急性毒性实验终结版专家讲座

急性毒性试验－LD50

与LC50

测定第1页急性毒性试验试验目标及意义： 确定受试物半数致死剂量LD50/LC50、观察受试物所致急性中毒症状及其毒性作用特点，为深入毒性试验提供主要参考依据。 急性毒性试验染毒方式可有各种，包含经口、经呼吸道、经皮及注射染毒方式等。第2页经口急性毒性试验（LD50）

试验目标

学习急性毒性试验试验设计标准熟练掌握经口灌胃染毒操作技术掌握LD50计算方法和急性毒性分级标准

试验内容动物选择和性别判定称重、编号和随机分组小鼠经口灌胃操作技术

毒性症状观察、LD50计算和毒性分级第3页操作步骤动物选择及性别识别 急性毒性试验普通首选哺乳动物，其中又以大小鼠最为惯用。大、小鼠主要依据肛门与生殖器之间距离来区分。远——♂、近——♀。成年鼠：雄性卧位可见睾丸，雌性可见腹部有12个乳头。动物称重、编号和随机分组应依据统计学标准进行随机分组。12345612...组数只数体重123456789第4页受试物剂量选择对于一个新化学物质，剂量选择可参考同系物毒性或文件资料加以预计，先用少许动物以组距较大一系列剂量进行预试验，找出粗略致死剂量范围，然后再设计出正式试验剂量组受试物配制 此次试验所用受试物是80％敌敌畏(DDVP)原液。按照事先设计剂量分别稀释配制为几个不一样浓度受试物溶液，而各个剂量组动物均给予相同单位体重体积受试化学物。第5页剂量mg/kg

原液量(g)原液量(ml)定容量(ml)原液量(ml)36.440.11390.0813500.094851.020.15940.1139500.132771.430.22320.1594500.18581000.31250.2232500.26031400.43750.3125500.36421960.61250.4375500.5099敌敌畏（DDVP）配制：（组距1.4，给药量0.2ml/10g）（4℃）（25℃）第6页灌胃操作将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者，使动物上消化道固定成一直线毒性作用/中毒症状和动物死亡情况观察 高剂量组动物死亡常很快发生，染毒后应即刻亲密观察。观察和统计中毒症状及出现时间，死亡数量和时间及死亡前特征。按照试验结果，填写急性毒性试验统计表。 中毒症状观察：兴奋、流涎、肌震颤、抽搐、管状尾、呼吸减慢、呼吸困难、四肢无力、站立不稳、大小便失禁、大剂量侧卧以致死亡。第7页 改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计方法，又称Karber法或平均致死量法。本法要求每个染毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈<20%，最高剂量组死亡率>80%。LD50计算（改良寇氏法）第8页 依据试验动物中毒症状、死亡时间、特征和LD50，按受试物种类，分别参考对应经口急性毒性分级标准进行评定，判断该受试物毒性大小及毒性特征。毒性分级及结果评定第9页健康成年小鼠若干只（按每组5~6人，每组10只动物，♂♀各半）、50ml容量瓶(每组1个)、加样器（200μl、1000μl）、加样枪头、DDVP原液、1ml玻璃注射器、灌胃针头（每组2套）、棉签、染液、LD50统计纸、小鼠笼（每组2个）、电子天平（2台）、搪瓷托盘（每组一个）、受试物、苦味酸酒精饱和液、0.5%品红溶液或其它染色剂。试验课所需准备试剂和材料：第10页经呼吸道急性毒性试验（LC50）试验目标学习静式呼吸道染毒操作方法学习测定和计算LC50试验步骤和方法。试验原理（染毒方式）呼吸道吸入染毒可分为两种方式，一个是动式吸入，一个是静式吸入。第11页静式呼吸道吸入染毒：优点：设备简单、操作方便、消耗受试物少、适合用于小动物接触易挥发液态化合物急性毒性研究。缺点：受试物浓度难维持恒定，而且试验动物有经皮吸收可能。动式吸入：优点：能即时补入新鲜空气和排出污浊空气，氧分压，二氧化碳分压，温度、湿度，受试物浓度保持恒定。缺点：设备复杂，消耗受试物多、易污染环境第12页染毒柜内受试物浓度计算注意单位！第13页试剂和材料试验动物及器材健康成年小鼠若干只，（每组10只，♂♀各半），小鼠笼（每组2个）。静式吸入染毒柜6个、吸管、动物秤、统计纸。试剂受试物（易挥发液体，苯（原液））、苦味酸酒精饱和液、0.5%品红溶液或其它染色剂。第14页操作步骤选择健康试验动物，称重（准确到0.1g），编号，随机分组。剂量分组第15页呼吸道吸入染毒：依设计剂量浓度及染毒柜体积，计算需要加入受试物量。将5♂、5♀共10只小鼠→放入静式染毒柜内→加盖（注：每只小鼠每小时所需要气积为3L）。将液态受试物经加药孔加到接物蒸发器（纱布、滤纸、蒸发皿或小型加热器）上→开启小风扇，计时→观察、统计中毒症状和动物死亡情况。染毒结束后，关闭电源，打开盖子，驱走柜内残余含毒空气，取出动物，存活者归笼继续观察。（症状：呕吐、昏迷、抽搐、呼吸麻痹而死亡）LC50计算：同LD50第16页急性毒性试验观察和统计内容主要包含4个方面：中毒体征及发生过程、死亡情况和时间分布、体重和病理形态学改变。 观察和统计中毒症状及出现时间，死亡数量和时间及死亡前特征。急性毒性试验观察周期普通为14天，LD50或LC50计算时以观察周期内各组动物总死亡数为依据。依据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。按照试验结果，填写急性毒性试验统计表。中毒症状和动物死亡情况观察第17页结果评定/结果评价依据试验动物中毒症状、死亡时间、LC50及急性毒作用带，参考对应急性毒性分级标准，评价毒物急性毒性强弱，判断该受试物毒性大