高三一轮复习生物：微生物的培养技术与应用课件

微生物的培养技术与应用生物

大一轮复习第50课时微生物的基本培养技术<考点一>划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物天然培养基合成培养基固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基鉴别培养基一般都含有碳源、氮源、水、无机盐碳源无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等自养微生物异养微生物功能：①构成细胞物质和一些代谢产物②有机碳既是碳源又是能源。氮源无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等功能：主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等。含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源。无机盐功能：提供无机营养

调节PH

维持渗透压水功能：良好的溶剂

维持生物大分子结构的稳定

考点一

微生物的培养技术及应用知识点一、培养基的配制1.培养基的配方：特殊条件：pH、O2和特殊营养物质例：

生长因子、氨基酸、维生素、碱基等“个性定制”

考点一

微生物的培养技术及应用知识点一、培养基的配制1.培养基的配方：④培养厌氧微生物时，需要提供_____的条件。①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加_______；②培养霉菌时，需要将培养基调至_____；③培养细菌时，需要将培养基调至_____________；维生素酸性中性或弱碱性无氧

考点一

微生物的培养技术及应用知识点二、无菌技术1.目的：2.关键：3.方法：获得

的微生物培养物。纯净防止

污染。杂菌消毒与灭菌项目消毒灭菌作用强度较为

的理化因素

的理化因素作用程度杀死物体表面或内部________

微生物杀死物体内外的

微生物芽孢和孢子一般不能杀灭能杀灭温和强烈一部分所有

考点一

微生物的培养技术及应用知识点二、无菌技术3.方法：消毒与灭菌适用对象实验操作的空间、操作者衣着和双手微生物培养器皿、接种用具和培养基等项目消毒灭菌【教材隐性知识】教材隐性知识：源于选择性必修3P10“相关信息”：生物消毒法是指利用生物或其_________除去环境中的部分微生物的方法。代谢物知识点二、无菌技术4.消毒与灭菌的比较：类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物(不包括芽孢、孢子)强烈的理化方法，杀死所有微生物(包括芽孢、孢子)煮沸消毒法日常生活用品100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体63～65℃煮30min或72-76℃处理15s或80-85℃处理10-15s化学药物消毒法生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线消毒法紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃热空气维持1～2h湿热灭菌培养基、培养皿等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121℃,15～30min接种室、接种箱，超净工作台选择无菌技术的原则：一要考虑无菌技术的效果，灭菌的效果比消毒要好；二要考虑操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。

考点一

微生物的培养技术及应用知识点三、微生物的纯培养1.酵母菌纯培养的操作步骤：15～20g琼脂湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法干热灭菌灭菌前调pH

考点一

微生物的培养技术及应用知识点三、微生物的纯培养2.酵母菌纯培养的操作步骤：酒精灯火焰灼烧灭菌

考点一

微生物的培养技术及应用知识点三、微生物的纯培养2.酵母菌纯培养的操作步骤：防止水分蒸发过快，防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染倒平板注意事项：温度：50℃左右冷凝后平板倒置操作：在酒精灯火焰附近平板划线法恒温培养箱28做对照，检测培养基灭菌是否合格

考点一

微生物的培养技术及应用知识点三、微生物的纯培养2.酵母菌纯培养的操作步骤：知识点三、微生物的纯培养3.平板划线法操作步骤：第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌12345①接种环只蘸一次菌液,在培养基不同位置连续划线多次②划线首尾不能相接③每次划线前接种环进行灼烧灭菌，待冷却后再开始划线④划线后,培养皿倒置培养【平板划线法注意事项】(1)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。

考点训练

(1)不含氮源的平板不能用于微生物培养(2023·山东，15A)(

)×判断正误(2)可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌(2022·湖北，4D)(

)(3)接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃(2023·山东，15C)(

)√×分析微生物平板划线和培养的具体操作微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，据图回答下列问题：关键能力提升(1)图示①～⑧中不正确的操作及其原因分别是什么？提示

②拔出棉塞后完全握住棉塞会造成杂菌污染，应握住棉塞上部；⑥划线时不能将培养皿完全打开，应在火焰附近将培养皿打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖；⑦划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连；⑧平板应倒置培养。(2)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？提示

划线后，线条末端菌种的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使菌种的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个微生物繁殖而来的菌落。(3)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？提示

需要；划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。考向一微生物的基本培养技术1.(经典高考题)为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是A.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整B.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取

单菌落C.该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的D.菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色√迁移应用评价2.(2025·怀化质检)某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的固体培养基上轻轻按一下，然后用肥皂将该手洗干净，再将这5个手指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。下列相关叙述错误的是A.这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有培养皿和培养基等B.“将手指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的接种C.从实验结果来看，洗手后的操作不会污染培养基D.培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的√微生物的选择培养和计数<考点二

>

人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。1.实验室中微生物筛选的原理：2.选择培养基的概念：加入青霉素的培养基不加氮源的无氮培养基不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物分离固氮菌分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离能消除石油污染的微生物加高浓度食盐石油是唯一碳源

考点二

微生物的选择培养和计数知识点一、选择培养基项目选择培养基鉴别培养基原理用途举例图示加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应培养、分离出目标微生物鉴别目标微生物培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌可用伊红亚甲蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈黑色)

考点二

微生物的选择培养和计数知识点二、选择培养基与鉴别培养基的比较稀释涂布平板法（统计菌落数）原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌关键恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键

考点二

微生物的选择培养和计数知识点三、微生物的选择培养与数量测定1.稀释涂布平板法

细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3~8cm的土壤层。取样时，一般要铲去表层土。

取样时用的铁铲和取样纸袋在使用前都需要灭菌，操作完整后，一定要洗手。公园里、街道旁、花盆中城市：农田里、菜园里农村：（1）土壤取样：

考点二

微生物的选择培养和计数知识点三、微生物的选择培养与数量测定2.稀释涂布平板法的操作步骤（2）样品的稀释与涂布：

将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×10710g9mL无菌水90mL无菌水知识点三、微生物的选择培养与数量测定2.稀释涂布平板法的操作步骤（2）样品的稀释与涂布：取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。微量移液器知识点三、微生物的选择培养与数量测定2.稀释涂布平板法的操作步骤（3）微生物的培养：（1）待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置（同时放一个未接种的培养基），放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。恒温培养箱稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照问题1：培养时要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养为什么？培养未接种的培养基的作用是对照。知识点三、微生物的选择培养与数量测定2.稀释涂布平板法的操作步骤（3）微生物的培养：问题2：与平板划线法相比，为什么稀释涂布平板法可以用于细菌的计数？

平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。平板划线法稀释涂布平板法知识点三、微生物的选择培养与数量测定2.稀释涂布平板法的操作步骤

考点二

微生物的选择培养和计数知识点三、微生物的选择培养与数量测定2.稀释涂布平板法的操作步骤（4）注意事项：注意事项三注意事项四注意事项一注意事项二将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧；不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已稀释10倍，在计算时，不要忽略；由于使用的是选择培养基，所以一般情况下，获得的单菌落即目的菌，但因为有些微生物可以利用目的菌的代谢产物来生长繁殖，所以还需要进一步验证主要方法稀释涂布平板法平板划线法主要步骤接种工具菌体获取能否用于计数共同点系列梯度稀释操作和涂布平板操作接种环在固体培养基表面连续划线涂布器接种环从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板不能计数使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落知识点三、微生物的选择培养与数量测定3.稀释涂布平板法和平板划线法的比较(1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（每ml）

考点二

微生物的选择培养和计数4.利用稀释涂布平板法计数（间接计数法）知识点三、微生物的选择培养与数量测定例1：某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)，所以每克样品中的细菌数是

个。2.34×109

考点二

微生物的选择培养和计数4.利用稀释涂布平板法计数（间接计数法）知识点三、微生物的选择培养与数量测定

考点二

微生物的选择培养和计数4.利用稀释涂布平板法计数（间接计数法）（2）注意：选择30-300个菌落的平板进行计数；统计的菌落往往比活菌的实际数目低；每个稀释度至少取3个平板取其平均值；因为当两个或多个细胞连在一起时，繁殖后形成的还是一个菌落重复实验，减少偶然因素对实验结果的影响知识点三、微生物的选择培养与数量测定

考点二

微生物的选择培养和计数5.显微镜直接计数法知识点三、微生物的选择培养与数量测定（1）原理：

利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。血细胞计数板常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。细菌计数板对细菌等较小的细胞进行观察和计数。5.显微镜直接计数法知识点三、微生物的选择培养与数量测定（2）优缺点：

考点二

微生物的选择培养和计数①优点：②缺点：快速、直观A.不能区分死菌和活菌→偏大B.不适于对运动细菌的计数。C.个体小的细菌在显微镜下难以观察。问题3:为了避免上述缺点，我们该如何做？5.显微镜直接计数法知识点三、微生物的选择培养与数量测定

考点二

微生物的选择培养和计数问题3:为了避免上述缺点，我们该如何做？可以染色（如使用台盼蓝，死细胞会被染成蓝色）后再进行显微镜计数。知识点四、土壤中分解尿素细菌的分离与计数

考点二

微生物的选择培养和计数脲酶尿素中性菌落数目稳定时菌落特征酚红分解尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该细菌能够分解尿素【教材隐性知识】选择性必修3P19“探究·实践”：本活动初步筛选了能分解尿素的细菌，请进一步借助于生物化学的方法来鉴定所分离的菌种：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性酚红培养基——鉴定分解尿素的细菌脲酶CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3知识点四、土壤中分解尿素细菌的分离与计数

考点二

微生物的选择培养和计数(1)平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒(2023·山东，15B)(

)×判断正误(2)利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物(2023·山东，15D)(

)(3)稀释涂布平板法和平板划线法均能得到单菌落，都可用于细菌计数(2021·浙江6月选考，17C)(

)√×(4)血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定(2023·江苏，7D)(

)×理解微生物的选择培养和计数的原理某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，之后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够高效分解纤维素的微生物。请回答下列相关问题：1.从富含纤维素的土壤中取样的原因是什么？关键能力提升提示

纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中。2.分离出分解纤维素的微生物，应该配制以

为唯一碳源的培养基，目的是

。纤维素促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长提示

④；④形成的透明圈与菌落直径的比值最大。3.已知刚果红与纤维素能形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物无法形成，平板上会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，几号真菌降解纤维素的能力最强，理由是什么？4.三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量，在对应稀释倍数为106的稀释液中各取0.1mL涂平板，得到以下统计结果：甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248；乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是209、240和250，取平均值233；丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；在三位同学的统计中，

同学的统计是正确的，据此计算，每克土壤样品中含细菌

个。2.33×109乙考向二目标微生物的筛选与鉴定3.(2023·广东，10)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是A.a点时取样、尿素氮源培养基B.b点时取样、角蛋白氮源培养基C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基D.c点时取样、角蛋白氮源培养基√迁移应用评价4.(2022·江苏，3)下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是A.选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株B.在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源C.适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落D.可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌√考向三微生物的分离与计数5.(2024·株洲期中)研究者从温泉中筛选出能高效产生耐高温淀粉酶的嗜热细菌的过程如图1所示。将得到的嗜热细菌悬液转接到特定固体培养基上培养，得到若干菌落后用碘液作显色处理，结果如图2所示。下列说法错误的是A.过程①②一般都取

1mL菌液转移B.试管甲、乙都通过无菌水稀释C.图2中周围不显蓝色的菌落含有所需菌种D.过程①②属于稀释涂布平板法，能对分离得到的微生物进行计数√6.(经典高考题)产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是______(填编号)。④编号①②③④物品培养基接种环培养皿涂布器灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧(2)称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________________个。等比稀释4.6×105(或460000)(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行______育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以______为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径______的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。诱变脂肪较大_____________________________________________。(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株_____进行后续相关研究，理由是_____________________B该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好一、过教材1.下列有关微生物培养基的成分与配制过程的相关说法，正确的是A.培养基中添加的牛肉膏可为微生物提供碳源、氮源和维生素等B.与液体培养基相比，固体培养基含有琼脂成分C.培养硝化细菌时，培养基中需要加氮源，不需要加入碳源D.为防止杂菌污染，灭菌后的培养基应立即倒入培养皿中并盖上皿盖，

待冷却后倒置E.在培养细菌时，需要将培养基调至中性或弱酸性F.配制培养基过程中应先调pH再进行高压蒸汽灭菌√√√√2.获得纯净微生物培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。下列关于无菌操作的叙述，错误的是A.牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味B.在接种箱或超净工作台的使用过程中，可用紫外线照射30min来进行消毒C.灼烧灭菌的对象可以是金属用具和玻璃器皿，在酒精灯火焰充分燃烧层进行D.高压蒸汽灭菌时的灭菌条件通常是100kPa121℃，15～30minE.若培养皿盖和培养皿底之间溅有培养基，则不宜用此培养皿培养大肠杆菌F.倒平板时应该把培养皿盖完全打开，以免培养基溅到培养皿盖上G.倒平板后，对空白培养基进行培养，可检测培养基是否被污染H.接种前后接种环都必须灼烧灭菌I.倒平板和接种操作都需要在酒精灯的火焰附近进行√√√3.下列有关微生物分离、纯化、计数及培养的叙述，错误的是A.平板划线法接种时不能划破培养基，第3次划线应从第2次划线的末端

开始B.平板划线法接种时，若在平板上划线4个区，则需灼烧接种环5次C.用涂布器蘸取少量菌液滴加在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使

菌液分布均匀D.在筛选产纤维素酶的微生物时，含纤维素和刚果红的固体培养基既是

选择培养基也是鉴别培养基E.接种后需立即倒置培养以避免皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染√√F.对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记G.菌落的大小、颜色、隆起程度等特征都可作为菌种鉴定的依据H.同一稀释度下应至少对3个平板进行重复计数，然后求平均值I.利用显微镜直接计数，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和J.用平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物计数时，所得数据往往比

实际数据偏小√二、过高考1.(2021·广东，21节选)基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是________________________________________________________________________________________________________(答出两点即可)。2.(2023·全国乙，37节选)在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是

。度为60g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡；pH为10的条件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制盐浓菌T能够分泌纤维素酶3.(2022·河北，23节选)枯草芽孢杆菌为好氧微生物，液体培养时应采用

(填“静置”或“摇床震荡”)培养。培养过程中抽样检测活菌数量时，应采用

(填“稀释涂布平板法”或“显微镜直接计数法”)，其原因是__________________________________________________________________________________________________________________。4.(2022·全国乙，37节选)用菌株C可产生S，若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路：____________________________________________________________________________________________________________________。返回摇床震荡稀释涂布平板法

用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内

设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，确定最适碳源浓度课时精练对一对123456789101112答案题号12345678答案ABABCCCB题号9答案ACD(1)氮源、无机盐聚苯乙烯湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)(2)抑制其他微生物生长的同时保证目的微生物的生长，增加目的微生物的浓度稀释涂布平板法(3)①YT1、YT2、C1均可降解聚苯乙烯，YT1的降解能力最强，YT2的降解能力最弱②基因重组10.23456789101112答案1(1)高压蒸汽灭菌在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，维持15～30min(2)摇床振荡当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌(3)对含菌株A的发酵液进行离心上清液和无菌水接种上清液出现抑菌圈，接种无菌水无抑菌圈，则证明菌株A通过分泌某种化学物质来抑制金黄色葡萄球菌的生长繁殖11.23456789101112答案1(1)抗生素会抑制细菌的生长繁殖(2)OFL

维生素(3)稀释涂布平板法菌落数目稳定1.54×1011(4)等量的菌株X，检测OFL的降解程度12.23456789101112答案1一、选择题：每小题给出的四个选项中只有一个符合题目要求。1.(2025·益阳月考)从海水样本中分离粘质沙雷氏菌时，所用的海生菌肉汤培养基的成分如表所示。下列叙述错误的是123456789101112答案A.蛋白胨只为粘质沙雷氏菌提供碳源，该菌生长需要多种微量元素B.若从牛肉膏、硫酸铵、硝酸钾中筛选优质氮源，每次应只添加其中一种C.该培养基应在灭菌前调节pH，其不能用于分离粘质沙雷氏菌获得单菌落D.该培养基添加了NaCl，具有抑制某些微生物生长的作用，属于选择培养基√蛋白胨

5.00g·L－1MgCl2

5.90g·L－1NaHCO3

0.16g·L－1酵母提取物

1.00g·L－1Na2SO4

3.24g·L－1KBr

0.08g·L－1柠檬酸铁

0.10g·L－1CaCl2

1.80g·L－1SrCl2

34.00g·L－1NaCl

19.45g·L－1KCl

0.55g·L－1H3BO3

22.00g·L－12.熔喷布的主要成分是聚丙烯，会对环境造成污染。某科研小组从土壤中分离到一种能分解聚丙烯的细菌。下列说法正确的是A.配制固体培养基时，需要在无菌的环境中进行B.制备培养基时需要先将培养基的pH调节至中性或弱碱性C.从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌，可采用平板划线法进行分离与计数D.纯化培养时，在培养皿皿盖做标记后倒置在恒温培养箱中静置培养√123456789101112答案3.(2024·山东，15)酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z，trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如图。据图分析，3种酶在该合成途径中的作用顺序为A.X→Y→Z B.Z→Y→XC.Y→X→Z D.Z→X→Y√123456789101112答案4.(2021·山东，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是A.甲菌属于解脂菌B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力123456789101112答案√5.(2024·济宁月考)圆褐固氮菌可独立固定空气中的氮气，且能够分泌生长素。巨大芽孢杆菌可将有机磷降解为可溶性磷。二者组合可将有机厨余垃圾迅速分解为水和二氧化碳。为制备分解有机厨余垃圾的微生物菌剂，某科研小组对两种菌种进行了最佳接种比例的探究实验，得出如图实验结果。下列说法错误的是A.圆褐固氮菌和巨大芽孢杆菌在生长过程中都需要氮源B.统计活菌数量可采用稀释涂布平板法C.处理有机厨余垃圾，两种菌种的最佳

接种比例为1∶2D.两种菌种的组合菌剂还可制成微生物肥

料施用到土壤中，提高农作物的产量√123456789101112答案6.(2025·湘潭月考)工业生产中常用谷氨酸棒状杆菌的高丝氨酸营养缺陷型菌作为赖氨酸的发酵菌株。科研人员将紫外线照射处理过的野生谷氨酸棒状杆菌菌液(原菌液)，经过程①(稀释10倍)接种在培养基甲上培养，菌落数目不再增加时如图中甲平板。过程②表示向培养基甲中添加某种物质，继续培养。下列叙述正确的是A.菌落A是诱变产生的高丝氨酸营养缺陷

型菌种B.培养基甲是一种选择培养基，过程②向甲中添加赖氨酸C.经过程①取0.2mL菌液涂布得到甲平板所示结果，则原菌液未突变菌株数量

约为450个/mLD.发酵结束后，将过滤得到的固体物质进行干燥即可获得赖氨酸产品123456789101112答案√7.(2024·重庆，13)养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图示进行实验获得目的菌株，下列叙述正确的是A.①通常在等比稀释后用平板划线法获取

单个菌落B.②挑取在2种培养基上均能生长的用于后

续的实验C.③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得

到甲、乙D.粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少123456789101112答案√二、选择题：每小题给出的四个选项中有一个或多个符合题目要求。8.(2021·山东，20)含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是A.乙菌的运动能力比甲菌强B.为不影响菌的运动需选用液体培养基C.该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D.穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染123456789101112答案√应不能进行的菌株。如图是科研人员利用影印法(用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上)初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程。下列相关说法正确的是9.营养缺陷型菌株是突变后某些酶被破坏，导致代谢过程中某些合成反123456789101112答案B.进行②过程的顺序是先将丝绒布

“复印”至完全培养基上，再

“复印”至基本培养基上C.氨基酸缺陷型菌株应从基本培养

基上没有、完全培养基上对应位

置有的菌落中挑选D.统计菌落种类和数量时要每隔一

定时间观察统计一次，直到各类

菌落数目稳定为止A.①过程接种方法为稀释涂布平板法，接种后的培养皿不能立即进行倒置培养123456789101112√答案√√三、非选择题10.(2024·岳阳模拟)聚苯乙烯是一种无色透明的热塑性塑料，常被用来制作承受开水温度的一次性容器等。但聚苯乙烯对人体具有一定的致癌性，且聚苯乙烯在自然状态下很难被分解，采用填埋的方法对其进行处理会对土壤环境造成很大的污染。科研人员从黄粉虫肠道中发现一些能够降解聚苯乙烯的微生物，并将之分离出来，相关过程如图所示。回答下列问题：123456789101112答案(1)为了获取能够降解聚苯乙烯的微生物，培养基中需要加入水、碳源、______________(填2种)等基本成分，其中碳源是__________。配制好的培养基常采用_______________________法进行灭菌。123456789101112答案氮源、无机盐聚苯乙烯湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)(2)通过选择培养可以_____________________________________________________________________，从而能够确保从样品中分离到能够降解聚苯乙烯的微生物。将选择培养获取的微生物接种在固体培养基上，据图分析，图中的接种方法是_______________。

抑制其他微生物生长的同时保证目的微生物的生长，增加目的微生物的浓度稀释涂布平板法(3)科研人员获取了三株微生物YT1、YT2、C1，将等量的三种微生物分别接种在含聚苯乙烯的液体培养基中，培养60天后检测聚苯乙烯的降解率，结果如表所示。123456789101112答案①据表分析，可以得出的实验结论是_____________________________________________________________________。YT1的降解能力最强，YT2的降解能力最弱YT1、YT2、C1均可降解聚苯乙烯，菌株YT1YT2C1聚苯乙烯的降解率/%0.750.390.63②为了进一步培养出更高效的能够降解聚苯乙烯的微生物，研究人员将YT1和C1菌株混合培养，一段时间后，筛选出C2菌株，其降解率比上述三种菌株高，经检测发现是菌株C1的基因整合了菌株YT1的部分基因从而提高了对聚苯乙烯的降解效果，该过程发生的变异是__________。基因重组11.金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病菌，广泛分布于自然界。某研究人员以金黄色葡萄球菌为指示菌，探究菌株A对金黄色葡萄球菌的抑菌(会出现抑菌圈)机理。回答下列问题：(1)在培养基制备过程中，对培养基进行灭菌常采用的方法是_______________；使用该方法时，为了达到良好的灭菌效果，除了先要把灭菌锅内原有的冷空气彻底排除外，还需注意的