DB13∕T 6195-2025 小麦一年多代、分子标记辅助育种技术规程

ICS65.020.20

CCSB05

13

河北省地方标准

DB13/T6195—2025

小麦一年多代、分子标记辅助育种

技术规程

2025-12-16发布2026-01-16实施

河北省市场监督管理局发布

DB13/T6195—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由河北省农业农村厅提出。

本文件起草单位：河北省农林科学院生物技术与食品科学研究所、河北省种子总站等。

本文件主要起草人：董福双、刘志芳、焦博、杨阳、郑文永、孙雷、马晓丽、周硕、王娇、马春

红、赵璞、朱彦辉。

I

DB13/T6195—2025

小麦一年多代、分子标记辅助育种

技术规程

1范围

本文件规定了小麦一年多代、分子标记辅助育种技术的前期准备、育种方案、幼胚培养、分子

标记辅助育种、分子标记田间辅助选育等技术要求。

本文件适用于小麦一年多代、分子标记辅助育种。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用

文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）

适用于本文件。

GB4404.1-2008粮食作物种子第1部分：禾谷类

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4符号、代号、缩略语

本文件所涉及的主要符号、代号、缩略语的全称及中文释义如下：

ddH2Odoubledistilledwater双蒸水

MASMark-assitedselection分子标记辅助选择

SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠

DNADeoxyriboNucleicAcid脱氧核糖核酸

PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链式反应

5前期准备

仪器

5.1.1DNA提取仪器

核酸提取磨样机、水浴锅、移液器（1ml、100ul、10ul）、涡旋仪、低温高速离心机（最高

转速>10000rpm）和通风橱等。

5.1.2PCR检测仪器

PCR仪、电泳槽及凝胶成像系统。

小麦种植所需设施

5.2.1主要设施设备

光温可控温室。可控温度15℃～35℃；光通量密度60μmol/m2·s～100μmol/m2·s，采

光或光照时间≥14h。

人工气候箱。可控温度6℃～25℃，光通量密度.60μmol/m2·s～100μmol/m2·s。

栽培盆规格。直径25cm、高21cm。

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育种田。土壤类型为壤土，具有良好的肥力，pH值6.0～7.5，排水良好，无盐碱化现象；

育种田应与其他小麦田保持25m以上间隔距离。

生产资料

育苗基质、穴盘、穴盘托等，复合肥、磷酸二氢钾等常用肥料，百菌清、吡虫啉、菊酯类等抑菌

防虫药物。

6育种方案

分子标记的筛选及亲本确定

根据育种目标，利用公共数据库（如：）或文献获得目标基因标记

信息及供体亲本，并对这些标记的可靠性进行验证。

亲本选择

6.2.1受体亲本宜选择适合当地自然和栽培条件的品种及品系，系谱及遗传背景明确，综合农艺性

状优良，且具有较好的配合力。

6.2.2供体亲本宜选择系谱及遗传背景明确，综合农艺性状良好，含有与受体亲本目标性状互补的

质量或主效基因。

6.3育种途径

6.3.1单个基因转育

室内单交(A/B)再连续回交3～4次(BCn)，然后自交2次，BCnF3代以后世代分子标记辅助田间选

择。

6.3.2多个基因聚合

2个基因聚合

亲本各含1个目标基因，室内单交(A/B)后自交2次，F3代以后分子标记辅助田间选择。

6.3.3个基因聚合

每个亲本各含1个目标基因，采用复交的方式。1个亲本分别与另外两亲本杂交，杂交F0再杂交

(A/B//A/C)，然后自交2次，F3代以后世代分子标记辅助田间选择。

7幼胚培养

幼穗选取

取授粉后15d左右的小麦幼穗，选取麦穗中部的6个小穗，去除包被的颖壳备用。

幼粒消毒

在超净工作台中，用1.5%的次氯酸钠进行表面消毒10min～15min，再用灭菌ddH2O冲洗3～4

次。

幼胚获取

在无菌条件下取出完整的幼胚。

胚苗培养

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将剥离的完整胚，盾片向下接种于PM培养基（附录A）中，三角瓶装入30mlPM培养基，每瓶接

种7～10个幼胚。接种好的幼胚在25°C、16h/d光照培养箱中培养3d。

再生植株温室生产

将培养3d的胚苗放入8°C～10°C的培养箱中、每天光照16h，春化30d（注：春性小麦不需

要春化）。

温室小麦盆栽管理

7.6.1供试土壤

取田间中等肥力表层土壤与蛭石按1:1比例混合，施入底肥，混拌均匀备用。

田间土壤要求：土壤质地为壤土或轻壤土，有机质含量1.5%～2.5%；土壤pH值6.0～7.5；全

氮含量0.1%～0.2%；有效磷含量15mg/kg～30mg/kg；速效钾含量100mg/kg～150mg/kg。

7.6.2施肥管理

小麦复合肥（N-P2O5-K2O=26-17-8）按每吨土1kg的量在拌土时施入，并在苗期及孕穗期施每盆

各施5g～10g的氮肥。

7.6.3小麦室内管理

采用栽培盆种植，每盆装供试土壤10kg，每盆定苗8株，于20°C～25°C、16h/d光照栽培，在

小麦苗期及拔节期温度控制在15°C～22°C，孕穗期及以后温度20°C～30°C，土壤含水量60%～

80%。

8分子标记辅助育种

调节亲本花期

父本分三批次种植于温室，每批次种植间隔5d；母本与第二批次父本同时种植。

DNA提取

目标基因转育和聚合过程中，对杂交后代通过春化的幼苗按单株编号，移栽前取部分叶片，采

用常规的SDS方法或商业试剂盒提取DNA。

分子标记检测

依据公共数据库（如：）或文献获得的目标标记信息，设计引物及

确定反应条件，记录检测数据。

目标基因纯合个体选择

根据检测数据进行分析，保留含有目标基因的幼苗进入下一轮杂交或回交，直到聚合到全部的

目标基因，自交2代获得目标基因纯合的单株。

9分子标记田间辅助选育

单株选择

F3/BCnF3～F4/BCnF4点播，选择株高、生育期、成穗数、结实性等农艺性好的优良植株，按单株

收获，再通过比较种子大小、饱满度等进一步选优劣汰。

株行标记确认

F5/BC3F5代种植成株行，每单株种3行，冬前按行内混合取样，提取DNA进行目标基因检测。田间

调查时及在收获前后根据一年多代目标选优劣汰。

比较试验及技术成果应用

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筛选出综合农艺性状优良的品系，进行两个年度比较试验，择优申请参加国家或省级小麦审定

试验；聚合多个优异基因、目标性状优异的品系也可作为创新种质进行保存、共享利用。

4

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A

A

附录A

（资料性）

PM培养基制作

A.1实验室常用仪器、器具

培养箱、高温高压灭菌锅、移液器、称量天平、冰箱(4℃,-20℃,-80℃)、pH测量仪、镊子、

组培瓶、酒精灯，以及PM培养基、蒸馏水、琼脂粉等。

A.2PM培养基配方

表A.1PM培养基配方

名称分子量用量

氯化钙KNO32300mg/L

氯化钾NH4NO3390mg/L

大量元素磷酸二氢钾KH2PO4300mg/L

七水硫酸镁MgSO4•7H2O250mg/L

二水氯化钙CaCL2•2H2O100mg/L

碘化钾KI0.83mg/L

硼酸H3BO36.2mg/L

一水硫酸锰MnSO4•H2O16.9mg/L

契税硫酸锌ZnSO4•7H2O8.6mg/L

微量元素

二水钼酸钠NaMoO4•2H2O0.25mg/L

五水硫酸铜CuSO4•5H2O0.025mg/L

六水氯化钴COCL2•6H2O0.025mg/L

甘氨酸C2H5NO21mg/L

VB1C12H17ClN4OS0.5mg/L

有机

VB6C8H11NO3·HCl0.25mg/L

烟酸C6H5NO20.25mg/L

七水硫酸亚铁FeSO4·7H2O27.8mg/L

铁盐溶液

乙二铵四乙酸二钠Na2-EDTA37.3mg/L

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表A.1PM培养基配方(续)

名称分子量用量