CN117925729B 基于空白脂质纳米颗粒的转染试剂、其制备方法和应用 （晟迪生物医药(苏州)有限公司）

裕新路108号中科院上海药物所苏研本发明提供基于空白脂质纳米颗粒的转染粒的转染试剂通过空白脂质纳米颗粒和核酸制染效果稳定，可转染多种细胞(如293T、Hela、2所述第一可电离脂质选自含有通式(1E)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构G1NR6_6_P6)O_1616R43Rb和Rc各自独立地选自C1_C12烷基醇。4.如权利要求2所述的转染试剂，其特征在于，所述多肽选自包含2_50个氨基酸的多1124661_6烷基2_6烯基2_6炔基6_14芳基的有机基团取代。5678915.如权利要求1_14任一项所述的转染试剂，其特征在于，所述转染试剂还包括0_十八碳烯基sn甘油3磷酸胆碱、1油酰基2胆固醇基半琥珀酰基sn甘油3磷酸胆基sn甘油3磷酸乙醇胺、1,2二亚油酰基sn甘油3磷酸26.如权利要求119任一项所述的转染28.如权利要求27所述的体外转染方法，其特征[0002]将外源DNA插入细菌以表达所需蛋白质已成为一种常规技术，例如在大肠杆菌中[0004]常用的商业化的转染试剂包括ThermoFisher的Lipofectamine系列，如2000、Lipofection；Doharmacon的DharmaFECT系列；Roche的DOTAP；Qiagen的HiPerfect；GEHealthcare的Nanofectamine和SigmaAldrich的Escor[0005]这些商业化转染试剂的工作原理一般为采用阳离子聚合物或阳离子脂质与核酸剂毒性低且对各种类型的细胞普遍具有转染效向难以转染的原代细胞以及在体内向靶细胞有效递送siRNAOGN和其他阴离子大分子，但所述转染试剂通过空白脂质纳米颗粒和核酸制备得到，可根据使用者需求灵活调整剂量，括：(1)空白脂质纳米颗粒；(2)生物学活性成分；所述空白脂质纳米颗粒组成包括：5_[0014]在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质选自含有通式(1)的化合物或其侧链的6_10元芳族基团；所述侧链独立地选自C10_30直链或支链烷基、C10_30直链或支链烯6NR6_14C(=S7(OR16)O_91_6的直6_6_S_NR16_161-6烷基2-6烯基2-6炔基[0044]在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1D)所示的化合物的化合[0145]在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(II)与式[0148]在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(IV)与式[0154]在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(VII)化合[0157]在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(XI)与式C24烯基6C24醇6_C24短链聚氧乙烯为直链或支链结1C6bcRcRaC6bcRcC6bcC6bc[0217]上文所述的亲核基团是指在化学反应中能够提供电子对以形成新的化学键的分氨(NH322_NH2米颗粒还包括0_60mol％的其他可电离脂质，所述其他可电离脂质选自下列化合物中的至1油酰基2胆固醇基半琥珀酰基sn甘油3磷酸胆碱(OChemsPC)、1十六烷基sn甘二十二碳六烯酰基一sn甘油3磷酸乙醇胺、1,2二[0228]在一项优选的实施方案中，所述聚乙二醇缀合脂质包括PEG_二硬脂基氧基丙基脂酰_rac_甘油_3_甲氧基聚乙二醇(DSG_PEG)、2_[(聚乙二醇脂酰乙醇胺_聚乙二醇(PEG_DMPE)脂质中的至[0234]在一项优选的实施方案中，所述缓冲盐溶液pH为1_9，所述缓冲盐浓度为0.1_[0246]2、本发明提出的基于空白脂质纳米颗粒的转染试剂通过空白脂质纳米颗粒和核[0247]3、本发明提出的基于空白脂质纳米颗粒的转染试剂可转染多种细胞(如293T、[0254]本发明的合成工艺可以容许多个官能团，因此可以使用各种被取代的起始物于制备有机分子的标准合成方法和程序以及官能团转化和操作可以从相关科学文献或从[0255]具有本文所描述各式的本发明化合物可以根据相应的通用合成路线中所说明的[0269]如以上通用合成路线2中所说明的，化合物1与化合物2发生缩合反应得到化合物6。步骤3可以在有机溶剂(如二氯乙烷(DCE))中，在还原剂(例如三乙酰基硼氢化钠(NaBH[0323]将三(羟甲基)氨基甲烷(50.0g)和碳酸酐二叔丁酯(Boc2O)(99.1g)溶于甲醇胶柱层析纯化(PE:EA＝100:1一50:1)得到化合物2一乙基一2一十五烷基马来酸二乙酯[0338]向三颈瓶中加入十三酸(79.5g)和溶剂THF(800mL)，将体系降至0℃后缓慢添加缩，得到中间物G(7.5g)。LCMS(ESI)calcdforC22H32N2O2,[M+H]+m/z357.25,found缩，得到中间物I(6.5g)。LCMS(ESI)calcdforC12H20N2O，[M+H]+m/z209.16，found纯化(PE:EA＝10:1一5:1)得到中间物J(5.0g)。LCMS(ESI)calcdforC17H34O2，[M+H]+m/z缩后得到中间物L(3.0g)。LCMS(ESI)calcdforC11H14O3，[M+H]+m/z195.09，found[0384]向封管中加入中间物K(2.过滤和浓缩得到中间物M(1.36g)。LCMS(ESI)calcdforC15H33NO2Si,[M+H]+m/z288.52,H122N2O7柱层析纯化(PE:EA＝40:1_30:1H116N2O7H104N2O7H108N2O7烯酸作为通用合成路线1中的化合物2，以及5_(N,N_H137N3O9H141N3O9H145N3O9H135N3O8H133N3O7H103N3O7用合成路线2中的化合物2和采用N，N_二甲基乙二胺作为通用合成路线2中的化合物5。1HH133N3O7H133N3O7NMR(400MHz,ChloroforH121N3O7H137N3O7H141N3O7H145N3O7二胺作为通用合成路线2中的化合物5。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.10(d,J＝4.1Hz,6H),H132N2O82_羟基乙胺作为通用合成路线2中的化合物5。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.16(t,J＝5.8Hz,H136N4O7通用合成路线2中的化合物2和采用4_(2_氨基乙基)哌嗪_1H139N3O8通用合成路线2中的化合物2和采用中间物K作为通用合成路线2中的化合物5。1HNMRH133N3O6H132N2O7[0522]向中间物6a(1.5g)中加入溶剂MeOH(5mL)，THF(5mL)，添加反应物Pd(OH)2/CH136N2O6溴己醛分别通用合成路线3中的化合物2和化合物5。1HNMR(400MHz,Chloroform_d)δ4.11H138N2O8[0540]向三颈瓶中加入化合物6(750.00mg),中间物K(化合物7，217.31mg)和溶剂DMF拌3h。反应液用200mLEA稀释后，再用300mL饱和食盐水洗涤有机相两次；有机相用无水[0543]向三颈瓶中加入化合物8(700.00mg)和溶剂THF(5mL)，添加盐酸二氧六环溶液H131N3O7H138N2O7(328.68mg)和DCE(10mL)，反应液在N2,25℃中搅拌16h后，向反应液加入100mL水，用EA[0561]向三颈瓶中加入化合物6(450mg)和溶剂THF(5mL)，添加盐酸二氧六环溶液(1M)H142N2O7溴己醛分别通用合成路线5中的化合物2和化合物5。1HNMR(400MHz,Chloroform_d)δ4.11δ4.29(t,J[0589]将21.00g化合物6005_A，58mL丙烯酸正至100℃,补加10mL丙烯酸正丁酯，16h后过柱(石油醚_乙酸乙酯体系)，得化合物6005_BHNMR(400MHz,CDCl3)δ[0605]然后将上述无色油状物(11.05g)在甲醇(20ml)中的溶液加入到室温下剧烈搅拌析纯化(DCM:MeOH＝20:1_10:1