DB34-T 4040-2021 谷物类农产品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050CCSX0434DB34/T4040—2021谷物类农产品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留量的测定液相色谱-串联质Determinationofprothioconazoleanditsmetaboliteprothioconazole-desthioingrains—Liquidchromatography-tandemmassspectrometrymathod2021-09-30发布2021-10-30实施安徽省市场监督管理局发布IDB34/T4040—2021本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。本文件起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（合肥）、安徽省食品药品检验研究院、阜阳市农产品质量安全监测中心、宣城市农产品质量安全中心、潜山市梅城镇农业技术推广站。本文件主要起草人：孙明娜、刘琴芳、范希芹、张俊巍、黄为民、董旭、褚玥、童舟、王梅、段劲生、高同春。DB34/T4040—20211谷物类农产品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法本文件规定了小麦、大米、玉米等谷物类农产品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留量的液相色谱串联质谱法的原理、试剂与材料、仪器和设备、试样制备和储存、分析步骤、结果计算、精密度和定量限。本文件适用于小麦、大米、玉米等谷物类农产品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763-2021食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样中丙硫菌唑和代谢物脱硫丙硫菌唑用乙腈溶液提取后，经吸附剂分散固相萃取净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。5试剂与材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）。5.1.2乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）：色谱纯。5.1.3甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。5.1.4甲酸（HCOOH，CAS号：64-18-6）：色谱纯。5.1.5乙酸铵(CH3COONH4，CAS号：631-61-8)：色谱纯。5.1.6无水硫酸镁（MgSO4，CAS号：7487-88-9）。5.2溶液2DB34/T4040—20215.2.1甲酸水溶液（0.02吸取200μL甲酸（5.1.4加水混匀定容至1L。5.2.2乙酸铵-甲酸水溶液（5mmol/L称取0.388g乙酸铵（5.1.5用0.02％甲酸水溶液（5.2.1）溶解并稀释至1L，摇匀。5.3标准品5.3.1丙硫菌唑（C14H15Cl2N3OS，CAS号：178928-70-6）标准品：纯度≥99.0％。5.3.2脱硫丙硫菌唑（C14H15Cl2N3O，CAS号：120983-64-4）标准品：纯度≥99.0％。5.4标准溶液5.4.1丙硫菌唑标准储备液（1000mg/L）：准确称取丙硫菌唑标准品10mg（精确至0.1mg），用甲醇溶解，定容至10mL18℃及以下条件避光保存，有效期6个月。5.4.2脱硫丙硫菌唑标准储备液（1000mg/L准确称取脱硫丙硫菌唑标准品10mg（精确至0.1mg用甲醇溶解，定容至10mL18℃及以下条件避光保存，有效期6个月。5.4.3混合标准储备溶液（10μg/mL分别吸取适量的丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑的标准储备液（5.4.1，5.4.2用甲醇溶解，配置成浓度为10μg/mL的混合标准储备溶液18℃及以下条件避光保存，有5.5材料5.5.1十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：粒径40μm～60μm。5.5.2有机滤膜：0.22μm。6仪器和设备6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。6.2分析天平：感量0.01g和0.1mg。6.3振荡器。6.4离心机：转速不低于5000r/min。6.5氮吹仪。6.6涡旋混合仪。7试样制备与储存7.1样品测定部位按照GB2763-2021中附录A的规定执行。7.2将不少于1000g样品混匀，四分或分样器分样，放入食品加工机粉碎，过425μm的标准网筛，制成试样，放入聚乙烯瓶或袋中密封，做上标记，按照试样和备样分别置于－18℃及以下条件保存。8分析步骤8.1提取和净化准确称取待测试样5g（精确至0.01g置于50mL离心管中，加入20mL乙腈，振荡30min，5000r/min离心5min，取上清液10mL，用氮气吹至近干，2mL甲醇定容，加入100mg无水硫酸DB34/T4040—20213镁和50mgC18吸附剂（5.5.1）净化，涡旋2min，5000r/min离心5min，取上清液过0.22μm有机滤膜（5.5.2）过滤，待测。8.2测定a)色谱柱：C18柱，50mm×2.0mm（内径）或相当，粒径1.6μm或相当；b)流动相：A相为乙酸铵-甲酸水溶液（5.2.2B相为乙腈溶液（5.1.2）。流动相梯度条件c)流速：0.3mL/min；d)柱温：40℃;e)进样体积：5μL。表1流动相及其梯度条件/(%)a)离子源：电喷雾离子源（ESI）；b)离子源接口电压：正离子4500V；负离子－4500V；c)扫描方式：正离子和负离子同时扫描；d)离子源温度：450℃;e)脱溶剂管温度：250℃;f)雾化气3L/min、干燥气18L/min，均为高纯氮（纯度≥99.999碰撞气氩气230kPa；g)检测方式：多反应监测MRM，多反应监测条件见表2.表2丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑的多反应监测（MRM）质谱参数m/zm/z8.2.3标准工作曲线DB34/T4040—202148.2.3.1将丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑的混合标准储备溶液（5.4.3），用空白基质提取液（8.2）逐级稀释得到质量浓度分别为0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L和1mg/L的系列基质标准溶液，按质量浓度由低至高依次进样测定，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得到标准曲线回归方程。8.2.3.2基质标准溶液需现配现用。8.3定性和定量被测试样中丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品一致，且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物选择的子离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在丙硫菌唑或者脱硫丙硫菌唑。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差>50>20～50>10～20本方法的标准物质LC-MS/MS多反应监测质量色谱图参见附录A。将丙硫菌唑、脱硫丙硫菌唑的混合基质标准溶液和试样溶液依次注入液相色谱-串联质谱仪中，以保留时间和定性离子定性，样品中丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑质量浓度应在基质标准工作曲线质量浓度范围内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析，采用外标法定量。除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。9结果计算试样中的丙硫菌唑和脱硫丙硫菌唑残留量以质量分数ω计，单位为毫克每千克（mg/kg）,按公式(1)或公式（2）计算。DB34/T4040—20215①——试样中丙硫菌唑或脱硫丙硫菌唑残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kgP1——基质匹配标准工作溶液中丙硫菌唑或脱硫丙硫菌唑的质量浓度的数值，单位为毫克每升2——从基质匹配标准工作溶液中得到的试样溶液中丙硫菌唑或脱硫丙硫菌唑的质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；；A——试样溶液中丙硫菌唑或脱硫丙硫菌唑的质量色谱图峰面积；AS——基质匹配标准工作溶液中丙硫菌唑或脱硫丙硫菌唑的质量色谱图峰面积；V——提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；m——试样质量的数值，单位为克（g注：计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数值，当结果大于110精密度10.1在重复性条件下，获得的2次独立测试结果的绝对差值不得超过重复性限（r）,参见附录B。10.2在再现性条件下，获得的2次独立测试结果的绝对差值不得超过再现性限（R）,参见附录B。本文件方法大米、小麦和玉米基质中丙硫菌唑的定量限为0.02mg/kg，脱硫丙硫菌唑的定量限为0.02mg/kg。DB34/T4040—20216参考谱图参考谱图如下：图A.1丙硫菌唑质谱图图A.2脱硫丙硫菌唑质谱图MSChromatogram(x10,000)Intensity2.0020,000342.10>100.20(-)@23322454332245.0.5.5.0.0.5.5.0.0..05n图A.3样品中丙硫菌唑色谱图（小麦添加浓度为0.02mg/kg）DB34/T4040—20217MSChromatogram(x10,000)Intensity2.00312.20>70.312.20>70.