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DB32ThedetectionofpathogenforMaizeRoughDwarfdiseasebydotimmuobinding江苏省市场监督管理局发布I1玉米粗缩病病原免疫斑点检测方法本标准规定了大麦、小麦、玉米植株和灰飞虱台式离心机（5000r/min具盖塑料离心管：200µL；培养3.2.1试验用水均为蒸馏水，使用的化学试剂未作说明均为分析纯和15gNa2HPO4，加水定容至5000mL）：3.2.51%脱脂奶粉封闭液：1g脱脂奶粉加入100mL磷酸盐Tween20缓冲液中，43.2.6辣根过氧化物酶固体显色用时加入10mL磷酸盐缓冲液中，再加入10µLH2O2。3.2.8单克隆抗体（单抗玉米粗缩病病原RBSDV单克隆抗体，效价为1:53.2.9酶标二抗：GoatAnti-MAP（检测植物20℃保存。24.1样品制备4.2封闭4.2.1预先用铅笔将硝酸纤维素膜（NC膜）划成5mm×5mm的正方格，取2.0µL4NC膜上正方格中心（以不超出正方格一半为准）；同时取2.0µL已采用本方法测定为感染玉米粗缩病的玉米汁液点于膜上预先标记好的正方格内，作为阳性粗缩病的玉米汁液点于膜上预先标记好的正方格内，作为阴性对照，将膜置于室温晾干。晃，封闭30min。4.3孵育将膜完全浸入孵育液，37℃轻轻摇晃，孵育1h～1.5h。4.4二抗孵育4.4.1用镊子压住膜倒弃洗液，将二抗（GoatAnti-MouseIgGAntibody释配制孵育液，将膜完全浸入二抗孵育液，37℃轻轻摇晃，孵育1.5h～2h，再用镊子压住膜倒弃洗液，加入BCIP/NBT显色底物溶液，37℃静置4.6结果判定5.1.1采集灰飞虱高龄若虫或成虫，虫量不少于100头，装至塑料瓶中。样品储存方35.2封闭5.6.1灰飞虱带毒判定5.6.2带毒率计算按照公式1计算灰飞虱带毒率，结果保留到小数点后一位。试验结果记Lc100…………公式1）；Nc—带毒灰飞虱虫量；4表A.1植物样品检测结果记录表人

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