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备案号：DB32TechnicalRegulationforconservationofchrysanthemumgermplasminvitro江苏省市场监督管理局发布本标准起草单位：南京农业大学、南京华之彩园艺1菊花种质资源离体保存技术规程本标准适用于菊花种质资源的离体保存，菊属其他种质资源保存可参凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）常温离体保存conservationatroomtemp在常温（25℃±2℃)下保存正常生长的离体保存物的方式。低温离体保存conservationatlowtemperature在液氮（-196℃)中保存离体材料，使之代谢和生长基本停止，生物学状态相对稳定的离体保存方4材料要求4.1基本要求2b)依据DNY/T1491规定的方法进行病毒检测，采用规格为直径(18～30)mm×长(160～200)mm的试管，用内置硅胶圈的密封塑料盖3蔗糖+7g/L琼脂，该方法适宜地被、盆栽型菊花b)添加抑制型植物生长调节物质法：低温（5±2）℃下，MS+0.3mg/6-BA+0.1mg/LNA蔗糖+7g/L琼脂，培养基中添加20mg/L～80mg/LABA，或者15g/L～20g/L甘露醇；地被、盆栽型资源宜添加低剂量ABA或甘露醇，切花型资源宜采用较高选择符合4.1条件的材料并按照4.2要求详细登记，利用生根培养30d左右、生长整齐一致的无菌苗（25±2）℃、光照强度2000lx～2500lx、光照时间16h/d，培养采用规格为直径(15～20)mm×长(120～160)mm试管，用内置硅胶圈的密封塑料盖，在无菌条件下，通过解剖镜逐层剥去外层叶片,切取1mm～2mm大小的茎尖。入装载溶液中，室温（25±2）℃下暗处理30min，取出后用无菌滤纸吸去多余装载液。将包有茎尖的棉纸团转入玻璃化保护剂PVS2（附录B冰浴条件下处理15min。4将脱水（玻璃化）处理后包有茎尖的棉纸团转移至装有预冷新鲜玻璃化试剂冻后再生率≥20%，变异率≤1%；无菊花B病毒（CVB在无菌条件下，快速将冷冻管从液氮转移至40℃水浴中，剧烈震荡120s。然后将包有茎尖的棉纸将化冻后包有茎尖的棉纸团转移到卸载液（附录B室温（25±2）℃下放置10min，中间5min时换一次卸载液。然后将棉纸团展开，茎尖在卸载液中悬浮5min。用含蔗糖1.2mol/L的MS液体培养基洗涤20min

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