动物生物化学（下篇共上中下3篇）

第七章物质代谢的相互关系与代谢的调节YOURLOGO化学实验、公开课、教师说课、教学培训PPT模板主讲人：稻小壳知识目标✮了解体内代谢途径调节的机制。✮掌握物质代谢与能量代谢的相互关系。✮重点是掌握体内各糖类、脂类、氨基酸代谢途径之间的相互联系。第一节糖类、脂类、蛋白质和核酸代谢的相互关系一、能量代谢上的相互联系糖类、脂类和蛋白质都是能源物质，可在体内氧化分解，释放的能量以ATP形式贮存。二、糖类、脂类、蛋白质、核酸代谢之间的联系（一)糖类代谢与脂类代谢的联系生物体内的糖类和脂类关系密切，可以相互转化.二、糖类、脂类、蛋白质、核酸代谢之间的联系（二）糖类代谢与蛋白质代谢的联系糖类和蛋白质可以相互转化。糖类是体内最重要的碳源和能源。糖类代谢的一些中间代谢物，如丙酮酸、α一丙戊二酸、草酰乙酸等经转氨基作用生成氨基酸，作为蛋白质合成的原料。二、糖类、脂类、蛋白质、核酸代谢之间的联系（三）脂类代谢与蛋白质代谢的联系组成蛋白质的氨基酸分解后均可生成乙酰CoA，经还原缩合反应合成脂肪酸进而合成脂肪，即蛋白质可转变为脂肪。二、糖类、脂类、蛋白质、核酸代谢之间的联系(四)核酸代谢与糖类、脂类、蛋白质代谢的联系核酸是细胞内重要的遗传分子，控制着蛋白质的合成，影响细胞的成分和物质代谢。第二节物质代谢的调控

一、细胞－酶水平的调控细胞水平的代谢调节是最原始的调节机制，主要通过酶来实现，故又称为酶水平的调节。（一）酶的区域化分布细胞内酶系的区域化分布见表7.1。一、细胞－酶水平的调控细胞水平的代谢调节是最原始的调节机制，主要通过酶来实现，故又称为酶水平的调节。（一）酶的区域化分布

一些重要代谢途径的关键酶见表7.2。一、细胞－酶水平的调控细胞水平的代谢调节是最原始的调节机制，主要通过酶来实现，故又称为酶水平的调节。（二）酶活性的调节酶的变构调节小分子化合物与酶蛋白分子活性中心以外的某一部位特异结合，引起酶蛋白分子构象变化，从而改变酶的活性，调节代谢速度，这种调节称为酶的变构调节。一、细胞－酶水平的调控细胞水平的代谢调节是最原始的调节机制，主要通过酶来实现，故又称为酶水平的调节。（二）酶活性的调节2.酶的化学修饰调节酶的化学修饰是酶蛋白肽链上某些残基在酶的催化下发生可逆的共价修饰，从而引起酶活性改变。一、细胞－酶水平的调控（二）酶活性的调节2.酶的化学修饰调节酶的化学修饰是酶蛋白肽链上某些残基在酶的催化下发生可逆的共价修饰，从而引起酶活性改变。一、细胞－酶水平的调控（三）酶量的调节细胞内的某些酶数量不是固定不变的，可以随相关代谢物浓度的变化而改变。1.酶蛋白合成的诱导与阻遏一、细胞－酶水平的调控（三）酶量的调节细胞内的某些酶数量不是固定不变的，可以随相关代谢物浓度的变化而改变。2.酶蛋白降解二、激素水平的调控激素是生物体分泌的、协调组织或器官之间代谢平衡的一类活性物质。膜受体激素膜受体是存在于细胞表面质膜上的跨膜糖蛋白，包括膜岛素、生长激素、促性腺激素、促甲状腺激素、甲状腺素等。信息级联放大如图7.3所示。二、激素水平的调控2.胞内受体激素主要有类固醇激素、前列腺素等，这些激素透过细胞膜进入细胞后与相应的胞内受体特异性识别、结合，引起受体构象改变。三、整体水平的代谢调控神经系统可通过协调内分泌腺的活动间接调节代谢，也可以直接影响器官、组织代谢进行整体调节，以适应内外界环境的不断变化，维持体内代谢处于相对稳定的状态。三、整体水平的代谢调控（一）饥饿机体在饥饿状态下，肠道内无能源物质可吸收，糖原迅速消耗，血糖含量降低，引起膜岛素分泌减少和膜高血糖素分泌增加，发生一系列的代谢改变。三、整体水平的代谢调控（二）应激应激是机体受到创伤、缺氧飞中毒、感染、剧烈情绪激动等异常剌激时做出一系列反应的“紧张状态”。此时交感神经兴奋，肾上腺髓质及皮质激素分泌增多，血浆膜高血糖素及生长激素水平增加膜岛素分泌减少，一系列代谢发生改变。本章小结思考与练习1.概述生物体内糖类、脂类、蛋白质、核酸在代谢上的相互关系。2.简述乙酰CoA、草酰乙酸在物质代谢中的作用。3.简述机体代谢调节的方式。4.举例说明代谢途径中的关键酶在代谢调节中的多样性。THANKYOU!

第八章核酸和蛋白质的生物合成YOURLOGO化学实验、公开课、教师说课、教学培训PPT模板主讲人：稻小壳知识目标✮掌握基本概念：中心法则、遗传密码、半保留复制,

转录等✮掌握RNA在蛋白质合成中的功能。✮了解参与DNA复制、RNA转录、蛋白质生物合成的酶．✮理解蛋白质合成的几个过程。第一节DNA的生物合成一、半保留复制DNA的生物合成主要是以复制的方式进行的。所谓复制，就是以亲代DNA分子为模板，按照碱基配对原则，形成与亲代DNA分子完全相同的两个子代DNA分子的过程。(一)DNA半保留复制的含义一、半保留复制DNA的生物合成主要是以复制的方式进行的。所谓复制，就是以亲代DNA分子为模板，按照碱基配对原则，形成与亲代DNA分子完全相同的两个子代DNA分子的过程。（二）参与DNA复制的酶类1.DNA聚合酶一、半保留复制（二）参与DNA复制的酶类2.引物酶由于DNA聚合酶不能自己从头合成DNA链，在DNA复制过程中需要先合成一小段RNA片段作为引物，这种短RNA引物片段一般由十几个至数十个核苷酸构成。一、半保留复制（二）参与DNA复制的酶类3.DNA连接连接酶是在DNA合成中催化相邻的DNA片段形成3‘,5’－磷酸二酯而相连的酶，此酶催化需要ATP供能。一、半保留复制（二）参与DNA复制的酶类4.拓扑异构酶、解链酶5.其他参与复制的因子一、半保留复制（三）DNA复制的过程复制的起始DNA的复制有固定的起始位点，称为复制原点。一、半保留复制（三）DNA复制的过程3.RNA引物的水解DNA片段合成至一定长度后，链中的RNA引物即被核酸酶消解而切掉。此时出现的缺口由DNA片段的继续延长而填补。一、半保留复制（三）DNA复制的过程4.完整DNA分子的形成随从链中相邻的两个DNA片段在DNA连接酶的作用下形成3`，5‘一磷酸酯键连接起来形成长链，并与其对应的模板DNA链干起生成子代双螺旋DNA，即完整的DNA分子。一、半保留复制（四）DNA复制的高保真性复制按照碱基配对规律进行，是遗传信息能准确传代的基本原理。二、DNA的损伤与修复DNA的复制可能发生自发突变，引起生物体的变异。除此之外，某些理化因素或病毒也常能引起DNA分子的突变，如电离辐射、紫外线、化学诱变剂、致癌病毒等。三、DNA的突变根据发生突变的碱基变化，可分为以下两种方式。碱基对的置换是指由于碱基对的置换或者一个或多个碱基的增加或减少而引起的突变：分为点突变、碱基插入和碱基缺失。2.移码突变是指由碱基的缺失或插入造成阅读框架的改变。见图8.40第二节RNA的生物合成一.RNA的转录以DNA为模板合成RNA的过程称为转录。转录是生物界RNA合成的主要方式，是遗传信息由DNA向RNA传递的过程。一.RNA的转录（二）DNA指导的RNA聚合酶真核和原核细胞内都存在有DNA指导的RNA聚合酶.1.RNA聚合酶的特点2.生物RNA聚合酶3.真核生物RNA聚合酶一.RNA的转录（三）RNA转录的过程RNA转录的主要过程可分为识别与起始飞,延长、终止3个阶段。一.RNA的转录（四）RNA转录后的加工与修饰转录的RNA通常是不成熟的无功能的RNA前体分子，因此，转录后常需要进行加工修饰，使之成为成熟的有活性的RNA分子，这一过程也称为RNA的成熟过程。各种RNA转录后加工修饰过程各有其特点。1.mRNA的加工修饰一.RNA的转录（四）RNA转录后的加工与修饰2.rRNA加工修饰原核生物rRNA转录后加工，包括以下几方面：①rRNA被大肠杆菌核酸酶剪切成一定长度的rRNA分子。②rRNA在修饰酶催化下进行碱基修饰。③rRNA与蛋白质结合形成核糖体的大、小亚基。一.RNA的转录（四）RNA转录后的加工与修饰3.tRNA加工修饰tRNA的加工成熟过程较为复杂，包括剪接修饰、核苷酸修饰与3＇末端连接－CCA结构修饰等。二、RNA的复制以DNA为模板合成RNA是生物界RNA合成的主要方式，但某些病毒、噬菌体的遗传信息贮存在RNA分子中，当它们进入宿主细胞后，会产生一种特殊的RNA复制酶，这种酶称为RNA指导的RNA聚合酶。在病毒RNA指导下合成新的RNA，称为RNA的复制。第三节蛋白质的生物合成一、蛋白质合成的“中心法则”在子代细胞的生长发育过程中，这些遗传信息通过转录传递给RNA,再由RNA通过翻译转变成相应的蛋白质多肽链氨基酸排列顺序，由蛋白质执行各种各样的生物学功能，使后代表现出与亲代RNA相似的遗传特征，这种生物遗传信息的传飞者递规律称为“中心法则”（图8.5）。二、参与蛋白质生物合成的物质

（一）mRNA在蛋白质合成申的主要功能遗传密码的概念mRNA以它分子中的核苷酸排列顺序携带从DNA传递来的遗传信息，作为蛋白质生物合成的模板，决定蛋白质分子中的氨基酸排列顺序。科学家们设计了十分出色的遗传学和生物化学实验，于1966年编排出了遗传密码表（表8.2）。二、参与蛋白质生物合成的物质

2.遗传密码的特征遗传密码的特征可归纳为以下几点。(1）起始密码与终止密码：(2）密码子的连续性(3）密码的简并性：(4）密码的通用性：(5）密码的摆动性：二、参与蛋白质生物合成的物质

（二）tRNA在蛋白质合成中的主要功能tRNA在蛋白质生物合成过程中起关键作用。mRNA携带的遗传信息被翻译成蛋白质一级结构，但是mRNA分子与氨基酸分子之间并无直接的对应关系。二、参与蛋白质生物合成的物质

（三〉核糖核蛋白的主要功能rRNA与蛋白质构成的核糖体是蛋白质合成的场所。核糖体可分为两类：一类附着于粗面内质网主要参与白蛋白、膜岛素等分泌性蛋白质的合成；另一类游离于胞浆，主要参与细胞固有蛋白质的合成。三、蛋白质合成的过程（一）氨基酸的活化氨基酸活化是指使氨基酸的羧基与tRNA3‘末端核糖上的2’或3－羧基形成酯键，从而生成氨基酰－tRNA的过程。三、蛋白质合成的过程（二）肽链合成的起始原核生物蛋白的合成的起始是由Mrna,核糖体的30S亚基和甲酰甲硫铵酰-tRNA结合.三、蛋白质合成的过程（三）肽链延伸1.氨基酰-tRNA进入A位三、蛋白质合成的过程（三）肽链延伸2.肽键的形成当氨基酰－tRNA占据A位后，原来结合在P位fMet-tRNAr便将其活化的甲酰甲硫氨酸部分转移到A位的氨基因先一tRNA的氨基上，以氨酰键（肽键）连接起来形成二肽酰基一tRNA。三、蛋白质合成的过程（三）肽链延伸3.移位移位是指核糖体沿mRNA(5＇→3＇）做相对移动。每次移动的距离为一个密码子的位置。三、蛋白质合成的过程（四）合成终止当mRNA的终止密码子（UAA、UGA或UAG）进入核糖体的A位时，由于它们不为任何氨基酸编码所以也不为任何氨基酰－tRNA所识别因而没氨基酰－tRNA进入A位与之结合。四、翻译后的加工新合成肤链多数是没有生物活性的，必须经过加工过程才能成为有生物活性的蛋白质分子。加工的方式有以下几种。(1）在细菌蛋白质中的起始氨基酸上的甲酰基由脱甲酰酶催化水解掉，有时还要由氨肽酶从N端切去一个或几个氨基酸。(2）通过两个半脱氨酸上的－SH脱氢而形成二硫键。(3）某些氨基侧链需要修饰，如糖蛋白中丝氨酸、天冬氨酸和苏氨酸的侧链上连接多糖等。(4）有些肤链要蛋白酶的水解才能成为功能性蛋白质分子，如膜岛素原变成胰岛素等。五、基因表达的调控操纵子模式是原核生物基因表达调控的重要方式。所谓操纵子是指原核生物基因的一个表达调控序列，它包括参与同一代谢途径的几个酶的基因，编码在一起形成的一个特殊转录单位（统称为结构基因）和在结构基因前面的调节基因、操纵基因及其他一些调控序列。这是一个典型的转录水平的调控模式（图8.10）。五、基因表达的调控（一)乳糖操纵子乳糖操纵子这是研究得最清楚的一种是典型的诱导型操纵子。人们很早就发现，当大肠杆菌在葡萄糖培养基中生长时，它不能代谢乳糖。五、基因表达的调控（二）阿拉伯操纵子这是一个利用同一调节蛋白的不同结构形式活化和抑制操纵子的调控方式。阿拉伯糖操纵子除结构基因外，也包括调节基因、操纵基因和启动子。五、基因表达的调控（三)色氨酸操纵子色氨酸操纵子是由操纵基因（O）、启动基因（P）与为合成色氨酸的5个酶（E、D,C,B,A）编码的结构基因组成。当色氨酸水平很低时，色氨酸－阻遏物复合体解体，阻遏消除，转录被开放，合成色氨酸（图8.13）。拓展与应用生物工程技术简介一、基因工程基因工程（geneticengineering）又称基因拼接技术和DND重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先的设计在体外构建杂种DNA分子，然后导人活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种的一种技术。拓展与应用生物工程技术简介一、基因工程1.DNA重组技术的物质基础(1）目的基因：(2）载体：(3）工具酶:拓展与应用生物工程技术简介一、基因工程2.DNA重组技术的一般操作步骤,一个典型的DNA重组包括五个步骤。(1）目的基因的获取(2)DNA分子的体外重组:(3)DNA重组体的导人：(4）受体细胞的筛选(5）基因表达：拓展与应用生物工程技术简介繁育优良品种目前，人工授精、胚胎移植等技术已广泛应用于畜牧业生产。精液和胚胎的液氮超低温（-196℃）保存技术的综合使用，使优良公畜、禽的交配数与交配范围大为扩展，并且突破了动物交配的季节限制。拓展与应用生物工程技术简介2.临床医学与药物自1975年英国剑桥大学的科学家利用动物细胞融合技术首次获得单克隆抗体以来许多人类无能为力的病毒性疾病遇到了克星。拓展与应用生物工程技术简介三、发酵工程。现代的发酵工程，又叫微生物工程。它是指采用现代生物工程技术手段，利用微生物的某些特定的功能为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程。拓展与应用生物工程技术简介四、酶工程酶工程是指利用酶细胞或细胞器等具有的特异催化功能，借助生物反应装置和通过一定的工艺手段生产出人类所需要产品的技术。它是酶学理论与化工技术相结合而形成的一种新技术。酶工程可以分为两部分。一部分是如何生产酶，一部分是如何应用酶。拓展与应用生物工程技术简介五、蛋白质工程蛋白质工程，是指在基因工程的基础上，结合蛋白质结晶学，计算机辅助设计和蛋白质化学等多学科的基础知识通过对基因的人工定向改造等手段，对蛋白质进行修饰、改造和拼接以生产出能满足人类需要的新型蛋白质的技术。本章小结思考与练习简述蛋白质生物合成的中心法则。2.在蛋白质的生物合成中，RNA有什么作用？3.遗传密码表现哪些特点？4.试述蛋白质生物合成的过程.5.简述RNA的转录过程。THANKYOU!

第九章水和无机盐代谢YOURLOGO化学实验、公开课、教师说课、教学培训PPT模板主讲人：稻小壳知识目标✮了解铁、钱及微量元素的代谢过程。✮掌握体液含量、分布和组成特点。✮重点是掌握水和无机盐的生理功能。✮熟悉水、无机盐代谢紊乱引起的疾病。第一节体液一、体液的含量与分布水和溶解在水中的无机盐、低分子有机物和蛋白质等组成体液，分为细胞内液和细胞外液。体液约占体重的60%，其中细胞内液占40%，细胞外液占20%。二、体液的电解质分布体液的主要成分是水大部分无机物和蛋白质常以离子状态存在，故称为电解质，主要有Na＋、K＋、Ca2+、Mg2＋、CI-和Hco3

等。体液中阳离子总数和阴离子总数相等，呈电中性。三、体液的交换机体内各部分的体液处于不停的流动状态在细胞内液和细胞外液之间不断地进行相互交换，包括水、营养物质的吸收，代谢物的交换以及代谢终产物的排出等，在维持生物体的生命活动中占有重要地位。体液交换如图9.1所示。三、体液的交换（一）血浆与细胞间液之间交换血浆与细胞间液的交换主要是在毛细血管壁上进行。毛细血管壁是一种半透膜，除大分子的蛋白质以外血浆中的其他大部分物质都可以自由地透过。三、体液的交换（二）细胞内外之间的交换细胞内外之间的交换发生在细胞膜上。细胞膜是对物质具有高度选择性的半透膜，细胞内、外液中的水、葡萄糖、氨基酸、尿素、O2、CO2,CI-,HCO；等小分子可以通过，蛋白质、Na＋、K＋、Ca2+、Mg2＋等则不容易透过，所以细胞内外液的电解质分布差别很大。第二节水与电解质的平衡及调节一、水的生理功能水是机体内含量最多的物质，体内的水大部分与蛋白质、多糖、电解质等以结合水形式存在。水是维持机体正常功能活动所必需的营养元素没有水细胞生命活动将立即停止.二、水的来源与去路机体每天摄入和排出一定量的水，使各部分体液的分布和含量维持动态平衡。水的来源有三个途径：食物、饮水和代谢水（糖类、脂肪和蛋白质等营养物质在体内生物氧化产生的水）。三、电解质的生理功能和代谢电解质是构成体液的成分也是维持体液酸碱平衡与渗透压平衡维持神经和肌肉应激性的重要物质.（一）钠、氯代谢机体需要的Na＋和CI-主要来自食盐。Na＋和CI-在肠道中被吸收后迅速、均匀地分布到细胞外液中。三、电解质的生理功能和代谢（二）钾的代谢K＋在细胞内外分布不均匀98%分布于各组织细胞内,2%分布于细胞外液。食物中大部分的K＋在消化道中被吸收后迅速分布到细胞外液中,其中一部分可进入细胞内.四、水与电解质的平衡及调节（一）神经系统的调节神经系统通过感受渗透压的变化直接影响水的摄入调节体液的容量和渗透压。当机体失水超过1%或食入高盐食品时导致体液渗透压升高剌激下丘脑和颈动脉内的感受器，作用于下丘脑的渴觉中枢和大脑，产生渴感和抗利尿素的释放。四、水与电解质的平衡及调节（二)抗利尿素的调节抗利尿素（ADH）是丘脑分泌的一种九肽激素。四、水与电解质的平衡及调节（三)醛固酮的调节醛固酮是肾上腺皮质分泌的一种类固醇激素,分泌受肾素－血管紧张肽系统与血中K＋、Na＋浓度的调节.第三节铁、镁及畜禽体内微量元素代谢概述一、铁代谢动物体内铁的含量虽然很少，但非常重要。铁缺乏时，血红蛋白合成障碍，引起贫血。铁还参与体内氧化还原反应，在电子传递链中发挥重要作用。二、镁代谢镁广泛分布于动植物细胞中,是多种酶的辅助因子或激活剂,对神经肌肉的冲动传导、能量代谢等具有重要作用。57%的镁存于骨髓中,主要以磷酸镁和碳酸镁的形式存在；约40%的镁存于软组织中,其余的存于体液中。三、微量元素代谢微量元素是指含量占动物体总重量0.01%以下的元素。目前发现的微量元素有50多种，主要包括锌、铜、硒、锰、碘、钴、钼、氟钒、镍等。微量元素在体内的含量很少，但具有十分重要的生理功能，是机体生活必需的物质。1.锌锌广泛分布于各组织中，以视网膜,胰腺和前列腺中含量最多，在肌肉和骨骼中贮存。三、微量元素代谢2.铜铜分布于各组织中，主要存于肌肉、骨儒、肝脏和血液中。体内的大部分铜与蛋白质相结合，小部分呈游离态。三、微量元素代谢3.硒硒广泛分布于脂肪组织以外的组织中，其中肝脏、胰脏、肾脏含量较高，以晒蛋白或共价硒一硫化合物的形式存在。三、微量元素代谢4.锰锰广泛分布于各组织中脑、肝脏、肾脏、胰脏中含量较高，以不溶性磷酸盐的形式贮存。三、微量元素代谢5.腆体内的腆大部分集中在甲状腺中用于合成甲状腺素。甲状腺素具有促进蛋白质合成、促进生长发育、调节能量代谢、维持中枢神经系统的结构和功能等作用。拓展与应用微量元素对动物生长发育的影响微量元素是动物维持健康和正常生理功能的必需成分，对于调节体液的pH值，维持渗透压稳定对细胞膜、酶系统、激素功能的发挥起重要的作用。当饲粮中缺乏某些微量元素时，将影响动物的生长发育，引发疾病。本章小结思考与练习1.什么叫体液？各部分体液中电解质的组成有何特点？2.水和无机盐有哪些生理功能？3.机体如何维持水和电解质的平衡？4.铁在体内的主要生理功能是什么？哪些因素影响铁的吸收？生物化学实验技能及基本训练YOURLOGO化学实验、公开课、教师说课、教学培训PPT模板主讲人：稻小壳第一部分生物化学实验基本技术一、离心分离技术离心分离原理离心是指利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或浮力、密度的差异进行分离、浓缩和提纯的一种方法。颗粒的沉降速度取决于离心机的转速及其自身与中心轴的距离。按转速不同可将离心机分为常速、高速和超速3类一、离心分离技术2.离心分离基本方法1.差速离心法2.速率区带离心3.等密度梯度离心二、分光光度技术分光光度计的基本原理分光光度计进行比色分析的基本原理是根据朗伯一比尔（Lambert-Beer）定律，这个定律是讨论有色溶液对单色光的吸收程度与溶液浓度及液层厚度间的定量关系，公式为E=kcL式中：E一一消光度（光密度OD，吸光度A);K-－消光系数，仅与入射光波长有关；c一一溶液浓度；L一一液层厚度。二、分光光度技术2.分光光度检测的基本方法(1）样品溶液的配制：对紫外光、可见光或红外光有选择性吸收特性的物质，只需选择适当的溶剂配制成一定浓度范围的样品溶液即可进行分光光度检测。二、分光光度技术2.分光光度检测的基本方法(2）样品检测与定性、定量分析：根据待测物质的吸收光谱特性，选择好入射光线的波长，用蒸馆水或空白液调节好零点，即可进行样品的检测。欲确定待测物质，有下列3种方法。1）将样品溶液在一定条件下（pH、温度、缓冲液等）的吸收光谱（吸光度－波长曲线）与物质的标准吸收光谱（有关手册可以查到）相对照，借以推断样品属于什么物质。二、分光光度技术2.分光光度检测的基本方法(2）样品检测与定性、定量分析：根据待测物质的吸收光谱特性，选择好入射光线的波长，用蒸馆水或空白液调节好零点，即可进行样品的检测。欲确定待测物质，有下列3种方法。2）根据吸收光谱中峰顶与峰谷吸光度比值与相当条件下资料所载的比值相比较，推断样品是何物质。例如：ATP:OD280/OD260=0.85OD250/OD260=0.90AMP:OD250/0D260=0.85OD280/0D260=0.22二、分光光度技术2.分光光度检测的基本方法(3）用分光光度法测定注意事项1）分光光度计滤光性能。2）吸光度值应控制在0.05~1.0。3）正确选用参比溶液，当显色剂及其他试剂均元色而被测溶液中又元其他离子时，可用蒸馆水作参比溶液；如显色剂本身具有颜色，则用显色剂作对照。三、电泳技术各种生物大分子在一定pH条件下，可以成为带电荷的颗粒，这种带电颗粒在电场的作用下向相反电极移动的现象称为电泳。电泳技术广泛应用在生化物质的分析检测中。1.电泳基本原理三、电泳技术各种生物大分子在一定pH条件下，可以成为带电荷的颗粒，这种带电颗粒在电场的作用下向相反电极移动的现象称为电泳。电泳技术广泛应用在生化物质的分析检测中。2.常用的电泳技术(1）薄膜电泳：(2）薄层电泳:(3）凝胶电泳：四、层析分离技术层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等）尽管各种层析的原理和操作有所不间，但其基本步骤是相同的，包括选择适当的层析材料、上样（点样）、洗脱（展层）、检测鉴定等4个环节。(1）柱层析法：四、层析分离技术尽管各种层析的原理和操作有所不间，但其基本步骤是相同的，包括选择适当的层析材料、上样（点样）、洗脱（展层）、检测鉴定等4个环节。(2)纸层析法：纸层析法又称纸色谱法，是以纸为载体的色谱法。四、层析分离技术(2)纸层析法：纸层析法又称纸色谱法，是以纸为载体的色谱法。1）原理纸层析法是依据极性相似相溶原理，以滤纸纤维的结合水为固定相，以有机溶剂作为流动相的分离方法2）操作方法。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂展开，最后形成互相分离的斑点。四、层析分离技术(3）离子交换层析法：离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换来分离离子型化合物的一种方法。基本原理：离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之为阴离子交换树脂，带有负电荷的称之阳离子交换树脂。四、层析分离技术(4)凝胶层析法：凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、多肽、激素、多糖、核酸类等物质。1）凝胶层析法原理。四、层析分离技术(4)凝胶层析法：凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、多肽、激素、多糖、核酸类等物质。2）凝胶层析的基本技术。凝胶的选择与处理：凝胶的处理：其过程为吸水溶胀→除去微小颗粒→减压排气等。凝胶层析的基本过程：凝胶层析常采用柱层析，其操作方法与其他柱层析相似，包括装柱、加样、洗脱收集飞检测等。层析柱如图3所示。第二部分生物化学实训实训一血清蛋白醋酸薄膜电泳实训一

血清蛋白醋酸薄膜电泳一、目的要求(1）了解醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的原理。(2）掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作方法。二.原理电泳是指带电粒子在电场中向相反电极移动的现象。蛋白质分子在溶液中的电泳是由于蛋白质的分子具有一些可解离的基团，因而在某种pH值溶液中蛋白质分子就带有一定电荷。实训一

血清蛋白醋酸薄膜电泳三、试剂和器材试剂(1)pH值8.6巴比妥缓冲液：巴比妥纳12.76g，巴比妥1.66g，溶于蒸馆水，定容至1000mL。(2）染色液：氨基黑10B5g溶于水400mL，甲醇500mL，冰醋酸100mL中。(3）漂洗液：959毛乙醇450mL，冰醋酸50mL，水500mLo(4）透明液：无水乙醇7份，冰醋酸3份。(5）洗脱液：0.4mol/LNaOH溶液。(6）动物血清（制备时要无溶血现象）。实训一血清蛋白醋酸薄膜电泳三、试剂和器材2.器材醋酸纤维素薄膜（2cmX8cm）、常压电泳仪和电泳槽、点样器（盖玻片）,培养皿（染色及漂洗用）、滤纸、剪刀、慑子（元齿）、玻璃板、白瓷反应板、分光光度计、吹风机、铅笔。实训一血清蛋白醋酸薄膜电泳四、操作步骤准备用慑子取醋酸纤维薄膜1张（识别出光泽面与无光泽面，并在无光泽面角上用铅笔做上记号）放在缓冲液中浸泡20min。若放在缓冲液中后迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则表明薄膜质地均匀；若润湿时，薄膜出现深浅不一的条纹或斑点等，则为薄厚不匀的薄膜。实验中应选用质地均匀的薄膜，因为纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。实训一血清蛋白醋酸薄膜电泳四、操作步骤2.点样把膜条从缓冲液中取出夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体，然后平铺在玻璃板上（元光泽面朝上），将点样器先在白瓷板上的血清中蘸一下，再在膜条一端2~3cm处轻轻地水平落下并随即提起这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。实训一血清蛋白醋酸薄膜电泳四、操作步骤3.电泳在电泳槽内加入缓冲液使两个电极槽内的液面等高将膜条元光泽面向下平悬于电泳槽支架的滤纸桥上（先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲液内.膜条上点样的一端靠近负极，盖严电泳室，通电，调节电压至160V，电流强度0.4~0.7mA/cm膜宽，电泳时间为40~60min，待电泳区带展开3~5cm时关闭电源。实训一血清蛋白醋酸薄膜电泳四、操作步骤4.染色和漂洗电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡10min。将膜条从染色液中取出，置漂洗液中漂洗数次至无蛋白区底色脱净为止，可得色带清晰的电泳图谱。5.结果判断一般经漂洗后，薄膜上可呈现清晰的5条区带，由正极端起，依次为清蛋白、αl球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。实训一血清蛋白醋酸薄膜电泳五、结果方法一：将上述漂净的薄膜用滤纸吸干剪下各种蛋白质色带分别浸于4.0mL洗脱液（37℃）中5~10min，色泽浸出后，比色（590nm）。设各部分的光密度分别为：OD清、ODα1飞ODα2、ODβ、ODγ。则光密度总和OD总为实训一血清蛋白醋酸薄膜电泳五、结果方法二：把薄膜放在滤纸上用电吹风吹干待薄膜完全干燥后，浸入透明液中5~10min，取出，平贴于干净玻璃片上，自然干燥或用电吹风冷风吹干，即得背景透明的电泳图谱，可用刀片刮开并从玻板上取下图谱。可用光密度计测定各蛋白斑点。此图谱可长期保存。实训一血清蛋白醋酸薄膜电泳(1）血清样品为何点在负极端？(2）总结醋酸纤维薄膜用作电泳支持物的特点。思考題:实训二双缩服法测定蛋白质含量实训二

双缩服法测定蛋白质含量一、目的要求(1）掌握双缩腮法测定蛋白质浓度的原理和标准曲线的绘制方法。(2）熟悉双缩腺法测定蛋白质浓度的实验操作。二、原理双缩服（NH2CONHCONH2）在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物，称为双缩服反应；蛋白质分子中含有许多肤键，在碱性溶液中也能与Cu2＋反应产生紫红色化合物。在一定范围内其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。因此，可以利用比色法测定蛋白质浓度。实训二

双缩服法测定蛋白质含量三.试剂和器材1.试剂6mol/LNaOH溶液：称取240g氢氧化纳溶于1000mL水中。0.9%NaCl溶液：称取9g氯化纳溶于1000mL水中。蛋白质标准液（10mg/mL）：称取干燥的牛血清蛋白100.0mg，以少量生理盐水溶解后倒入10mL容量瓶中，淋洗称量瓶数次，一并倒入容量瓶中，最后加生理盐水至刻度线，或用凯氏定氮法测定血清蛋白质含量，然后稀释成10mg/mL作为蛋白质标准液。双缩腺试剂：称取CuS04·5H203.0g，酒石酸饵纳9.0g和腆化饵5.0g，分别溶解后混匀，加6mol/LNaOH100mL，最后加水至1000mL，贮于棕色瓶中，避光，可长期保存。待测血清：将人血清或动物血清用生理盐水稀释10倍。2.器材试管、移液管（1mL,10mL）、水浴锅、721型分光光度计、坐标纸、分析天平。实训二

双缩服法测定蛋白质含量四、操作步骤取试管7支，按下表操作。各管混匀，放置37℃水浴中保温20min.540nm比色，以空白管调零点，读取各管吸光度值。实训二

双缩服法测定蛋白质含量六、思考题(1）绘制标准曲线时的注意事项有哪些？(2）双缩服法有何特点？实训三动物组织核酸的提取与鉴定实训三

动物组织核酸的提取与鉴定一、目的要求(1）掌握从动物组织中提取核酸的实验原理。(2）熟练掌握从动物中提取核酸的实验技术。二、原理核酸是广泛存在于生物细胞内的一类高分子物质。在细胞核内核酸通常与某些组织蛋白质结合成复合物，即以脱氧核糖核蛋白（DNP）和核糖核蛋白（RNP）的形式存在，在提取过程中这两种核蛋白会混在一起。实训三

动物组织核酸的提取与鉴定三、试剂和器材试剂(1)0.14moVLNaCl-0.01moVLEDTA溶液（pH7.0）：称取NaCl8.18ι乙二胶四醋酸二纳盐3.27g，加蒸馆水溶解，调pH至7，定容至1000mL。(2)250g/LSDS溶液：称取十二烧基硫酸纳25g，溶于50%乙醇中，定容至100mL。(3)2moVLNaCl溶液：称取11.7gNaCl，用蒸馅水配成100mL溶液。(4)氯仿－异戊醇：氯仿24份与异戊醇1份混合。(5)95%乙醇。(6）动物肝脏。2.器材紫外分光光度计、玻璃匀浆器、离心机、恒温水浴锅、玻棒、量筒、吸管、三角瓶、烧杯等。实训三

动物组织核酸的提取与鉴定四、操作步骤提取DNA(1）选取鸡或兔肝脏为实验材料，实验动物应在实验前饥饿1~2d，使肝糖原含量降低以免干扰试验。(2）将实验动物放血处死，取其肝脏或肾脏（约2剖，浸于预冷至0℃的0.14moVLNaCl一0.01moVLEDTA中，除去脂肪、血块等杂物，反复洗几次，用滤纸吸干水分。(3）低温下将组织剪碎，加入7mL0.14moVLNaCl-0.01moVLEDTA溶液混匀，在玻璃匀浆器中捣至大部分细胞破碎为止。(4)2500r/min离心15min，弃上层液体，向沉淀中再加入0.14moVLNaCl-0.01moVLEDTA液混匀再次离心洗涤。实训三动物组织核酸的提取与鉴定四、操作步骤提取DNA(5）经洗涤后的沉淀，加入3mL0.14mol/LNaCl-0.01mol/LEDTA边搅拌边缓缓滴入250g/LSDS0.4mL，转入匀浆器内匀浆使沉淀悬浮均匀再加入2mol/LNaCl4mL，此时由于大分子DNP的溶出，溶液由教稠变稀薄。(6）转入三角瓶，加入等容积的氯仿－异戊醇8mL剧烈振摇15min0将混合液于3000r/min离心10min。上层为水溶液，下层为氯仿，中间层为变性蛋白。吸出上层水溶液，加入等体积的氯仿－异戊醇，剧烈振摇15min再于3000r/min离；Ù•lOmin,如此重复直至中间蛋白层消失。(7）取上层水溶液，加入2倍体积959毛乙醇，边加边用玻棒搅拌此时可不断见到有结稠状物质（DNA）逐渐缠于玻棒上，尽量将水分在玻璃壁上挤干，然后溶于1mL2mol/LNaCl溶液中，留作定量、电泳用。实训三动物组织核酸的提取与鉴定四、操作步骤2.测定DNA(1）吸取5μLDNA样品，加水至1mL（稀释200倍），混匀后用石英比色杯进行吸光度值测定。(2）分光光度计先用1mL蒸馆水校正零点，在260nm处读出样品吸光度值。如果A2旷A2&0比值大于1.8，说明存在RNA，可以考虑用RNA酶处理样品；比值小于1.6，说明样品中存在蛋白质，应再次抽提，之后用乙醇沉淀纯化DNA。五、结果把实验结果代入下面公式中：样品中DNA的浓度＝A260x核酸稀释倍数x50/1000实训三动物组织核酸的提取与鉴定五、结果把实验结果代入下面公式中：样品中DNA的浓度＝A260x核酸稀释倍数x50/1000实训三动物组织核酸的提取与鉴定六、注意事项(1）由于组织中广泛存在DNA核酸酶，因此全部提取过程应在低温下（4℃以下）操作，并加入拧棱酸盐、EDTA等核酸酶的抑制剂，以防止其降解。(2）由于核酸极不稳定，在较剧烈的化学、物理因素和酶的作用下很容易被降解，因此在制备过程中应尽量避免这些因素的影响。(3）由于DNA分子大而长，为了获得大的DNA分子而不被破坏在实验中应尽量避免剧烈振荡、用力过猛。不可用口径小的滴管、吸头吸取转移DNA溶液。(4）酚有腐蚀性，操作时应小心，若沾在皮肤上应立即用水或70%乙醇擦洗。实训三动物组织核酸的提取与鉴定七、思考题?(1）如何防止大分子核酸在提取过程中被降解？?(2）氯仿一异戊醇的作用是什么？?(3）在提取DNA的过程中，应该注意哪些问题？实训四牛乳中酪蛋白的制备实训四

牛乳中酪蛋白的制备一、目的要求掌握从牛乳中制备酶蛋白的原理和操作。二.原理酪蛋白是牛乳中主要的蛋白质，它在牛乳中的含量约为35g/L。将牛乳pH调到4.6，酪蛋白即可从牛乳中分离出来。实训四

牛乳中酪蛋白的制备三、试剂和器材试剂pH4.6醋酸纳缓冲液（0.2moνL):A液（0.2moVL醋酸纳溶液）：称NaAc•3H2054.44g于2000mL容量瓶内，定容至2000mL0B液（O.2moVL醋酸溶液）：称纯醋酸（含量大于99.8%)12.0g，定容至1000mL。取A液1770mL,B液1230mL混合即得pH4.6醋酸纳缓冲液。(2)95%乙醇。(3)95%乙醋。(4）乙醇－乙醚混合液(1:1体积比）(5）牛乳.2.器材离心机、pH试纸、温度计、布氏漏斗、抽滤瓶,电炉、烧杯飞量筒等。实训四

牛乳中酪蛋白的制备四、操作步骤1.酪蛋白的粗提(1）将100mL牛乳放到500mL烧杯中，加热至40℃，边搅拌边慢慢加入100mL40℃左右的醋酸纳缓冲液，直到pH达到4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。(2）将上述悬浮液冷却至室温，放置5min,3000r/min离心15min，弃去上清液，即得酷蛋白粗制品。实训四牛乳中酪蛋白的制备2.酪蛋白的纯化(1）用水洗涤沉淀3次，3000r/min离心10min，弃去上清液。(2）在沉淀中加入30mL95%乙醇，搅拌片刻，将悬浊液转移至布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液再倒入乙醇一乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后用乙醚洗涤沉淀两次，抽干。”(3）将布氏漏斗中的沉淀移出，在表面皿上摊开、风干，即得自各蛋白纯品。3.准确称重。实训四牛乳中酪蛋白的制备五、结果(1）准确称重后，计算出每100mL牛乳中制备出的酪蛋白含量（g)。(2）求出自酪蛋白收率，即收率（%）＝测得含量／理论含量x100%实训四牛乳中酪蛋白的制备六、思考题实训五唾液淀粉酶的特性实验实训五

唾液淀粉酶的特性实验一.目的要求(1）了解酶的性质，掌握不同因素对酶活性影响的原理。(2）掌握不同因素对酶活性影响的测定方法。实训五唾液淀粉酶的特性实验三、试剂和器材1.试剂(1)1%淀粉溶液：取淀粉1g加蒸馆水少许，搅拌成糊状然后用煮沸的1%NaCl溶液稀释至100mL0(2)0.1moVLpH值5~8磷酸盐缓冲液：分别配制下列两种溶液，再按下表混合后稀释1倍即可。0.2moVLNaH2P04液：称取NaH2P04·2H2031.2g，加水准确定容至1000mL。0.2moVLNa2HP04·12H2O液：称取0.2moVLNa2HP04·12H2071.64g，加水准确定容至1000mL。实训五唾液淀粉酶的特性实验三、试剂和器材1.试剂(3）腆溶液：腆化饵1g加少许水溶解后，再加腆0.5g，溶后加水至100mL，用时加10倍水稀释。(4)0.1%淀粉溶液：将1%淀粉溶液稀释至10倍。(5)1%NaCl溶液。(6)1%CuS04溶液。(7)1%Na2S04溶液。(8)1%震糖。(9）班氏试剂：拘橡酸纳173g和碳酸纳100g溶于约700mL水中，另将硫酸铜17.3g溶于100mL水中。可分别加热助溶。冷却后将两液混合，再加水至1000mL混匀。2.器材水浴锅、电炉、比色板＼吸管、试管、烧杯。实训五唾液淀粉酶的特性实验四、操作步骤1.唾液淀粉酶的制备每人用自来水漱口3次，然后取20mL蒸馆水含于口中，1min后吐入烧杯中，纱布过滤，取滤液10mL，稀释至20mL为稀释酶液。2.温度对酶活性的影响取4支试管，编好号，加入淀粉酶，分别放入冰水浴、37℃水浴和沸水浴中，待管内温度与水浴温度一致时，向4支试管同时迅速加入稀释唾液，摇匀后及时放回原水浴中。实训五唾液淀粉酶的特性实验四、操作步骤(1）在比色板各孔中置腆液1滴，每隔1~2min用滴管从第3管中取反应液1滴，滴入比色板一孔中观察腆液颜色变化每次取反应液之前，都应将滴管洗净后才能取反应液。待检查到腆液颜色不变时取出第4管冷却后，再取出第1管，两管同时各加入腆液1滴，摇匀，观察并记录各管颜色。(2）取出第2管置于37~40℃水浴中，10min后加入2滴腆液，其颜色与第1管比较有何变化？根据观察和记录结果说明温度对酶活性的影响。实训五唾液淀粉酶的特性实验3.pH对酶活性的影响(1）比色板中加腆液备用，准备好37℃水浴。(2）取小试管4支，编号，按下表加入试剂，混匀。实训五唾液淀粉酶的特性实验(3)4号管加稀释酶液10滴，放37℃水浴中，计时，每隔1min由第4号试管中取出1滴溶液做腆反应，待腆反应呈浅红色或橙黄色时，取出试管，记录保温时间。(4)1~3号试管放入37℃水浴中，向1~3号管中加入稀释唾液10滴，摇匀，按照4号管的保温时间，取出各管，并立即加腆液2滴，混匀。观察各管呈现的颜色，判断在不同pH值下淀粉被水解的程度，分析pH对淀粉酶活性的影响，并确定其最适pH值。实训五唾液淀粉酶的特性实验4.激活剂和抑制剂对酶活性的影响取4支试管，按下表编号后进行实验。实训五唾液淀粉酶的特性实验5.酶的专一性取试管3支，编号，按下表操作：将各管放沸水浴中煮沸3~5min，观察结果。实训五唾液淀粉酶的特性实验五、思考题(1)认真填写各项表格，分析实验结果。(2)实验中必须控制哪些条件？为什么？实训六琥珀酸脱氢酶作用及其竞争性抑制观察实训六

琥珀酸脱氢酶作用及其竞争性抑制观察一、目的要求(1）理解竞争性抑制作用的原理。(2）理解丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用。二、原理本实验利用肝细胞中提取的玻王自酸脱氢酶，在无氧的情况下使琥珀酸脱氢，脱下的氢由蓝色亚甲蓝（甲烯蓝）接受，将蓝色的亚甲蓝还原成无色的甲烯白。反应如下：实训六

琥珀酸脱氢酶作用及其竞争性抑制观察三、试剂和器材1.试剂(1)0.1moVL磷酸盐缓冲液（pH7.4）：取0.1moVLNa2HP04溶液19mL和0.1moVLNaH2P04溶液81mL混合。(2)1.5%珑王自酸纳溶液：取琉王自酸纳1.5g，用蒸馆水溶解并定容到100mL。(3)1%丙二酸纳溶液：取丙二酸纳1g，用蒸馆水溶解并定容到l00mL。(4)0.02%亚甲蓝溶液。(5）生理盐水。(6）液体石蜡。2.器材水浴锅、匀浆器或研钵、剪刀、试管、滴管等。实训六琥珀酸脱氢酶作用及其竞争性抑制观察四、操作步骤1.琥珀酸脱氢酶液的制备取新鲜动物肌肉或肝脏5g左右，放入研钵，用剪刀将组织剪碎，按20%浓度加入在冰箱中保存的pH7.4的磷酸缓冲液l0mL充分研磨均匀，过滤备用。2.酶反应及竞争性抑制作用的观察(1）取4支试管分别编号，按下表操作。实训六琥珀酸脱氢酶作用及其竞争性抑制观察五、思考题(1）竞争性抑制作用与非竞争性抑制作用有何不同？(2）加液体石蜡的目的是什么？实训七层析法分离测定氨基酸实训七

层析法分离测定氨基酸一、目的要求(1）掌握纸层析法分离氨基酸的原理和方法。(2）能够利用纸层析法分析样品氨基酸的成分。二原理层析法是利用混合物中各组分之间物理化学性质的差异，使各组分不同程度地分布在两相中（固定相和流动相），从而达到分离。分配系数＝物质在固定相中的浓度／物质在流动相中的浓度实训七

层析法分离测定氨基酸三、试剂和器材1.试剂(1）扩展剂：4份水饱和的正丁醇和1份乙酸的混合物。将20mL正丁醇和5mL冰乙酸放入分液漏斗中，与15mL水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层。取漏斗内的扩展剂约5mL置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用。(2）氨基酸溶液：0.5%赖氨酸、脯氨酸、缴氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液（各组分浓度均为0.5%），各5mL。(3）显色贮备液：0.1%水合苟三百同的正了醇溶液。2.器材层析缸、毛细管、喷雾器、培养皿、小烧杯飞铅笔、电吹风机、针、白线飞手套、层析滤纸（新华一号）实训七

层析法分离测定氨基酸四、操作步骤(1）将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。(2）取层析滤纸（长22cm、宽14cm）一张。在纸的一端距边缘2~3cm处用铅笔画一条直线，在此直线上每间隔2cm做一记号，如图4所示。实训七

层析法分离测定氨基酸四、操作步骤(3）点样：用毛细管将各种氨基酸样品分别点在这6个位置上，干后再点一次，每点在纸上扩散的直径最大不超过3mmo(4）扩展：用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将盛有约20mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1cm）。待溶剂上升15~20cm时即取出滤纸，自然干燥或用吹风机热风吹干。(5）显色：用喷雾器均匀喷上0.1%苟三四同正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5min(100℃），或用热风吹干即可显出各层析斑点。注意操作过程中避免用手接触层析滤实训七

层析法分离测定氨基酸五、结果用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺测量每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的Rf值，与标准氨基的Rf值对照，确定水解液中含有哪些氨基酸。实训七

层析法分离测定氨基酸六、思考题(1）为什么几种氨基酸的Rr值不同？(2）为什么显色过程中避免用于接触滤纸？实训八福林一吴宪法测定血糖含量实训八

福林一吴宪法测定血糖含量一、目的要求(1）掌握福林一吴宪法测定血液葡萄糖含量的原理和方法。(2）掌握分光光度计的原理和使用方法。二、原理动物血液中的糖主要是葡萄糖。正常情况下，血糖浓度相对恒定。实训八

福林一吴宪法测定血糖含量三、试剂和器材1.试剂(1)10%鸽酸纳溶液：取鸽酸纳（Na2W04·2H20)10g，用蒸馆水溶解并稀释至100mL。(2)0.333mol/L硫酸溶液：取1份1mol/LH2S04溶液，加2份水。(3）碱性铜试剂：在400mL水中加入无水碳酸纳40趴在300mL水中加入酒石酸7.5趴在200mL水中加入结晶硫酸铜4~5g。以上分别加热溶解，冷却后将酒石酸溶液倾入碳酸纳溶液中，再将硫酸铜溶液倾人，并加水至1000mL。混匀，贮存于棕色瓶中。(4）磷铝酸试剂：取夺目酸35g和鸽酸纳10g，加入10%NaOH溶液400mL及蒸馆水400mL，混合后煮沸20~40min，以除去铝酸中存在的氨（直至元氨味为止），冷却后加入浓磷酸（80%)250mL，混匀，贮存于棕色瓶中。(5)0.259毛苯甲酸溶液：称取苯甲酸2.5g加入1000mL蒸馆水中，煮沸使之溶解，冷却后补加至1000mL，此试剂可长期保存。实训八

福林一吴宪法测定血糖含量三、试剂和器材(6）葡萄糖贮存标准溶液（10mg/mL）：将少量元水葡萄糖（A.R.或C.P）置于硫酸干燥器内一夜后精确称取此葡萄糖1.000g，以0.259毛苯甲酸溶液溶解并移入100mL容量瓶内再以0.259毛苯甲酸溶液稀释至100mL，置冰箱中可长期保存。(7）葡萄糖应用标准溶液（0.1mg/mL）：准确吸取葡萄糖贮存标准溶液1.0mL,置100mL容量瓶内以0.25%苯甲酸溶液稀释至100mL。(8）动物血清。2.器材试管及试管架、奥氏吸管、吸管、锥形瓶、血糖管、电炉、分光光度计、漏斗、滤纸等。实训八福林一吴宪法测定血糖含量四、操作步骤1.无蛋白血滤液的制备鸽酸铀与硫酸混合生成鸽酸和硫酸纳，血液中蛋白质在pH小子等电点的溶液中可被鸽酸沉淀，将沉淀液过滤或离心，上层清液即为无色透明、pH约等于6的无蛋白滤液。(1）取20mL锥形瓶1只，加入蒸馆水7mL0(2）用奥氏吸管吸取抗凝血lmL，擦去管壁外血液，将吸管插入锥形瓶底部，缓缓放出血液。放完血液后，将吸管提高吸取上清液再吹入，反复洗管3次。充分混匀，使红细胞完全溶解。实训八福林一吴宪法测定血糖含量四、操作步骤(3）加入0.333mol/L硫酸溶液1mL，边加边摇，充分混匀，此时血液由鲜红色变成棕色，静置5~10min，使其酸化完全。(4）加入10%钨酸纳1mL，边加边摇。(5）放置约5min后，直至振摇也不再发生泡沫，说明蛋白质已经完全变性沉淀。用定量滤纸过滤或离心（2500r/min,10min），即得完全澄清无色的无蛋白血滤液。实训八福林一吴宪法测定血糖含量四、操作步骤2.取血糖管3支按下表操作。实训八福林一吴宪法测定血糖含量五、结果将测得数值代入下列公式计算：实训八福林一吴宪法测定血糖含量六、注意事项(1）正常畜禽在饲喂前采血，病畜禽要在补糖前采血，否则结果偏高。(2）采血后最好在2~4h测定完毕。若放置过久，由于红细胞的酵解作用，会使结果偏低；如不能及时测定，应制成无蛋白血滤液置于冰箱内保存。(3）在本法的元蛋白血滤液中，除含有葡萄糖外，尚有微量的其他还原物质，故测定结果比实际血糖含量高10%左右。(4）一定要等水沸后再放入血糖管加热时间必须准确否则会影响实验结果的准确性。(5）加入磷铝酸试剂后显色不稳定应立即进行比色。(6）若酸性铝酸盐试剂出现蓝色，表示试剂本身已被还原，不能再用，应重新配制。(7）若碱性硫酸铜试剂出现红黄沉淀，则不宜使用须重新配制。实训八福林一吴宪法测定血糖含量七、思考题(1）此法测定葡萄糖的原理是什么？(2）实验中，若测定管颜色明显深于或浅于标准管颜色时应如何处理？(3）实验中哪些操作会影响测定结果？实训九粗脂肪含量的测定一一索氏抽提法实训九粗脂肪含量的测定一一索氏抽提法一、目的要求(1）了解索氏提取器的基本结构