《临床基本检验》课件-01 血液检验基本技术

临床检验基础理论课58学时+期中考试2学时（14周）实验课46学时+实验考试2学时（18周）临床检验基础1.40%平时成绩（考勤、实验报告、作业、期中、实验平时考核）2.30%实验考试3.30%期末考试4.课堂随机提问（可加平时分

一次5分）本学期课程安排温故小测课中练习课堂互动课后小测复习总结课外资料邀请码：

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雨课堂本课的信息化平台周别内容分数扣分项目备注14期中考试30分无补考无18实验报告10分迟交、缺交、漏交，1次2分无不定时实验平时考核30分按实际情况执行优秀操作可酌情加分不定时上课考勤10分迟到，早退，无故缺勤，1次扣5分。如需请假

请课前提交假条每周超星作业开放时间为两周20分期中、期末检查，缺1次10分。不允许补做作业无一、平时分（40%）明细表绪论医学检验的发展

从旧石器时代萨满教巫医和医治者的早期开始，也许是30-40,000年或更早以前，人们就通过肉眼观察从机体排出的尿液，以了解机体内发生的事情。埃及人和巴比伦人的文字都提到和描述了尿液的外观、尿量和颜色。古代萌芽期医学检验的发展

希波克拉底是古希腊的医师，被西方尊为“医学之父”，西方医学的奠基人。也是最早的泌尿外科医生，他注意到发烧会改变病人尿液的气味。医学检验的发展古时代，医生意识到尿液，粪便可用于诊断病人，只能肉眼观察、闻一闻或尝一尝或者凭经验判断。光看颜色还不够，还得品尝味道。1674年，英国医生托马斯·威利斯（ThomasWillis）第一个发现，如果一个病人尿是甜的，那大概就是得了糖尿病。他可能有点喜欢品尝的过程，因为他在文献里写道“非常甜，就好像里面加了蜂蜜或糖”。糖尿病一词的英文diabetesmellitus里的mellitus，就是他加进去的，mellitus来源于蜂蜜的拉丁语医学检验的发展显微镜问世奠定微观检验基础

哈维发现血液循环推动血液研究郭霍发明固体培养基分离细菌

比尔定律为定量检测提供理论近代奠基期医学检验的发展

实验诊断——单纯对疾病诊疗提供辅助的实验诊断阶段。

医检最初的形式（化验）只是一个实验台及台子上的瓶瓶罐罐，最高端的也不过是一台显微镜。化验的样品类型也仅包括血、尿、粪三大常规。医学检验的发展蛋白质三级结构、脱氧核糖核酸（分子双螺旋结构）的发现，医学检验又迎来新一轮更深层次的发展；特别是酶联免疫和荧光免疫技术革新，间接提高了检测自动化水平；现代发展期医学检验的发展

医学检验从传统手工作坊式的实验诊断向自动化，快速精准、高通量检验发展，并在辅助临床中有着不可或缺的地位。医学检验医学检验所进行的检验项目均须在实验室（检验科/临床实验室）内完成，主要应用于协助临床诊治疾病，因此又称临床检验。医学检验临床检验的工作任务主要什么？医学检验检验科的组织架构医学检验医学检验通过各种技术、方法和仪器，对人体的血液、尿液、粪便及其他分泌物和排泄物等进行检验分析（一般性状、物理、化学和形态学），满足临床筛查、诊断疾病的需要。任务：用各种方法检测各种临床标本，并将检验结果应用于临床。

一、临床检验基础的任务医学检验我们该以何种心态进行学习？医学检验1、学好相关理论知识，适度拓展知识。2、重视手工操作，加强操作技能训练并规范化。3、加强有形成分观察，提高镜下识别能力。4、强化质量意识（质控）。5、强化生物安全意识。6、注重专业素质、职业道德的培养。二、临床检验基础的学习要求第一章

血液检验基本技术第一节

血液标本采集与处理一、血液标本类型二、血液标本添加剂三、血液标本采集四、血液标本采集与处理质量保证一、血液标本类型1.全血静脉全血：肘前静脉、颈静脉、股静脉动脉全血：桡动脉、股动脉、肱动脉（血气分析）末梢全血：指端、趾、足跟（采血量<0.1ml）2.血浆全血标本经抗凝、离心去除血细胞后的浅黄色半透明液体。主要用于化学和凝血项目检测等4.血细胞主要用于化学和免疫学等项目检测3.血清血液离体后自然凝固分离出来的淡黄色透明液体，与血浆相比，血清主要是缺乏纤维蛋白原及某些凝血因子★。血型鉴定免疫细胞亚群计数免疫功能测定一、血液标本类型血清与血浆的区别？2017血清和血浆的主要区别是（缺乏）红细胞白细胞血小板凝血因子ABCD提交PHE答案解析可为此题添加文本、图片、公式等解析，且需将内容全部放在本区域内。此处添加答案解析单选题1分二、血液标本添加剂血液标本添加剂抗凝剂分离胶促凝剂一、血液标本类型我是血浆，还是血清呢？抗凝：采用物理或化学的方法去除或抑制某种凝血因子的活性，以阻止血液凝固的方法称为抗凝。（一）抗凝剂血细胞抗凝剂：能够阻止血液凝固的化学物质称为抗凝剂或抗凝物质。标准真空采血管采用国际通用头盖和标签颜色（9种）名称色标添加剂实验用途

紫色EDTA-K2原理：与血液中的Ca2+结合作用于凝血因子1.一般血液学检验2.不适合做凝血因子和血小板功能检验★浅蓝色枸橼酸钠原理：与血液中的Ca2+结合不作用于凝血因子凝血实验（能保护凝血因子）★

血液保养液（体积比1:9）★黑色枸橼酸钠（柠檬酸钠）血沉实验（体积比1:4）★EDTA抗凝管枸橼酸钠凝血管枸橼酸钠血沉管掌握标准真空采血管采用国际通用头盖和标签颜色（9种）名称色标添加剂实验用途

绿色肝素/肝素锂原理：加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶作用★1.红细胞脆性、红细胞压积、生化检测2.不适合做凝血功能、白细胞计数和分类计数★

灰色草酸钾、氟化钠（抑制糖酵解）★原理：与血液中的Ca2+结合血糖测定肝素抗凝管草酸钾/氟化钠管45双草酸盐草酸钾---使红细胞体积缩小草酸铵---使红细胞体积扩大临床不用掌握对检验结果的影响枸橼酸钠不破坏凝血因子，不影响血细胞需遵循1:9（凝血）、1:4（血沉）比例EDTA-K₂对血细胞影响最小；抑制血小板聚集；长期存红细胞皱缩，但不影响核心指标肝素不影响生化指标，适合急诊；干扰凝血检测可致白细胞聚集(背景变蓝)草酸盐草酸钾致红细胞皱缩，草酸铵致肿胀，双草酸盐平衡但影响形态草酸根干扰生化项目（钙、镁测定）标准真空采血管采用国际通用头盖和标签颜色（9种）掌握名称色标添加剂实验用途橘红色促凝剂激活纤维蛋白酶，使可溶性的纤维蛋白转变为不溶性的纤维蛋白急诊血清生化项目检测（快速分离血清）金黄色惰性分离胶/促凝剂比重介于血清和血细胞之间，离心后在血清和血块之间形成隔离层★急诊血清生化项目检测（快速分离血清，固液分离，血清成分稳定，但成本高）

浅绿色惰性分离胶和肝素电解质，常规血浆生化ICU急诊血浆生化检测（快速分离血浆）血浆分离管（二）促凝剂与分离胶快速血清分离管惰性分离胶促凝管678掌握名称色标添加剂实验用途红色未加常规生化、血库和血清学相关项目检测无热源试管/热源试管

白色

未加内毒素试验普通血清管9标准真空采血管采用国际通用头盖和标签颜色（9种）一、血液标本类型提问1.抗凝剂中通过与血液中的Ca2+结合有哪些？抗凝血酶的有哪个？2.促凝管中分离胶的主要作用？3.抗（促）凝血液离心后的上层液体？我是血浆，还是血清呢？血细胞掌握一、血液标本类型红无黄促蓝凝绿肝紫

E灰糖黑沉2013/2015枸橼酸钠用于血沉检査时，其与血液的比例是1:21:41:61:8ABCD提交1:9E单选题1分

不与钙离子结合的抗凝剂是枸橼酸钠EDTA-Na2EDTA-K2肝素ABCD提交草酸钠

E单选题1分2012凝血检查应选用的抗凝剂是[填空1]

血细胞计数应选用的抗凝剂是 [填空2]

血液保存应选用的抗凝剂是[填空3]

A.枸椽酸钠 B.草酸钠C.双草酸盐D.肝素E.EDTA-K2

作答填空题3分三、血液标本采集

血液标本采集静脉采血法皮肤采血法动脉采血法三、血液标本采集毛细血管采血法末梢采血法皮肤采血法采血针激光皮肤三、血液标本采集（一）皮肤采血法【采血部位】成人：左手无名指或中指内侧

--WHO

婴幼儿：拇/趾或足跟烧伤者：完整皮肤1、采血针皮肤采血法三、血液标本采集1.一次性专用采血针2.微量吸管【主要器材】1、采血针皮肤采血法新型采血针三、血液标本采集三、血液标本采集1、材料准备2、选择采血部位3、按摩（天气冷时多用）4、消毒---75%酒精5、刺针---采血针一次性使用6、采血---微量吸管、离心管7、止血---棉签按压5min1、采血针皮肤采血法三、血液标本采集①采血时必须注意严格消毒和生物安全防范★。②采血针应为一次性使用的“专用采血针”，针刺深度以2～3mm为宜。③取血时可稍加挤压，但切忌用力过大，以免使过多组织液混入血液中★。④采血要迅速，防止流出的血液发生凝固。⑤手工法血液标本采集顺序为：【注意事项】血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、白细胞分类计数、血型鉴定等。优点：无交叉感染、痛感轻、工作强度低三、血液标本采集2015/2017WHO推荐的婴幼儿皮肤采血部位是[填空1]

2014/2016

WHO推荐的成人皮肤采血部位是[填空2]

A.耳垂B.大拇指

C.无名指D.足跟内外侧E.任何皮肤完好部位作答填空题2分三、血液标本采集静脉采血法临床应用广泛，所采集的静脉血能准确反映全身血液的真实情况，因其不易受气温和末梢循环变化的影响，更具有代表性。1、普通采血法即传统的静脉采血方法。（1）主要器材：注射器、试管、消毒用品等。普通采血法负压采血法三、血液标本采集1、普通采血法（2）采血部位：通常采用肘部静脉★。当肘部静脉不明显时，可采用手背部、手

腕部和外踝部静脉。幼儿可采用颈外静脉采血，其它：股静脉、大隐静脉及锁骨下静脉等。肘部静脉三、血液标本采集（1）主要器材：双向采血针真空采血管（2）采血部位：同普通采血法★。软接式硬接式优点：定量准确、传送方便、封闭无菌、标识醒目、刻度清晰、容易保存等，符合生物安全措施。2、负压采血法（ICSH推荐★）又称为真空采血法三、血液标本采集真空采血类型三、血液标本采集1、普通采血法材料准备（3）简要操作选择静脉扎压脉带消毒穿刺抽血止血放血与混匀三、血液标本采集材料准备（3）简要操作选择静脉扎压脉带消毒穿刺针端穿刺混匀或不混匀血液退出刺塞针端针头刺塞针端刺入采血管止血退出穿刺针端针头2015/2017静脉采血首选的部位是手背静脉内踝静脉肘部静脉股静脉ABCD提交头皮静脉E单选题1分三、血液标本采集（4）注意事项：采血顺序★使用玻璃采血管多管采集血液标本的分配顺序为：血培养管、无抗凝剂血清管（玻璃可促发凝血）、枸橼酸钠抗凝管、其他抗凝剂管；使用塑料采血管分配顺序：血培养管（黄色）、枸橼酸钠抗凝管（蓝色）、加或未加促凝剂或分离胶的血清管、加或未加分离胶的肝素管（绿色）、EDTA抗凝管（紫色）、加葡萄糖分解抑制剂管（灰色）。三、血液标本采集一个男人（蓝）很黑，过红橙黄绿灯要听指（紫）挥（灰）三、血液标本采集3、红外静脉采血系统4、全自动智能采血系统三、血液标本采集1．主要器材：2ml或5ml注射器（准备l000U/ml无菌肝素生理盐水溶液，以湿润注射器内腔、橡皮塞），或一次性动脉采血针、消毒用品等。2．采血部位多选用桡动脉（最方便）★股动脉、肱动脉。3．简要操作桡动脉采血血气分析三、血液标本采集4.注意事项：①隔绝空气：用于血气分析的标本，采集后先立即封闭针头斜面，再混匀标本。②立即送检：标本采集后应立即送检，否则应将标本置于2～6℃保存，但保存时间不应超过2小时。③防止血肿：采血完毕，拔出针头后，用消毒干棉签用力按压采血处止血，以防形成血肿。三、血液标本采集项目皮肤采血法静脉采血法动脉采血法采血部位手指、耳垂、足跟（婴幼儿）肘前静脉、手背/前臂静脉桡动脉、股动脉、肱动脉采血量少量（0.1-0.5mL）较多（2-20mL）少量（1-2mL）适用项目血常规、快速血糖等少量用血项目生化、免疫、凝血等多项目检测血气分析（血氧、酸碱平衡等）临床侧重常规快速筛查、婴幼儿检查常规体检、住院患者全面检测呼吸衰竭、休克等危重症血气评估四、血液标本采集与处理质量保证（一）检验申请（二）待检者准备（三）标本采集（四）标本运送（五）血液标本预处理与保存（六）标本接收与拒收（七）检验后保存（八）检验后处理分析前、分析中、分析后三个阶段四、血液标本采集与处理质量保证（四）血液标本运送生物安全原则唯一标识原则及时运送原则运送方式人工、轨道、气压管道、机器人唯一标识四、血液标本采集与处理质量保证机器人气压管道轨道四、血液标本采集与处理质量保证抗凝标本凝固（六）血液标本接收与拒收采集容器不当

标本污染、容器破损

申请单和标本标识不一致

采血量不足或错误

溶血转运条件不当

抗凝剂使用错误

四、血液标本采集与处理质量保证四、血液标本采集与处理质量保证

检验后废弃的血液标本处理严格按照国家标准《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008），由专人负责处理，根据《医疗废物管理条例》规定使用专用的容器或袋子包装，由专人送到指定的地点集中处理。检验后废弃的血液标本一般由专门机构采用焚烧的办法处理。（八）处理细胞显微镜计数案例

今年夏天，医院来了个20岁的大学生，外出旅游归来连续3天发烧不退，浑身没力气，还总说头晕。医生先让他查了血常规，结果出来后，白细胞计数正常，红细胞计数却偏低。由于结果反常，医生又让检验科做了血涂片在显微镜下一看。在显微镜下一看，发现红细胞里有疟原虫的踪迹！原来这位同学暑假去云南旅游时被蚊子咬了，感染了疟疾。第一章

血液检验基本技术第二节

细胞显微镜计数一、计数方法二、方法学评价三、质量保证四、临床应用细胞显微镜计数血细胞分析仪显微镜计数法（最基本）

一、计数方法将血液或其他体液标本直接或经过适当处理（稀释、浓缩、染色等），充入计数板内，在显微镜下计数一定范围内的细胞数，经换算求出体积内的细胞总数。1．原理xx个/L改良牛鲍计数板---最常用定量尿沉渣计数板精子计数板一、计数方法2．器材（1）改良牛鲍计数板（2）改良牛鲍计数板专用盖玻片（血盖片）（3）微量吸管（4）显微镜一、计数方法改良牛鲍计数板（细胞计数板）液面高度为

0.1mm盖玻片一、计数方法大方格中方格小方格每个大方格体积=1X1x0.1=0.1mm3=0.1μL计数池白四角，红中央一、计数方法计数白细胞的四个大方格

四个角的大方格都用单线划分为16个中方格，为计数密度小的（白）细胞用。容量：0.1μl/大方格0.00625μl/中方格一、计数方法计数红细胞的五个中方格中央的一个大方格，用双线划分为25个中方格，每个中方格又被单线划分为16个小方格，共有400个小方格，供计数密度大的（红）细胞用。容量：0.1μl/大方格

0.004μl/中方格0.00025μl/小方格一、计数方法（1）取小试管１支，加入白细胞稀释液0.38ｍｌ。（2）用微量吸管准确吸取外周血20µl。（计算稀释倍数？）（3）擦去管尖外部余血，立即将吸管插入盛有稀释液的试管底部，轻轻将血放出，并吸取上清液漱洗吸管２次～３次，注意每次不能冲浑稀释液，最后用手振摇试管混匀。3.操作方法---以白细胞计数为分例一、计数方法

（4）充池将计数板和盖玻片擦净，盖片盖在计数池上，用毛细滴管或玻璃棒取已混匀的细胞悬液1滴，充入计数池与盖玻片间的缝隙中，静置2min～3min，待白细胞下沉。盖玻片放入方式为“推入式”，而不是“放入式”一、计数方法（5）计数方法用低倍镜依次计数四角的四个大格内的白细胞数。对于压边线的白细胞，应采取数上不数下；数左不数右（左、上计入，右、下弃去）的原则，保证计数域的一致性，使计数准确。一、计数方法请根据计数原则并按一定的顺序进行计数一、计数方法让我们共同计数下列大格的细胞30个二、方法学评价细胞显微镜计数法优点:操作简便、设备简单、费用低廉，适用于日常检验量少的基层医院和分散检测；缺点:费时、费力，受计数板质量、细胞分布状态以及操作者技术水平等诸多因素的影响，精密度和准确度较低，不适用于大批量标本的测定，在临床上逐渐被血细胞分析仪取代。多数用于人工复检三、质量保证（2）固有误差？即计数域误差（计数工具

测量工具）①器材、试剂不合要求②采血与取血不当③稀释倍数不准④充池不当⑤细胞计数不准确------计数误差（1）技术（偶然）误差？P17表1-6由于操作不规范和/或技术不熟练所造成的误差。通过主观努力可以避免或减少每次充液后细胞在计数池分布不可能完全相同所造成的误差。2012关于血细胞计数误差来源，不属于偶然的误差的是取血部位不当

稀释倍数不准确充液不当计数板刻度误差ABCD提交计数时未充分混匀E单选题1分2016下列不属于细胞计数技术误差的是取血部位不当稀释倍数不准用已经校准吸管充液外溢ABCD提交充池后盖玻片移动E单选题1分四、临床应用嗜酸性粒细胞计数管型计数血液红细胞计数白细胞计数血小板计数尿液红细胞计数白细胞计数其他体液：CSF、浆膜腔液、精液等细胞计数第一章

血液检验基本技术第三节

血涂片制备与染色一、血涂片制备二、血涂片染色一、血涂片制备

血涂片是血细胞形态学检验的重要手段，用于红细胞、白细胞和血小板形态等检验。一、血涂片制备

（1）新玻片1mol/LHCl泡24小时→水洗→干燥。（2）旧载玻片肥皂水或其他合成洗涤剂水中煮沸20分钟→热水洗→自来水洗→干燥。(→95%乙醇泡1小时→蒸馏水洗→干后备用)。【载玻片的清洁】（一）主要器材1、载玻片目前的玻片基本为一次性使用2、推片---比载玻片窄且边缘光滑、整齐一、血涂片制备薄血膜推片法（多用）手工法仪器法---自动涂片法厚血膜推片法1.采血2.取血3.散血4.推片5.干燥

一、血涂片制备一、血涂片制备一、血涂片制备【厚血膜推片法】1.采血2.取血滴置于玻片中央，用推片的角将血滴由内向外涂布，制成直径约1.5cm大小的圆形厚血膜3.干燥4.滴加蒸馏水覆盖血膜，溶解红细胞5、倾去水，干燥---主要用于疟原虫的检验，同时作薄血膜推片一、血涂片制备疟原虫的检验一、血涂片制备自动血涂片机一、血涂片制备（三）方法学评价【厚血膜推片法】---少用，主要用于提高寄生虫的检出率【薄血膜推片法】---常用，主要用于形态学观察---P20表1-7【自动推片法】---省时，省力，但成本高按需使用一、血涂片制备（四）影响因素---质量保证1.血涂片的质量要求判断标准厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，血膜边缘要整齐，留有一定的空隙一、血涂片制备3.血滴大小（标本）4.推片与载玻片之间的角度5.推片时的速度推片边缘不整齐载片不清洁2.玻片6.制片后处理干燥、固定、标记一、血涂片制备血滴大，角度大，速度快则血膜越厚，越短血滴小，角度小，速度慢则血膜越薄，越长HCT高，黏度高→应采用小血滴、小角度、慢推;HCT低，黏度低→应采用大血滴、大角度、快推；红细胞比容（Hct）血滴？角度？速度？贫血真性红细胞增多症影响血涂片制备的因素，下列哪项除外血滴大小推片速度染色时间推片与玻片的角度ABCD提交用力是否均匀E单选题1分一、血涂片制备HCT高，黏度高→HCT低，黏度低→提问分别该如何推片？血滴大小？角度？速度？二、血涂片染色瑞特（氏）染色法吉姆萨染色法瑞-吉混合染色法目的：便于识别细胞方法对细胞质着色效果好对细胞核着色效果好兼有前两者优点，常用【试剂组成】（1）伊红（品红）通常用伊红钠盐（Ｎａ+Ｅ－）其有色部分是伊红，为阴离子。（2）美蓝又名亚甲蓝，通常为氯盐（Ｍ+Ｃl-）。其有色部分是美蓝，为阳离子。瑞特染色试剂盒（一）瑞特染色法1.瑞特染色液溶于甲醇而成酸性伊红碱性美蓝二、血涂片染色二、血涂片染色美蓝和伊红的水溶液混合后，生成一种疏水性伊红化美蓝的中性沉淀物，即瑞特染料，其反应式为：瑞特染料水ＭＣl＋ＮａＥ－－→ＭＥ↓＋ＮａＣlＭＥ－－→Ｍ+＋Ｅ-红色甲醇蓝色甲醇的作用作为溶剂加强着色---增强细胞