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DB22DB22/T2782—2017犬瘟热病毒检测荧光定量RT-PCR方法DetectionofcaninedistempervirusFluorescencequantitativeRT-PCRmethod2017-12-11发布2018-04-01实施吉林省质量技术监督局发布I1GB/T6682分析实验室用水规RT-PCR:反转录聚合酶链式反应(ReverseTraPCR:聚合酶链式反应(PolymerasHSTaqDNA:热启动脱氧核糖核酸聚合酶(HotStartThermosAquaticusDeoxyribonucleicAcid)DEPC:二乙基焦磷酰胺(DiethyAMV:鸟类成髓细胞白血病病毒反转录酶(AvianMyeloblastosisRetrovirusReverse采取TaqMan方法,以犬瘟热病毒F基因为靶基因设计一对保守的特异性引物和一条特异性的荧这样探针上的R基团游离出来,所发出的荧光不再为Q所吸收而被检测仪所接受。随着PCR反应的2表1犬瘟热病毒荧光定量RT-PC5'-CACAAATCACTGCAGGGAT5'-CAAGGCTAGTTCTCAGAGATTGFAM-TCCAACCTCAATGCTC38.2.2病死犬可采集肺、肝、脾等μLRNA酶抑制剂(5.1.7轻柔混匀,溶解管壁上的RNA,冰上4试验检测结束后,根据收集的荧光曲线和Ct值直接读取检测结果,Ct值为每个反应管内的荧光9.3.3疑似,30.0<Ct值<36.0,出现特定的扩增曲线,样品判为

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