1.2.2微生物的选择培养和计数（第2课时） 课件高二下学期人教版生物选择性必修3

1.2.2微生物的选择培养和计数（第2课时）1.什么是选择培养基？2.对微生物进行计数的方法及误差分析？稀释涂布平板法（偏小)显微镜直接计数（偏大)(C÷V)×M方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供计数用。中方格16个每个中方格有小方格25个大方格边长为1mm，深度为0.1mm1个计数室有

个小方格。1个计数室的体积为

mm3=

ml1mL培养液所含菌数＝血细胞计数板0.14001×10-4每小格平均菌数×400×104×稀释倍数内容显微镜直接计数法间接计数法（稀释涂布平板法）主要用具计数依据优点计算公式缺点结果微生物的计数方法比较显微镜、细菌计数板或血细胞计数板涂布器、培养基细菌本身的个数培养基上菌落数计数方便、操作简单计数的是活菌每毫升原液含菌株数＝每小格平均菌株数×400×104×稀释倍数每克样品中的菌株数:(C÷V)×M

C:某稀释度下平板上生长的平均菌落数;V:涂布平板时所用的稀释液的体积(mL);M:稀释倍数不能区分死菌与活菌当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落比实际值偏大比实际值偏小提出问题（实验目的）（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。（2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。实验原理土壤中分解尿素的细菌的分离与计数阅读19页，思考下列问题：1、你打算选择什么样的土壤做实验？为什么取样时要铲去表层土壤？2、在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？3、测定土壤中细菌的总量和能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？4、为什么要每24小时统计一次，且选择菌落数目稳定时的记录作为结果？5、如何设置对照组检测培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落？防止因培养时间不足导致遗漏菌落的数目土壤中分解尿素的细菌的分离与计数测细菌数：一般用104、105、106稀释液测放线菌：一般用103、104、105稀释液测真菌数：一般用102、103、104稀释液①1、2、3是

（实验组）作用：

。对目标微生物进行分离和计数本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如：注明组别、培养日期和稀释度。接种的选择培养基

实验还要设置

个

对照。②4是

(对照组)作用：

。①

。②

。作用：

。空白不接种的选择培养基不接种的牛肉膏蛋白胨培养基验证培养基是否有杂菌污染判断选择培养基是否具有选择作用接种的牛肉膏蛋白胨培养基2一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如

等形状、大小和颜色结果：稀释度104105106107123平均值123平均值123平均值123平均值菌落数/平板土壤中分解尿素的细菌的分离与计数选择的组别：保证有3个或3个以上菌落为30-300的平板，再进行计数思考：得到的菌落一定是能分解尿素的细菌吗？不一定①还可能是固氮菌②其他从分解尿素的细菌的代谢物中获取氮源的微生物。CO(NH2)2

+H2O2NH3

+CO2

脲酶氮源尿素

作为分解尿素的细菌的碳源不能土壤中分解尿素的细菌的分离与计数资料：细菌合成的脲酶将尿素分解为NH3

，NH3会使培养基的碱性增强，pH升高，可以通过检测培养基pH的变化来判断是否发生了该化学反应。液体培养基可以直接看液体的变色情况；固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带，

红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。酚红可用作酸碱指示剂，其变色范围较为明确。在低pH值时（如pH<6.8），酚红呈现黄色；在高pH值时（如pH>8.4），则呈现红色。在pH值6.8至8.4之间，酚红会呈现橙色过渡色。土壤中分解尿素的细菌的鉴定淀粉培养基鉴别培养基：在培养基中加入某种指示剂或化学药品（不影响微生物正常生长），使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应。从而达到鉴定的作用。伊红—亚甲基蓝琼脂培养基鉴别大肠杆菌，大肠杆菌菌落呈现深紫色，并有金属光泽土壤中分解尿素的细菌的鉴定鉴别能分解淀粉的微生物出现透明圈P30项目选择培养基鉴别培养基原理用途举例图示加入不影响甚至促进目标微生物生长，或者改变培养条件等，抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质，加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应培养、分离出目标微生物鉴别不同的微生物培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌生长；用以尿素作为唯一氮源的培养基来培养尿素分解菌可用伊红—亚甲蓝琼脂培养基鉴定饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并有金属光泽)2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%～60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈（如下图所示）。请回答下列问题。拓展应用土壤取样→富含纤维素的环境→以纤维素为唯一碳源，增加目的菌浓度

（选择培养基）→制备系列稀释液筛选产生透明圈的菌落制备培养基涂布平板→添加刚果红作为指示剂

（鉴别培养基）梯度稀释挑选（1）现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。恒温培养几种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈拓展应用如树林中多年落叶形成的腐殖土等。→牛肉膏蛋白胨培养基

（完全培养基）（3）有同学说，可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。可行，这是人工设置适合纤维素分解菌生存的环境，腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。拓展应用3.云南民间常用酸角汁参与传统腐乳的制作，其独特风味深受喜爱。下列叙述错误的是BA．酸角汁中的酵母菌等多种微生物可参与豆腐的发酵B．高盐腌制的目的是抑制杂菌并促进毛霉繁殖C．豆腐可为微生物的生长繁殖提供碳源、氮源和能量D．腐乳易消化与蛋白质被分解成小分子有关18（1）从微生物培养的角度来看，豆腐应该属于

。培养基19（2）从微生物培养的角度分析，黑枸杞果汁能够为酵母菌的生长提供水、无机盐和

_。氮源、碳源腐乳发酵原理：蛋白质小分子肽+氨基酸脂肪甘油+脂肪酸脂肪酶蛋白酶腐乳的特点：味道鲜美，有机物种类

，含量

，营养价值高，易于消化吸收，而腐乳本身又便于保存。增加减少B．高盐腌制的目的是抑制杂菌并促进毛霉繁殖（×）让豆腐长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制4.下列关于腐乳和臭豆腐制作的叙述正确的是CA．腐乳和臭豆腐都是经过微生物发酵制作并具有独特风味的淀粉食品B．多种微生物参与了腐乳和臭豆腐的发酵过程，起主要作用的都是真菌C．控制发酵温度的主要目的是利于参与腐乳和臭豆腐发酵微生物的生长和代谢D．与发酵之前的物料相比，腐乳和臭豆腐中的有机物种类和能量都有所增加（主要含蛋白质和脂肪）能量减少臭豆腐发酵：核心发酵过程由细菌主导，尤其是厌氧菌（如变形杆菌、大肠杆菌等）。这些细菌能分解蛋白质产生氨基酸（增加鲜味），同时分解含硫有机物产生硫化氢（形成特殊“臭味”）。10.味精的主要成分是谷氨酸，利用谷氨酸棒状杆菌通过发酵可以产生谷氨酸，进而获得味精，通过发酵罐发酵可以大规模生产谷氨酸。下列有关谷氨酸发酵过程的叙述，不正确的是AA．配制高浓度营养物质的培养基，会使谷氨酸棒状杆菌大量繁殖B．常用的谷氨酸棒状杆菌为好氧细菌，因此培养基中需严格控制溶解氧、通气量等发酵条件C．排出发酵罐中的谷氨酸，有利于谷氨酸的合成和产量的提高D．谷氨酸发酵的培养基成分主要有水、碳源、氮源、无机盐等外界溶液渗透压过大，会导致谷氨酸棒状杆菌失水维持在一个特定、稳定的最佳范围即可12.下列有关实验室微生物培养的操作的叙述正确的是AA．抗生素通常是在培养基灭菌完稍冷却后，经过滤除菌后加入的B．培养乳酸菌时，平板倒置培养是为了给乳酸菌创造无氧环境C．牛肉膏蛋白胨培养基有丰富的碳源、氮源，常用于接种蓝细菌、酵母菌D．干热灭菌比湿热灭菌的温度高、时间长，培养基干热灭菌效果更好平板倒置：防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。防止水分过快蒸发高压蒸汽灭菌压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min补充信息：抗生素在高温下易失活微生物纯培养的步骤：配置培养基、（调pH）、灭菌、接种、分离和培养等滤膜的孔径为0.1-0.3µm（细菌等过不去）过滤灭菌9.为研究添加有机酸对泡菜品质的影响，研究者以未添加有机酸的发酵萝卜泡菜为对照，在老母水（反复使用的泡菜水）中添加0.089mol/L的不同有机酸（乳酸、乙酸、柠檬酸）来制作发酵萝卜泡菜，错误的是D

B．加入柠檬酸能促进泡菜的发酵，且比CK组的亚硝酸盐含量低D．加入3种有机酸，均可加速发酵进程且加入乙酸效果最佳还原糖的作用：提供能量和原料17.（9分）泡菜含有丰富的维生素和钙、磷等。如