CN115963257B 碳青霉烯酶免疫层析检测试纸及其制备方法、试剂盒和应用 （丹娜(天津)生物科技股份有限公司）

司司identificationofNDM-,KPC-,IMP-andVIM-typeandOXA-48-likecarbapenidentificationofNDM-,KPC-,IMP-andVIM-typeandOXA-48-likecarbapen碳青霉烯酶免疫层析检测试纸及其制备方本发明提供了一种碳青霉烯酶免疫层析检试纸沿待测样本流动方向依次设置结合物释放析检测试纸缓解了现有技术中存在的缺乏一种2所述免疫层析检测试纸沿待测样本流动方向依次设置结合物释放区、检测区和质控所述KPC的配对抗体包括KPC_1和KP所述OXA_48的配对抗体包括OXA_48_1和OXA_4OXA_48_1的CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3的氨基酸序列分别如Seq_21、SeqOXA_48_2的CDR_H1、CDR_H2和CDR_H3的氨基酸序列分别如Seq_31、Seq所述VIM的配对抗体包括VIM_1和VI所述IMP的配对抗体包括IMP_1和IM所述NDM的配对抗体包括NDM_1和ND2.根据权利要求1所述的碳青霉烯酶免疫层析检测3.根据权利要求1所述的碳青霉烯酶免疫层析检36.根据权利要求1所述的碳青霉烯酶免疫层析检测试纸7.根据权利要求1所述的碳青霉烯酶免疫层析检8.根据权利要求1所述的碳青霉烯酶免疫层析检测试纸9.根据权利要求1所述的碳青霉烯酶免疫层析检测试纸20.根据权利要求1所述的碳青霉烯酶免疫层425.根据权利要求24所述的碳青霉烯酶检测试剂盒，其特征在于，还包括样本裂解试29.权利要求1_23任一项所述的碳青霉烯酶免疫层析检测试纸的制备方法，其特征在32.根据权利要求31所述的制备方法，其33.根据权利要求32所述的制备方法，其特酶抗体分别使用包被稀释液稀释至终浓度为0.5~2mg/mL，在检测区分别划线，形成检测537.权利要求1_23任一项所述的碳青霉烯酶免疫层析检测试纸，40.根据权利要求37所述的应用，其特征在于，先使用权利要混合后静置10~30min，取60~80μL使用免疫层析检测试纸检测；放置15~30分钟后观察结6肠杆菌目细菌(carbapenem_resistantEnterobacterales[0004]产生碳青霉烯酶是肠杆菌目细菌对碳青霉烯类药物耐药最主要的机制。不同地地对CRE产生的碳青霉烯酶进行检测，对于临床抗感染治疗的精准用药和医院感染预防控7[0009]本发明的第三目的在于提供一种含有上述碳青霉烯酶免疫层析检测试纸的试剂盒及它们的应用。盒包含上述碳青霉烯酶免疫层析检测试纸。[0016]根据本发明的另一个方面，本发明还提供了上述碳青霉8术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。[0038]该碳青霉烯酶免疫层析检测试纸包括标记抗体和检测抗体；标记抗体包括KPC、9体包括KPC抗体的另一配对抗体，和OXA_48抗体的另一配对抗体；标记抗体包括VIM抗体、测原理为双抗体夹心法，若待测样本含有碳青霉烯酶抗原且抗原浓度高于最低检测限时，分别如Seq_1、Seq_2和Seq_3所示；CDR_L1、CDR_L2和CDR_L3的氨基酸序列分别如Seq_4、的现有各项技术可轻易地将非CDR区域的氨基酸序列改变而获得具有相类似的生物活性的烯酶免疫层析检测试纸，因此具有上述CDR序列的抗体的碳青霉烯酶免疫层析检测试纸属链可变区的氨基酸序列优选如所示Seq_48所示；VIM_2的重链可变区的氨基酸序列优选如氨基酸序列优选如所示Seq_67所示，轻链可变区的氨基酸序列优选如所示Seq_68所示；IMP_2的重链可变区的氨基酸序列优选如所示Seq_77所示，轻链可变区的氨基酸序列优选的氨基酸序列优选如所示Seq_88所示；NDM_1的重链可变区的氨基酸序列优选如所示Seq_的结果判定待测样本中是否含有对应的碳青霉烯[0069]在一些可选的实施方式中，免疫层析检测试纸的结合物释放区包被KPC_1、OXA_[0070]在一些可选的实施方式中，免疫层析检测试纸的结合物释放区包被KPC_1、OXA_[0072]在一些优选的实施方式中，所述免疫层析检测试纸为胶盒包含上述碳青霉烯酶免疫层析检测试纸。缓冲液作为缓冲体系。表面活性剂包括但不限于Tween_20、Tween_80、CHAPS、Brij35、~14天采用间接ELISA法检测细胞培养上清的效价，将效价最强的阳性杂交瘤细胞扩大培[0090](4)将步骤(3)筛选出的杂交瘤细胞匀浆化后，提取并反转录RNA进行PCR获得的PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳鉴定，回收目的片段，送样测序，测序结果与IMGT数据库[0091](5)利用同源重组引物分别在抗体重链可变区基因的两端和轻可变区基因的两端区信号肽的氨基酸序列如Seq_121所示。将分别含有兔抗体重链IgG1恒定区的表达质粒和抗体浓度。用SDS_PAGE电泳鉴定单克隆抗体的分子量，SDS_PAGE电泳图如图1～5所示。KPC_1和KPC_2如图1所示，OXA_48_1和OXA_48_2如图2所示，VIM_1和VIM_2如图使所示，和NDM_2的序列信息如表1～表10所示，下述抗体的重链恒定区的氨基酸序列如所示Seq_Seq_113、Seq_115、Seq_117和Seq_119所示；轻链可变区的核苷酸序列分别如Seq_102、[0118]本实施例提供了一种胶体金免疫层析检测试纸，如图6和图7所示(其中图标表示[0126]本实施例提供了一种碳青霉烯酶检测试剂盒，包括实施例2的胶体金免疫层析检[0128]本实施例提供了一种碳青霉烯类耐药菌的检测方法，使用实施例4提供的试剂盒[