糊粉层所组成。麸皮中含有较丰富的碳水化合物、蛋白质、淀粉酶系、维生素和矿物质等。麸皮可调节培养料碳氮比，促进原料充分利用，缩短栽培周期，提高产量和质量，因此，在栽培中常作为氮源被广泛使用。麸皮作为常用的原料，掺假现象也比较严重，常掺有滑石粉、稻糠、麦秆屑等杂质，生产上多采用红皮，大片麸皮，因其透气性较好。选用麸皮时要尽可能保证其新鲜度和质量稳定，不使用霉变虫蛀、潮湿结块的麸皮，最好直接向面粉厂订购，避免因为麸皮质量问题导致产质量下降。（3）米糠米糠俗称细糠、青糠，是稻谷脱壳后精碾稻米时的副产物。在糙米生产过程中，米粒从谷壳中剥离出，米粒外表含有淡茶色的皮层，进一步精米加工，将茶色的皮层剥离出来，即成米糠（含有胚芽），混有少量碎米。米糠中油脂的含量为14%～24%；蛋白质为12%～18%；无氮浸出物为28%～43%；水分为7%～14%；灰分为8%～12%。此外，米糠中还富含矿物质、B族维生素和维生素E等，在食用菌栽培中既是碳源又是氮源。米糠脂肪含量高，且大多为油酸及亚油酸等不饱和脂肪酸，容易被脂肪酶分解生成酸性的甘油、磷酸、脂肪酸和胆碱，使米糠氧化酸败。因此，米糠一般就近从本地米厂购买，短时间内使用完，不能储存时间过长，每天检查，发现发热、霉变必须及时处理。质量好的米糠色泽新鲜一致，无发热酸败、霉变、结块、虫蛀及异味，具有淡淡的清香味，颗粒度20目以上不超过10%，口感发甜，入口即化无残渣，不掺有粗糠和其他杂质。（4）玉米粉玉米粉由玉米直接研磨而成，颜色淡黄，口感发甜，入口即化。玉米粉含氮量为1.3%～1.5%，低于米糠、麸皮和豆粕，因此配方中添加玉米粉不是为了增加配方含氮量，而主要是利用其生物素H。研究认为，玉米粉内含有的生物素H，能延缓菌丝细胞的衰老，使栽培包有“后劲”，在不少菌类的栽培中常作为增产剂而得到广泛使用。生产中，尽量购买玉米颗粒自行粉碎，一方面可以保证玉米粉颗粒度，粉碎越细越有利于利用生物素H；另一方面可以保证玉米粉质量，玉米颗粒质量很容易用感官评价，而玉米粉质量却很难通过感官评价。由于玉米粉在储存过程中容易氧化变质，粉碎后短时间内使用完毕，避免积压。使用时，与米糠、麸皮和豆粕粉等辅料一样，应先将玉米粉和其他原材料干混均匀，再加水搅拌，调节含水量。玉米粉添加量一般2%～5%为宜，添加过量，则会延长营养生长阶段，推迟出菇。原辅料应储存在干燥、阴凉、通风、卫生的库房中。材料与地面用垫仓板隔离，预防堆积发热。注意防虫、防鼠、防潮，不应和有害、有毒货物一起储存，严防污染。主要是麦麸、米糠、玉米粉、石膏、轻质碳酸钙等应符合NY5099和NY/T1935中辅料和化学添加剂的规定。生产用水应符合GB5749规定。（四）菌袋制作与培养1、桑黄菌包配方试验表10桑黄菌包配方编号栎树木屑（%）桑树木屑（%）麸皮（%）磷酸二氢钾（%）轻钙（%）17802011268103582044830538406285071860供试菌株：‘沪桑2号’，由上海市农业科学院食用菌研究所提供。试验地点：上海国森生物科技有限公司，位于上海市奉贤区。菌棒制作：采用装袋机装袋，栽培袋规格为17.5cm×35cm×0.005cm，聚丙烯料袋用于高压灭菌。培养料配方见上表，每个配方100包。数据记录：试验过程中及时准确记录装袋重量、长满时间、子实体产量与成品率等数据。数据处理及分析：利用SPSS统计分析软件对数据进行分析处理，采用Excel2019软件进行数据处理。不同配方装袋后重量及理化性质表11不同配方装袋后重量及产量编号装袋重量（g）长满日期（d）出菇前菌包重量（g）子实体产量（g）成品率（%）11097.733.8980.332.69821071.333.4996.434.59731073.332.51003.231.69841056.031.5977.632.99951050.030.7980.530.610061042.729.6997.631.59971037.029.8975.932.897栎树木屑本身pH值较低，接种后桑黄菌丝生长相对较慢，配方间产量差异不大，干重在29.6g～33.8g，部分均包出现污染，差异不明显。2、桑黄菌丝生长条件优化试验根据前期经验与试验，选择在基质含水量为63%，避光及其他培养条件一致的情况下，按20℃、23℃、26℃、29℃共4个温度梯度分别控制培养温度。根据前期经验与试验，选择在温度为25℃时，按58%、60%、62%、64%、66%共5个梯度分别控制基质含水量，每个梯度48包。以上试验均重复3次，探究不同培养温度和基质含水量对菌丝生长的影响，筛选出适宜桑黄菌丝生长的培养温度和基质含水量条件。表12基质含水量对桑黄菌丝生长的影响基质含水量（%）菌丝长势满袋时间/d58++34.860++33.962+++30.564+++29.766++35.8当基质含水量低于58%或高于66%时，桑黄菌丝长满菌袋的时间较长，长速较慢；当基质含水量处于62%～64%时，桑黄菌丝长满菌袋的时间较短，生长速度较快，以基质含水量为62%～64%时生长最好。表13温度对桑黄菌丝生长的影响温度/℃菌丝长势满袋时间/d20++4623++++3026++++2929+35注：+越多表示菌丝长势越好。当温度低于23℃或高于26℃时，桑黄菌丝长满菌袋的时间较长，生长速度较慢，长势较弱；当温度处于23℃～26℃时，桑黄菌丝长满菌袋的时间较短，生长速度较快，长势较强。3、栽培基质制备按计划生产数量和配方中各原料的比例准确称取重量，按照先主料，后辅料的原则顺序投料。利用搅拌机进行两次搅拌，分别为干拌（一次搅拌）和湿拌（二次搅拌）。一次搅拌时投料后先不加水，此时原料粘度低，分散性性好，容易搅拌均匀，搅拌时间一般为10min～15min；二次搅拌是在一次搅拌结束后，向培养料中加水直至所要求含水量，边加水边搅拌，搅拌时间30min～60min。根据木屑种类和颗粒度，基质含水量63%～64%，以灭菌后料棒不积水为宜。栽培基质灭菌前pH值为7.0～7.5。4、装袋宜采用装袋机装袋，栽培袋规格为17cm～19cm×35cm～38cm×0.004cm～0.005cm，低压聚乙烯料袋用于常压灭菌；聚丙烯料袋用于高压灭菌。塑料袋质量符合GB4806.1，GB4806.7的要求。每袋湿料1.0kg～1.2kg，套上菌袋封口环和菌袋封口盖封口。5、灭菌培养料装袋后，应尽快灭菌。高压灭菌温度121℃，灭菌时间2h。灭菌结束后冷却至28℃以下后备用。6、接种接种工具、接种箱、接种区等在使用前后严格清洁消毒，接种过程确保无菌操作，可参照NY/T528执行。打开接种台通风系统，无菌条件下打开盖子，接入15g～20g固体菌种或30mL～35mL液体菌种后迅速盖上栽培袋盖子，移入发菌室内培养。7、培养培养室要求保持洁净、通风、遮光。培养温度控制在23℃～26℃，空气相对湿度50%～60%，二氧化碳浓度控制在0.35%以内，菌包中心温度不超过28℃。菌丝满袋后需后熟培养30d左右，总培养时间60d～70d。当黄色菌丝长满整个袋料或出现突起的瘤状原基时，为袋料培养成熟，可将菌袋移至出菇房或出菇大棚进行出菇管理。（五）出菇管理1、桑黄栽培袋割口方式优化试验选用栽培种培养基，并在无菌条件下接种和适宜环境条件下培养。当桑黄菌丝长满栽培袋并达到生理成熟后割口，栽培袋割口方形口“▭”，宽度1cm、宽度1.5cm、宽度2cm，弧形口“”，宽度2.0cm、宽度3.0cm、宽度4.0cm、宽度5.0cm，观察割口方式与宽度对子实体生长的影响。表14不同栽培袋割口宽度对桑黄子实体生长的影响割口类型与割口宽度（cm）子实体平均产量（g/袋）子实体粘连基质程度未正常形成子实体袋数（个）不正常比例（%）▭/1.08.3极少，容易清除189▭/1.510.5极少，容易清除105▭/2.015.4较多，清除较困难52.5/2.020.5较多，清除较困难73.5/3.035.8较多，清除困难31.5/4.036.9较多，清除困难84/5.030.4较多，清除困难2010注：割口长度8cm～10cm；子实体平均产量为干重；栽培袋割口方形口“▭”，宽度1cm、宽度1.5cm、宽度2cm处理中分别有18个、10个、5个栽培袋未得到子实体；栽培袋割口弧形口“”，宽度2.0cm、宽度3.0cm、宽度4.0cm、宽度5.0cm，分别有7个、3个、8个、20个栽培袋未得到子实体。割口较宽会导致子实体粘连基质程度升高，处理起来比较麻烦，但是相对容易形成子实体，但过宽也会导致料面局部偏干，影响子实体生长。桑黄栽培袋适宜的割口弧形口“”，长8cm～10cm，宽3cm～4cm为宜。2、桑黄菌丝生长条件优化试验桑黄栽培种摆袋培养后，在其他培养条件一致的情况下，按20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃、32℃设计子实体最适温度试验。根据团队前期温度、湿度预试验结果和管理经验，选择在培养温度控制为26℃条件下，按70%、75%、80%、85%、90%、95%共6个梯分别控制空气相对湿度。以上每个处理均重复3次，在出菇150d采集子实体后统计每袋平均产量，研究不同温度和湿度对子实体生长和产量的影响，确定适宜桑黄子实体生长的温度和湿度条件。表15温度对桑黄子实体生长的影响温度/℃子实体平均产量（g/袋）子实体颜色209.6黄色2211.5黄色2428.9黄色2635.4黄色2833.2黄色3026.1黄色3210.3黄色在基质配方组合、割口、湿度等其他管理条件一致的情况下，温度低于24℃或高于30℃时，桑黄子实体生长发育不正常，产量较低；当温度处于26℃～28℃时，桑黄子实体正常生长，产量最高。表16湿度对桑黄子实体生长的影响湿度/%子实体平均产量（g/袋）子实体颜色705.8黄色758.9黄色8014.9黄色8515.4黄色9032.2黄色9536.4黄色基质配方组合、割口、温度等其他管理条件一致的情况下，湿度低于85%时，随着空气相对湿度减小，桑黄子实体产量降低；当湿度为85%～95%时，桑黄子实体生长发育正常，产量较高，其中湿度为95%时，子实体生长最快，产量最高。3、出菇模式（1）出菇室层架出菇模式根据出菇室尺寸与出菇层架尺寸，均匀摆放菌包，菌包间距15cm～20cm。（2）出菇大棚摆地出菇模式将菌包均匀摆放至出菇大棚内65cm～70cm宽度畦面，每排3个菌包，将菌包按照20cm～25cm×15cm～20cm间距摆放，每隔1.2m～1.5m顺大棚延长方向留30cm～40cm作业走道。4、割口菌丝培养成熟后，在距菌袋上沿与下沿两侧2cm～3cm处开弧形口“”，长8cm～10cm，宽3cm～4cm。菌袋与菌袋间隔10cm～15cm，排与排间隔20cm～25cm。5、湿度割口后，湿度控制在90%～95%。加湿时雾滴直径为0.5μm～10μm。切口处若出现水滴，需增加通风。割口后60d～70d，子实体即可生长至70g～80g（鲜重），表面亮黄，饱满，质地较软，此阶段尚未成熟。此后逐步降低空气湿度至85%～90%，维持30d～40d，子实体颜色逐步由亮黄转变为橙黄，质地