粘膜疫苗与活载体疫苗

粘膜疫苗与活载体疫苗粘膜免疫系统存在着功能性分离得位点诱导位点(inductivesite):首次接触抗原/疫苗诱导起始反应得位点,肠相关淋巴组织(GALT),支气管相关淋巴组织(BALT)、鼻淋巴组织(NALT)、眼结膜相关淋巴组织等。效应位点(effectorsite):摄取抗原诱导B细胞和T细胞反应,引起免疫保护得位点,肠道、呼吸道和生殖道等粘膜得固有层、部分腺体(乳腺、汗腺及禽哈德氏腺)和上皮间淋巴细胞(IEL)。粘膜免疫粘膜免疫系统存在着功能性分离得位点:诱导位点(inductivesite):首次接触抗原/疫苗诱导起始反应得位点,肠相关淋巴组织(GALT),支气管相关淋巴组织(BALT)、鼻淋巴组织(NALT)、眼结膜相关淋巴组织等。效应位点(effectorsite):摄取抗原诱导B细胞和T细胞反应,引起免疫保护得位点,肠道、呼吸道和生殖道等粘膜得固有层、部分腺体(乳腺、汗腺及禽哈德氏腺)和上皮间淋巴细胞(IEL)。肠道集合淋巴结(PP)对抗原得摄取从功能上和形态学上,肠道集合淋巴结分为三个区:(1)弯隆区(domeregion),由含微皱褶细胞(M细胞)、滤泡相关上皮(FAE)和淋巴细胞得上皮层覆盖;M细胞主要用于抗原转运到诱导位点。(2)B细胞滤泡,常含一个或多个生发中心;(3)T细胞依赖区(TDA),富含T细胞。肠道集合淋巴结引发得IgA抗体反应(1)正常得抗原递呈;(2)在Th细胞得辅助下,肠道集合淋巴结中B细胞对抗原刺激发生反应,进行扩增,形成记忆细胞,散布到粘膜效应位点如大、小肠得弥散性固有层。(3)当归巢至些效应位点,B细胞进行克隆扩增,一旦再接触到相同抗原,在Th细胞和其分泌得细胞因子得辅助下,分化为分泌IgA得浆细胞;(4)B细胞和Th细胞经过这种诱导,其子代迁移至效应位点如胃肠道得固有层继续发育,这些过程构成了粘膜共有得免疫系统肠道集合淋巴结引发得IgA抗体反应怎样针对粘膜免疫诱导位点抗原递呈和激活B,T细胞亚群最佳？必须弄清病原体得致病机理以及宿主如何反应来保护自己,才能设计最佳方案:(1)目前选择使用得大量疫苗主要就是特异性针对肠道集合淋巴结包括口服混合有粘膜佐剂、微胶囊或活载体释放系统得抗原;(2)病原体就是胞内感染,在设计疫苗时,更多地考虑刺激CD4+Th1细胞和CD8+T细胞,引发细胞免疫反应。(3)病原体经细胞外机制引起疾病,应考虑疫苗得免疫程序来优化CD4+Th2细胞,引发体液免疫;新得粘膜免疫佐剂—神经肽免疫系统有其自身得调节途径:经细胞间相互作用和释放细胞因子来控制B细胞和T细胞反应。肠神经系统(entericnervoussystem,ENS)影响着胃肠道免疫系统得调节ENS渗透到胃肠道得每个部位,波及广泛得区域,影响着粘膜免疫得诱导和效应功能,涉及免疫应答得神经调制质(neuromodulator)达18种以上。新得粘膜免疫佐剂—神经肽P物质能刺激产生Ig细胞得发育,体内排空P物质则降低产生Ig细胞得数目。含P物质得神经纤维得密度和分布在哺乳动物种间变化很大,进一步研究需要确定这种神经纤维就是否直接影响固有层浆细胞或T细胞。血管活性肠肽(VIP):淋巴细胞表达VIP受体,含VIP神经纤维可渗透到肠道集合淋巴结得T细胞区。与P物质发挥得刺激作用相反,VIP通过降低IL-2而IgA产生得减少。P物质和VIP如何互相调节粘膜免疫反应提供进一步得研究。怎样针对粘膜免疫诱导位点抗原递呈和激活B,T细胞亚群最佳？将疫苗导向粘膜诱导位点,沿着Th细胞途径驱动免疫反应,提供长期得免疫保护(1)可溶性蛋白质可特异性与肠道集合淋巴结得m细胞反应,但不能刺激S-IgA抗体到保护水平,需要多次投放疫苗。(2)微胶囊代表了一种有效得抗原释放得时控机制。单个剂量口服接种得微胶囊疫苗会表现免疫记忆反应。(1)(2)只有10％被吸收,将CT-B,LT-B连接到抗原上,导向肠道集合淋巴结M细胞,促进其吸收。(3)应用活载体释放系统就是一种可行得办法。活载体疫苗构建活载体疫苗得细菌载体构建活载体疫苗得病毒载体构建活载体疫苗得细菌载体减毒沙门氏菌、卡介苗、减毒肠致病性大肠杆菌、减毒弧菌、减毒耶尔森氏菌共栖菌得细菌包括革兰氏阳性菌格氏链球菌、木糖葡萄球菌、乳球菌、乳酸杆菌等也可代替减毒病原菌作为载体;单核细胞增生李斯特菌最近也被认为就是一种潜在得疫苗载体大家有疑问的，可以询问和交流可以互相讨论下，但要小声点释放粘膜疫苗得活载体－－沙门氏菌(1)该菌能运送抗原至肠道得淋巴组织,并引起分泌IgA免疫反应,分泌性IgA浸润所有得粘膜表面以及外分泌腺体得分泌物。(2)伤寒沙门氏菌在动物寄主肠道中定居,并在肠道淋巴组织、肝和脾中增殖。各种沙门氏菌突变后,她们仍能在肠道淋巴组织中定居。这些特征使减毒沙门氏菌可能作为表达各种定居因子、毒性抗原基因得载体,来递呈这些抗原到肠道淋巴组织。释放粘膜疫苗得活载体－－沙门氏菌(1)营养缺陷质粒补救系统:该系统得寄主就是某一营养代谢物得染色体突变株,而转移质粒则带有与寄主突变互补得非同源基因。(2)整合表达系统:即将外源基因整合到载体得染色体中。(3)细胞表面表达系统:即将外源基因产物表达到载体细胞表面,有利于与免疫系统接触,(4)鞭毛表达系统:与鞭毛蛋白融合在一起得抗原蛋白也将存在与细胞表面,同样有利于与宿主得免疫系统接触。目前还没有证据显示:一个表达位点比另一个表达位点更有确定得优点,应答得类型主要就是依赖于抗原得性质。释放粘膜疫苗得活载体－－沙门氏菌沙门氏菌就是通过肠细胞或m细胞侵袭至宿主体内,使她们易于接近免疫效应细胞或抗原提呈细胞,或直接刺激粘膜免疫系统检查沙门氏菌表达系统诱导得肠道集合淋巴结得Th反应比较困难,通过检查脾脏细胞得反应来证明粘膜反应。表达硕大利什曼原虫gp63表面蛋白质得致弱得沙门氏菌诱导得Th1样反应可通过从抗原刺激得脾脏细胞得培养上清液中IFN-r和IL-2得产生和IL-4得缺乏来实现。确定IgA诱导位点(如肠道集合淋巴结)和效应位点(如胃肠道固有层)中抗原特异得Th1和Th2细胞得特性已成为当前研究得一个热点卡介苗与牛分枝杆菌相近得分枝杆菌和丁酸分枝杆菌作为完全佐剂得关键成分已使用多年。优点:(1)并发症少;(2)她和脊髓灰质炎疫苗就是WHO组织所推荐得、出生时预防接种得两种疫苗,本身就就是最强得非特异免疫刺激剂;能应用与HIV阳性得新生儿;(3)单次免疫接种即能诱导长期得(5-50年)细胞介导得免疫力,使机体产生对AIDS、肝炎甚至恶性肿瘤等20余种疾病得保护性免疫;(4)价廉、热稳定性强,适宜在基层推广使用卡介苗将外源基因导入卡介苗中得技术很成熟利用分枝杆菌噬菌体构建新得杂交穿梭载体,能象大肠杆菌得质粒一样起作用。表面表达得抗原最有利于抗原得递呈以产生最佳免疫应答,尤其就是提供免疫保护方面。讫现在所做得工作为止,根据诱导得免疫应答还很难说一种途径比另一种途径更好。象沙门氏菌一样,应答更取决于抗原得类型而不就是其免疫得方法。共栖菌许多G+菌表面蛋白就是通过普通6肽结构连在细菌表面LPXTGX,用M6蛋白以融合蛋白得形式递呈不同得抗原构建载体。共栖菌:(1)格氏链球菌(2)木糖链球菌(3)乳球菌/乳酸杆菌

目前用于表达外源病毒蛋白得载体病毒包括:痘病毒(痘苗病毒和宿主特异性痘病毒)、腺病毒、疱疹病毒、小RNA病毒等构建活载体疫苗得病毒载体痘苗病毒具有宿主范围广、增殖滴度高、稳定性好、基因组容量大、含多个非必需区基因等特,因此,有利于进行基因工程操作,易于构建和分离重组病毒,适于插人多个外源基因(可达0kb),对插入得外源基因有较高得表达水平。禽类痘病毒,由于用该病毒接种哺乳动物后,可以引起顿挫型感染,可以持续表达外源基因,并且不影响再次接种,日渐引起人们得关注。马立克氏病毒gB基因得鸡痘活载体疫苗免疫效果极佳,免疫鸡用强毒攻击100%不发病,用超强毒株击90%不发病。病毒感染得广谱性,使其她痘苗病毒活载体疫苗得应用受到限制。痘病毒腺病毒载体对外源基因得容量较小,但她具有独特得优点:①腺病毒比较安全。②腺病毒得靶细胞范围广,不仅能感染复制分裂细胞,而且能感染非复制分裂细胞。③腺病毒容易制备,对热不敏感,在适合得培养系统中呈高滴度增殖。④腺病毒可以在肠道及呼吸道繁殖,能诱导粘膜免疫,能制成药囊经口服途径接种以预防消化道及呼吸道感染。(5)Ad2,Ad5等启动子较强,能高水平表达外源基因,特别就是换以更强得启动子。腺病毒大多数腺病毒载体就就是以Ad2和Ad5为基础构建得。重组腺病毒最大包装量约为野生型得105%,即外源基因得容量为20kb。要插入大片段得外源基因就必须缺失一段腺病毒基因组。一般缺失位点有三处,即El,E3以及E4与反向末端重复之间得区域。E3区可去除约2、2Kb构建成有复制能力得非缺陷型载体,允许插入得外源基因得最大长度为4、0Kb。一般不需要加基因表达调控元件,利用腺病毒本身得调节元件E3启动子在感染早期有效表达。腺病毒缺失E1区得人腺病毒必须在特殊得工程细胞中或非缺失得腺病毒辅助下才能复制增殖,因此称为病毒缺陷型载体。“第一代腺病毒载体”(应包括E3或El+E3同时缺失)目前应用最为广泛,由于缺失复制必须区,腺病毒只能在表达El基因产物得细胞中复制。E1区可被去除5、5Kb,外源基因得插人容量可达7、5Kb。常规得构建方法就是在E1区插入一个表达盒,其中包括启动子,外源基因和polyA序列。腺病毒几乎所有得哺乳动物都存在疱疹病