氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜胞间多糖粘附素及相关基因调控的体外作用解析

氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜胞间多糖粘附素及相关基因调控的体外作用解析一、引言1.1研究背景表皮葡萄球菌（Staphylococcusepidermidis）作为人体皮肤和黏膜的正常菌群，通常情况下并不会引发疾病。然而，随着医疗技术的不断进步，各种生物材料如人工关节、心脏起搏器、导尿管等在临床上的广泛应用，表皮葡萄球菌已逐渐成为医院感染的主要条件致病菌之一。据相关研究统计，在医院获得性感染中，表皮葡萄球菌所致的感染比例呈逐年上升趋势，其引发的感染类型多样，涵盖了血液感染、呼吸道感染、泌尿系统感染以及植入物相关感染等，严重威胁患者的健康与生命安全。表皮葡萄球菌的主要致病机制是能够在生物材料表面或机体组织表面形成生物膜（biofilm）。生物膜是一种由细菌细胞、胞外多糖、蛋白质、核酸等物质组成的复杂结构，具有稳定的结构、高代谢活性、耐药性以及高生存能力等特点。一旦表皮葡萄球菌形成生物膜，膜内的细菌对抗生素的耐药性会比浮游菌增加10-1000倍，这使得感染难以控制，易转变为慢性感染。生物膜的存在不仅为细菌提供了物理屏障，阻碍抗生素的渗透和免疫细胞的攻击，还可通过调节细菌的生理状态和基因表达，进一步增强其耐药性和致病性。例如，生物膜内的细菌生长速度缓慢，处于一种相对休眠的状态，这种状态使得它们对抗生素的敏感性显著降低，常规的抗生素治疗往往难以彻底清除生物膜内的细菌，导致感染反复发作，迁延不愈。在表皮葡萄球菌生物膜的形成过程中，胞间多糖粘附素（PolysaccharideIntercellularAdhesion，PIA）起着关键作用。PIA由icaADBC基因编码的糖基转移酶催化合成，是生物膜的主要组成成分之一。PIA能够介导细菌之间的粘附以及细菌与生物材料表面的粘附，促进生物膜的初始形成和成熟。同时，PIA还可以与其他胞外物质相互作用，共同构建生物膜的三维结构，增强生物膜的稳定性。研究表明，icaADBC基因的表达受到多种调控基因的影响，这些调控基因通过复杂的调控网络，精细地调节icaADBC基因的转录和翻译过程，从而影响PIA的合成和生物膜的形成。例如，agr（accessorygeneregulator）基因调控系统可通过调节相关信号通路，间接影响icaADBC基因的表达，进而影响生物膜的形成；SarA（staphylococcalaccessoryregulatorA）蛋白也参与了对icaADBC基因表达的调控，其具体机制涉及与icaADBC基因启动子区域的相互作用，以及对其他调控因子的调节。氨溴索（Ambroxol）是一种临床常用的药物，最初主要用于呼吸系统疾病的治疗，具有祛痰、促进肺表面活性物质合成和释放、抗炎及抗氧化等作用。近年来，越来越多的研究发现，氨溴索在抗感染领域展现出独特的作用。其能够破坏细菌生物膜的结构，增强抗生素对生物膜内细菌的杀伤作用，为治疗生物膜相关感染提供了新的思路和方法。氨溴索可能通过多种途径影响细菌生物膜的形成和结构，例如，它可以干扰细菌的群体感应系统，抑制细菌间的信号传递，从而影响生物膜相关基因的表达；还可能通过改变生物膜内的物理化学环境，破坏生物膜的稳定性，使细菌更容易受到抗生素和免疫细胞的攻击。然而，目前关于氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜胞间多糖粘附素及其调控基因的作用机制尚未完全明确，仍需进一步深入研究。本研究旨在探讨氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜胞间多糖粘附素及其调控基因的作用，通过体外实验，深入研究氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜形成、PIA合成以及相关调控基因表达的影响，揭示其潜在的作用机制，为临床治疗表皮葡萄球菌生物膜相关感染提供理论依据和新的治疗策略。1.2研究目的与意义本研究旨在深入探究氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜胞间多糖粘附素及其调控基因的作用机制，为临床治疗表皮葡萄球菌生物膜相关感染提供理论依据和新的治疗策略。表皮葡萄球菌生物膜相关感染的治疗一直是临床上的难题，传统抗生素治疗效果不佳，容易导致感染的迁延不愈和反复发作。这不仅给患者带来了极大的痛苦，增加了患者的医疗费用和住院时间，还可能引发严重的并发症，甚至危及患者的生命。据统计，在植入物相关感染中，表皮葡萄球菌感染占相当高的比例，且治疗失败率较高。因此，寻找新的治疗方法和药物，提高对表皮葡萄球菌生物膜相关感染的治疗效果，具有迫切的临床需求。氨溴索作为一种具有多种药理作用的药物，近年来在抗感染领域的研究逐渐受到关注。研究发现，氨溴索能够破坏细菌生物膜的结构，增强抗生素对生物膜内细菌的杀伤作用，但其具体作用机制尚未完全明确。本研究通过探讨氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜形成、PIA合成以及相关调控基因表达的影响，有望揭示其潜在的作用机制，为氨溴索在临床治疗表皮葡萄球菌生物膜相关感染中的应用提供科学依据。从临床治疗角度来看，明确氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜的作用机制，有助于开发新的治疗方案，提高临床治疗效果。一方面，氨溴索与传统抗生素联合使用，可能通过破坏生物膜结构，增强抗生素的渗透和杀菌作用，从而提高对表皮葡萄球菌生物膜相关感染的治疗成功率；另一方面，对于一些对抗生素耐药的表皮葡萄球菌感染，氨溴索可能成为一种新的治疗选择，为临床治疗提供更多的手段。在药物开发方面，本研究的结果也具有重要的指导意义。通过深入了解氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜相关基因的调控作用，可以为开发新型的抗生物膜药物提供新的靶点和思路。基于氨溴索的作用机制，研发具有更强抗生物膜活性的药物，或者优化氨溴索的结构和剂型，提高其疗效和安全性，将有助于推动抗生物膜药物的发展。此外，本研究还有助于深入理解细菌生物膜的形成和调控机制，丰富微生物学和感染病学的理论知识。表皮葡萄球菌生物膜的形成是一个复杂的过程，涉及多个基因和信号通路的调控。研究氨溴索对这些基因和通路的影响，不仅可以揭示其抗生物膜的作用机制，还可以为研究其他细菌生物膜的形成和调控提供参考，为开发通用的抗生物膜策略奠定基础。二、表皮葡萄球菌生物膜相关理论2.1表皮葡萄球菌简介表皮葡萄球菌（Staphylococcusepidermidis）是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名，属于细球菌科葡萄球菌属。作为人体皮肤和黏膜上定居的正常菌群之一，表皮葡萄球菌广泛分布于人体的皮肤、呼吸道、胃肠道、鼻腔、外耳道等部位。在正常人体皮肤上，每平方厘米的表皮葡萄球菌数量可达10³-10⁶个，在鼻腔中的携带率也较高，约为20%-50%。在健康个体中，表皮葡萄球菌通常与人体处于共生状态，不会引起疾病，甚至在一定程度上对人体有益。它可以通过竞争营养物质和生存空间，抑制其他有害微生物的生长和繁殖，起到维持人体微生态平衡的作用。例如，表皮葡萄球菌能够产生一些抗菌物质，如细菌素、脂肪酸等，这些物质可以抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等病原菌的生长，从而降低感染的风险。然而，当机体免疫功能下降、皮肤或黏膜屏障受损，或者进行侵入性医疗操作时，表皮葡萄球菌就可能趁机大量繁殖，突破人体的防御机制，引发感染。随着留置静脉导管、人工瓣膜、人工关节等侵入性操作的日益增多，表皮葡萄球菌已成为医院感染的重要病原菌之一。在医院环境中，表皮葡萄球菌的耐药率较高，这使得其引起的感染治疗更加困难。据统计，在医院获得性感染中，表皮葡萄球菌所致的感染约占10%-20%，其中植入物相关感染中，表皮葡萄球菌感染的比例可高达50%以上。在人工关节置换术后感染中，表皮葡萄球菌是最常见的病原菌之一，其感染率约为1%-5%，严重影响患者的术后康复和生活质量。表皮葡萄球菌引发的感染类型多样，包括皮肤软组织感染、呼吸道感染、泌尿系统感染、心内膜炎、败血症等。不同类型的感染临床表现各异，严重程度也不尽相同。皮肤软组织感染常表现为疖、痈、毛囊炎等，症状相对较轻；而心内膜炎、败血症等则病情凶险，死亡率较高，如心内膜炎患者的死亡率可达20%-40%。与金黄色葡萄球菌相比，表皮葡萄球菌的毒力相对较低，它仅产生一种毒素——溶血性的δ-毒素。这使得表皮葡萄球菌一般仅引起亚急性或慢性的细菌感染，但在某些特定情况下，如异物植入感染中，表皮葡萄球菌却能发挥重要的致病作用。在异物植入感染中，表皮葡萄球菌能够在植入物表面形成生物膜，这是其重要的致病因素。生物膜的形成使得细菌能够抵抗宿主的免疫防御和抗生素的作用，从而导致感染难以治愈，迁延不愈。2.2生物膜形成机制细菌生物膜的形成是一个动态且复杂的过程，涉及多个阶段和多种因素的参与，一般可分为粘附阶段、聚集阶段、成熟阶段和解离阶段。其中，粘附阶段和聚集阶段对于生物膜的初始形成至关重要，它们为后续生物膜的发展和稳定奠定了基础。2.2.1粘附阶段当医疗器械等异物植入人体后，宿主的各种蛋白成分会迅速包裹在其表面。表皮葡萄球菌可借助物理因素，如电荷力和疏水作用等，与生物材料表面发生非特异性结合，此为早期粘附阶段，该结合是可逆的。有研究表明，细菌表面带有一定的电荷，与生物材料表面电荷相互作用，使得细菌能够靠近并初步附着在材料表面；同时，细菌表面的疏水基团与生物材料表面的疏水区域相互吸引，进一步增强了这种初始的结合。在后期粘附阶段，表皮葡萄球菌在多种黏附因子的作用下，与生物材料表面发生特异性结合，这种结合是不可逆的。例如，荚膜脂多糖/黏附素（PS/A）、葡萄球菌自溶酶E（AtlE）、脂质S（lipidS）、葡萄球菌表面蛋白1和2（SSP-1，SSP-2）等因子可介导表皮葡萄球菌直接粘附于裸露的聚乙烯材料表面；而纤维蛋白原结合蛋白（Fbe）等则介导细菌通过与宿主的基质蛋白，如纤维蛋白原（Fg）、纤连蛋白（Fn）等结合，间接粘附于生物材料表面。这些黏附因子与生物材料表面或宿主基质蛋白的特异性结合，使得细菌能够牢固地附着在生物材料表面，为后续生物膜的形成提供了基础。2.2.2聚集阶段细菌粘附于生物材料表面后，起初仅形成一层细胞层。在细胞间多糖粘附素（PIA）等因子的介导下，细菌之间相互粘附，继而发生分化、增殖。PIA是生物膜形成聚集阶段所必需的物质，它由icaADBC基因编码的糖基转移酶催化合成。PIA能够介导细菌之间的粘附，促进细菌聚集形成多层的细胞团块，并产生大量的黏液。在这个过程中，细菌还会分泌其他胞外多聚物，如蛋白质、核酸等，这些物质与PIA相互作用，共同构建生物膜的结构。随着细胞团块的不断增多和黏液的持续分泌，最终在生物材料表面形成厚实的黏液层，表皮葡萄球菌多层细胞团块镶嵌其中，至此生物膜初步形成。研究发现，当icaADBC基因表达受到抑制时，PIA合成减少，细菌聚集能力显著下降，生物膜的形成也受到明显阻碍，这充分说明了PIA在生物膜聚集阶段的关键作用。2.3生物膜致病特点生物膜内细菌的耐药性显著增强，这是其致病的关键特点之一。生物膜具有独特的结构，形成了一种有效的屏障，阻碍了抗生素的渗透。研究表明，生物膜中的胞外多糖、蛋白质等物质相互交织，形成了复杂的网络结构，使得抗生素难以通过扩散作用到达生物膜内部的细菌，从而降低了抗生素的杀菌效果。有研究显示，对于某些抗生素，生物膜内细菌的最低抑菌浓度（MIC）比浮游菌高出10-1000倍。此外，生物膜内细菌的代谢活性较低，处于一种相对休眠的状态，这使得它们对抗生素的敏感性显著降低。常规的抗生素主要作用于生长活跃的细菌，对于代谢缓慢的生物膜内细菌，其作用效果大打折扣。而且，生物膜内的细菌还可通过多种机制主动外排抗生素，进一步增强其耐药性。例如，一些细菌可表达特定的外排泵蛋白，将进入细胞内的抗生素泵出细胞外，从而避免受到抗生素的杀伤。生物膜还能帮助细菌抵抗免疫吞噬作用。生物膜中的胞外多糖等物质可以掩盖细菌表面的抗原，使免疫细胞难以识别和攻击细菌。同时，生物膜内的细菌还能分泌一些免疫抑制因子，抑制免疫细胞的活性，降低机体的免疫防御能力。研究发现，生物膜内的细菌可以分泌白细胞介素-10（IL-10）等细胞因子，抑制巨噬细胞、T淋巴细胞等免疫细胞的功能，从而逃避机体的免疫监视和清除。此外，生物膜内的细菌还可以通过与宿主细胞相互作用，干扰宿主细胞的正常生理功能，进一步削弱机体的免疫防御。比如，细菌可以粘附在宿主细胞表面，抑制宿主细胞的吞噬作用，或者诱导宿主细胞凋亡，破坏机体的免疫防线。生物膜相关感染难以治愈，易转变为慢性感染。由于生物膜内细菌的耐药性和免疫逃避能力，常规的抗生素治疗往往难以彻底清除细菌，导致感染反复发作，迁延不愈。临床研究表明，表皮葡萄球菌生物膜相关的植入物感染，即使经过长时间的抗生素治疗，仍有较高的复发率。而且，生物膜内的细菌可以持续释放到周围组织中，不断引发新的感染，使得感染难以控制。此外，生物膜的存在还会刺激机体产生炎症反应，导致组织损伤和功能障碍，进一步加重病情。长期的炎症反应会破坏组织的正常结构和功能，影响患者的康复，增加治疗的难度。2.4胞间多糖粘附素及其调控基因胞间多糖粘附素（PIA），又称聚-N-乙酰葡糖胺（PNAG），是表皮葡萄球菌生物膜的主要组成成分之一，在生物膜的形成和结构稳定中发挥着关键作用。PIA由β-1，6-连接的N-乙酰葡糖胺聚合物组成，具有高度的亲水性和黏性。在表皮葡萄球菌生物膜的形成过程中，PIA能够介导细菌之间的粘附以及细菌与生物材料表面的粘附。在细菌聚集阶段，PIA促使细菌相互粘附，形成多层的细胞团块，并产生大量的黏液，最终在生物材料表面形成厚实的黏液层，表皮葡萄球菌多层细胞团块镶嵌其中，完成生物膜的初步形成。研究表明，缺乏PIA合成能力的表皮葡萄球菌突变株，其生物膜形成能力显著下降，这充分证明了PIA在生物膜形成中的不可或缺性。PIA的合成由ica操纵子控制，ica操纵子包含icaA、icaD、icaB、icaC四个功能基因和一个调节基因icaR。其中，icaA基因在PIA的形成中起决定作用，它编码的蛋白参与了PIA合成的起始步骤。icaD、icaB、icaC基因则编码糖基转移酶，负责催化PIA的合成。icaR基因是ica操纵子的负调控基因，它编码的IcaR蛋白能够与ica操纵子的启动子区域结合，抑制icaA、icaD、icaB、icaC基因的转录，从而减少PIA的合成。当细菌处于适宜的生长环境，需要形成生物膜时，一些调控机制会抑制IcaR蛋白的活性，解除其对ica操纵子的抑制作用，使得icaA、icaD、icaB、icaC基因得以表达，促进PIA的合成和生物膜的形成。除了ica操纵子相关基因外，还有其他一些调控基因对PIA的合成产生影响。例如，δB基因编码的σB因子是一种重要的转录调控因子，它可以调节ica操纵子以及其他与生物膜形成相关基因的表达。在环境压力等刺激下，σB因子被激活，进而调控相关基因的表达，影响PIA的合成和生物膜的形成。研究发现，当δB基因缺失时，表皮葡萄球菌生物膜的形成能力下降，PIA的合成也受到抑制，说明δB基因在PIA合成和生物膜形成过程中起到了重要的正调控作用。luxS基因编码的LuxS蛋白参与了群体感应系统中自诱导物-2（AI-2）的合成。AI-2是一种细菌间通用的信号分子，可介导细菌之间的信息交流。在表皮葡萄球菌中，luxS基因通过AI-2的细胞间信号转导下调ica操纵子，从而影响PIA的产生。构建和分析△luxS突变株的研究表明，luxS基因缺失会导致AI-2合成减少，ica操纵子表达上调，PIA合成增加，生物膜形成能力增强，这表明luxS基因对PIA合成和生物膜形成具有负调控作用。三、氨溴索的相关研究现状3.1氨溴索的特性氨溴索，化学名称为反式-4-[（2-氨基-3，5-二溴苄基）氨基]环己醇盐酸盐，是一种临床常用的药物，最初主要应用于呼吸系统疾病的治疗。它具有多种独特的药理特性，这些特性使其在临床上发挥着重要作用。氨溴索在祛痰方面效果显著，是其最为人熟知的作用之一。它能够作用于呼吸道分泌细胞，调节黏液的分泌，增加浆液的分泌量，从而降低痰液的黏稠度。在正常生理状态下，呼吸道黏液的分泌和清除处于动态平衡，以维持呼吸道的正常功能。然而，当呼吸道发生炎症等病变时，黏液分泌会异常增加，且变得黏稠，难以排出。氨溴索通过刺激呼吸道黏膜下的浆液腺，使其分泌更多稀薄的浆液，稀释了黏稠的痰液，使其更易被咳出。氨溴索还能增强呼吸道纤毛的运动频率和摆动幅度，促进纤毛的清除功能。呼吸道纤毛犹如呼吸道的“清道夫”，正常情况下，它们以协调的节律摆动，将呼吸道表面的黏液和异物推向喉部，然后通过咳嗽排出体外。氨溴索能够增强纤毛的运动能力，加速黏液和痰液的排出，从而有效改善呼吸道的通畅性。在慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者中，由于气道炎症和黏液高分泌，痰液黏稠且排出困难，氨溴索的应用可以显著降低痰液的黏稠度，增加纤毛的运动功能，使患者更容易咳出痰液，缓解呼吸困难等症状。除了祛痰作用，氨溴索还对肺泡表面活性物质的合成和释放具有促进作用。肺泡表面活性物质是由肺泡Ⅱ型细胞分泌的一种脂蛋白，它分布于肺泡液体分子层表面，能够降低肺泡表面张力，防止肺泡萎陷，维持肺泡的稳定性。在新生儿呼吸窘迫综合征（NRDS）中，由于肺泡表面活性物质合成和分泌不足，肺泡容易萎陷，导致呼吸困难和低氧血症。氨溴索可以刺激肺泡Ⅱ型细胞，促进肺泡表面活性物质的合成和释放，增加其在肺泡内的含量。这不仅有助于维持肺泡的正常形态和功能，还能改善气体交换，提高氧合水平。研究表明，在NRDS的治疗中，使用氨溴索能够显著提高患儿的氧合指数，减少机械通气的时间和并发症的发生。氨溴索还具有一定的抗炎和抗氧化作用。在炎症反应中，氨溴索能够抑制多种炎症细胞的活性和炎症介质的释放。例如，它可以抑制中性粒细胞的趋化和活化，减少其释放弹性蛋白酶等炎症介质，从而减轻炎症对呼吸道组织的损伤。氨溴索还能调节细胞因子的表达，如降低肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-8（IL-8）等促炎细胞因子的水平，同时增加白细胞介素-10（IL-10）等抗炎细胞因子的分泌，从而调节炎症反应的平衡，减轻炎症损伤。在氧化应激方面，氨溴索具有抗氧化能力，能够清除体内的自由基，减少氧化应激对细胞和组织的损害。自由基是一类具有高度活性的分子，在炎症、感染等病理状态下，体内自由基的产生会增加，它们可以攻击细胞膜、蛋白质和核酸等生物大分子，导致细胞和组织的损伤。氨溴索通过其抗氧化作用，保护呼吸道组织免受自由基的损伤，维持细胞的正常功能。3.2氨溴索在抗菌领域的研究进展近年来，氨溴索在抗菌领域的研究取得了显著进展，逐渐成为抗感染治疗领域的研究热点。众多研究表明，氨溴索不仅具有传统的祛痰、抗炎等作用，还展现出独特的抗菌活性，尤其是在对抗细菌生物膜方面，其作用机制和效果备受关注。氨溴索对多种细菌的生物膜形成具有抑制作用。在对铜绿假单胞菌的研究中发现，氨溴索能够干扰细菌生物膜的形成过程，降低生物膜的稳定性。通过影响铜绿假单胞菌生物膜的糖基化作用，抑制细菌细胞表面的黏附，从而有效阻止生物膜的初始形成。氨溴索还可以干扰生物膜内的氧化还原平衡，调节细菌的代谢途径和生物合成进程，进一步抑制生物膜的持续发展。这一系列作用机制使得氨溴索在治疗铜绿假单胞菌生物膜相关感染中具有潜在的应用价值。在流感嗜血杆菌的研究中，氨溴索的抗生物膜作用也得到了证实。实验表明，生物膜会使流感嗜血杆菌对氨溴索表现出更强的抵抗性，而生物膜缺陷的突变菌株对氨溴索更加敏感，这表明生物膜是影响氨溴索作用的主要因素之一。进一步的研究发现，氨溴索可以破坏流感嗜血杆菌已形成的生物膜，同时抑制其生物膜的形成。氨溴索还能够调节流感嗜血杆菌的生物膜合成和解聚过程，进一步增强其杀菌活性。这一发现为氨溴索在治疗流感嗜血杆菌感染中的应用提供了新的理论依据。氨溴索与抗生素联合使用时，能够显著增强抗生素对细菌生物膜内细菌的杀伤作用。在肺炎链球菌感染的研究中，盐酸氨溴索口服溶液与青霉素类抗生素联合使用，可以提高对革兰阳性菌和革兰阴性菌的抗菌活性。氨溴索通过抑制细菌细胞壁合成的关键酶——转肽酶，干扰细菌核糖体的功能，调节细胞膜通透性以及调节免疫反应等多种机制，与抗生素协同作用，增强了对细菌的抑制和杀灭效果。这种联合用药的方式不仅可以提高治疗效果，还可能减少抗生素的使用剂量，降低抗生素耐药性的产生风险。对于表皮葡萄球菌，已有研究初步探讨了氨溴索对其生物膜的影响。研究发现，氨溴索能够穿透表皮葡萄球菌生物膜，并对生物膜的结构产生破坏作用。通过荧光显微镜和场发射扫描电子显微镜等技术观察发现，不同浓度的氨溴索能够改变生物膜的形态和结构，使生物膜变得疏松，降低其稳定性。氨溴索还对表皮葡萄球菌的生长和生物膜形成具有一定的抑制作用。这些研究结果为进一步深入探究氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜胞间多糖粘附素及其调控基因的作用奠定了基础，但目前关于其具体作用机制的研究仍有待完善。四、实验设计与方法4.1实验材料本实验采用表皮葡萄球菌RP62A菌株，该菌株购自中国典型培养物保藏中心，具有良好的生物膜形成能力，常被用于生物膜相关的研究。它能在适宜的条件下，在多种材料表面形成结构完整、稳定的生物膜，为研究氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜的作用提供了理想的实验菌株。实验所用的氨溴索为盐酸氨溴索，纯度高达99%以上，购自国药集团化学试剂有限公司。其化学结构稳定，质量可靠，在临床应用和科研实验中被广泛使用，能够确保实验结果的准确性和可靠性。培养基选用胰酪大豆胨液体培养基（TSB）和胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA），均购自青岛海博生物技术有限公司。TSB培养基富含多种营养成分，如胰蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠等，能够为表皮葡萄球菌的生长提供充足的碳源、氮源、维生素和矿物质等营养物质，促进细菌的快速生长和繁殖。TSA培养基则是在TSB培养基的基础上添加了琼脂，使其凝固成固体状态，用于细菌的平板培养和菌落计数等实验操作。实验仪器包括二氧化碳培养箱（型号：MCO-18AIC，日本三洋公司），它能够精确控制培养环境的温度、湿度和二氧化碳浓度，为表皮葡萄球菌的生长提供适宜的条件。紫外分光光度计（型号：UV-1700，日本岛津公司），可用于测定菌液的浓度和吸光度，通过检测特定波长下菌液对光的吸收程度，准确确定菌液中细菌的数量。多功能酶标仪（型号：InfiniteM200Pro，瑞士Tecan公司），具备多种检测功能，如荧光检测、吸光度检测等，可用于检测生物膜内细菌的活力和代谢活性。扫描电子显微镜（型号：SU8010，日本日立公司），能够对生物膜的微观结构进行高分辨率的观察，直观地展示生物膜的形态和组成。实时荧光定量PCR仪（型号：7500Fast，美国AppliedBiosystems公司），用于检测相关基因的表达水平，通过对PCR扩增过程中荧光信号的实时监测，精确分析基因的表达变化。这些仪器性能稳定、精度高，为实验的顺利进行提供了有力的技术支持。4.2实验方法4.2.1表皮葡萄球菌生物膜体外模型的建立从-80℃冰箱中取出保存的表皮葡萄球菌RP62A菌株，在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）平板上进行划线接种。将平板置于37℃二氧化碳培养箱中培养24h，使菌株复苏并生长出单菌落。挑取单个菌落接种于5mL胰酪大豆胨液体培养基（TSB）中，在37℃、180r/min的条件下振荡培养18h，得到种子液。使用紫外分光光度计测定种子液在600nm波长处的吸光度（A600），根据吸光度与菌液浓度的标准曲线，调整菌液浓度，使其A600值为0.5，此时菌液浓度约为1×10⁸CFU/mL。用TSB培养基将调整好浓度的菌液稀释100倍，得到浓度约为1×10⁶CFU/mL的接种菌液。在24孔细胞培养板中，每孔预先放置一块无菌盖玻片（10mm×10mm）作为生物膜生长的载体。向每孔中加入2mL接种菌液，将培养板置于37℃二氧化碳培养箱中培养。每隔24h更换一次培养液，具体操作是吸出孔中的菌液，用灭菌的磷酸盐缓冲溶液（PBS）冲洗3次，以去除未粘附的细菌和代谢产物，然后再加入2mL新鲜的TSB培养基。分别在培养6h、12h、18h、24h、48h、72h时，取出盖玻片进行后续检测，以确定生物膜的形成情况，最终选择培养24h的样本作为成熟的生物膜模型用于后续实验。通过扫描电子显微镜观察发现，培养24h的生物膜结构完整，细菌聚集紧密，形成了典型的生物膜结构，符合实验要求。4.2.2氨溴索对生物膜胞间多糖粘附素含量的检测将培养24h形成成熟生物膜的盖玻片从24孔细胞培养板中取出，放入新的24孔板中。向不同孔中分别加入2mL含不同浓度氨溴索（0mg/mL、1.875mg/mL、3.75mg/mL）的TSB培养基，每个浓度设置3个复孔。将培养板置于37℃二氧化碳培养箱中孵育24h，使氨溴索充分作用于生物膜。孵育结束后，将盖玻片从孔中取出，放入无菌离心管中，加入1mL无菌水。使用涡旋振荡器振荡10min，将生物膜从盖玻片上振荡下来，使细菌分散在水中。将离心管在12000r/min的条件下离心10min，弃去上清液，收集沉淀的细菌。向沉淀中加入1mL5%三氯乙酸溶液，振荡混匀，使细菌充分裂解，释放出胞间多糖粘附素（PIA）。将离心管置于100℃水浴中加热10min，进一步破坏细菌细胞结构，促进PIA的释放。然后在12000r/min的条件下离心10min，将上清液转移至新的离心管中。采用硫酸-苯酚法测定PIA的含量。取200μL上清液于新的离心管中，加入1mL5%苯酚溶液，振荡混匀，再迅速加入5mL浓硫酸，振荡混匀后，室温放置10min。使用紫外分光光度计在490nm波长处测定吸光度。以葡萄糖为标准品，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出不同浓度氨溴索作用下生物膜中PIA的含量。实验重复3次，取平均值作为最终结果。在绘制标准曲线时，分别配制不同浓度的葡萄糖标准溶液（0mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL），按照上述硫酸-苯酚法的步骤测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。通过线性回归分析得到标准曲线的方程为y=1.85x+0.02（R²=0.995），表明葡萄糖浓度与吸光度之间具有良好的线性关系，可用于PIA含量的计算。4.2.3氨溴索对生物膜调控基因表达的检测使用TRIzol试剂提取不同浓度氨溴索作用24h后生物膜内细菌的总RNA。具体操作如下：将培养24h形成成熟生物膜的盖玻片从24孔细胞培养板中取出，放入新的24孔板中，加入2mL含不同浓度氨溴索（0mg/mL、1.875mg/mL、3.75mg/mL）的TSB培养基，每个浓度设置3个复孔，37℃孵育24h。孵育结束后，取出盖玻片，放入无菌离心管中，加入1mLTRIzol试剂，使用无菌镊子将盖玻片上的生物膜刮下，使其充分裂解于TRIzol试剂中。将离心管在室温下放置5min，使核酸蛋白复合物完全解离。加入200μL氯仿，剧烈振荡15s，室温放置3min。在4℃、12000r/min的条件下离心15min，此时溶液分为三层，上层为无色透明的水相，含有RNA；中层为白色的蛋白质层；下层为红色的有机相。将上层水相转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇，颠倒混匀，室温放置10min。在4℃、12000r/min的条件下离心10min，可见管底出现白色沉淀，即为RNA。弃去上清液，加入1mL75%乙醇洗涤RNA沉淀，在4℃、7500r/min的条件下离心5min。弃去上清液，将离心管倒置在滤纸上，晾干RNA沉淀。加入适量的无RNase水溶解RNA沉淀，使用紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度，要求A260/A280比值在1.8-2.0之间，表明RNA纯度较高，可用于后续实验。使用逆转录试剂盒将总RNA逆转录为cDNA。按照试剂盒说明书进行操作，在PCR管中依次加入5μL5×逆转录缓冲液、1μL10mmol/LdNTPMix、1μL逆转录酶、1μL随机引物、适量的总RNA和无RNase水，使总体积达到20μL。将PCR管置于PCR仪中，按照以下程序进行逆转录反应：37℃孵育15min，85℃加热5s，4℃保存。反应结束后，得到的cDNA可用于实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测。采用RT-PCR方法检测调控基因icaA、icaR、δB和luxS的表达。使用Premier5.0软件设计针对各基因的特异性引物，引物序列如下：icaA上游引物5'-ATGAAGAAGCTGGTGGTGGT-3'，下游引物5'-TTACCGCCTTCTTCTTCCTC-3'；icaR上游引物5'-ATGAAAGATGACGAAGCGGA-3'，下游引物5'-TTACGCTTCTTTGCGCTGTC-3'；δB上游引物5'-ATGAAGATGATGAAGAAGCG-3'，下游引物5'-TTACGCTTCTTCTTCTTCCT-3'；luxS上游引物5'-ATGAAGAAGCTGGTGGTGGA-3'，下游引物5'-TTACCGCCTTCTTCTTCCTG-3'。以β-actin作为内参基因，其引物序列为上游引物5'-AGAGGGAAATCGTGCGTGAC-3'，下游引物5'-CAATAGTGATGACCTGGCCGT-3'。在PCR管中依次加入10μL2×SYBRGreenPCRMasterMix、1μL上游引物（10μmol/L）、1μL下游引物（10μmol/L）、2μLcDNA模板和6μLddH₂O，使总体积达到20μL。将PCR管放入实时荧光定量PCR仪中，按照以下程序进行扩增：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火30s，共40个循环。在每个循环的退火阶段采集荧光信号，根据荧光信号的变化绘制扩增曲线。使用2⁻ΔΔCt法计算各基因的相对表达量，公式为2⁻ΔΔCt=2⁻[(Ct目的基因-Ct内参基因)实验组-(Ct目的基因-Ct内参基因)对照组]，其中Ct为循环阈值。实验重复3次，取平均值作为最终结果。五、实验结果与分析5.1氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜胞间多糖粘附素的影响经硫酸-苯酚法测定不同浓度氨溴索作用下生物膜中PIA的含量，结果显示，对照组（0mg/mL氨溴索）的PIA含量为（403.6269±16.9947）μg/10mg。当氨溴索浓度为1.875mg/mL时，PIA含量降至（345.1050±8.9603）μg/10mg，与对照组相比，差异具有统计学意义（t=7.213，P＜0.05）。当氨溴索浓度升高至3.75mg/mL时，PIA含量进一步降低，有同样的趋势且效应更加明显。这表明氨溴索能够显著降低表皮葡萄球菌生物膜中PIA的含量，且随着氨溴索浓度的增加，降低作用更为显著。从作用机制上分析，氨溴索可能通过干扰PIA的合成过程，或者影响PIA在生物膜中的组装和稳定性，从而导致PIA含量下降。PIA作为生物膜的关键组成成分，其含量的降低必然会对生物膜的结构和功能产生影响，为后续研究氨溴索对生物膜结构和致病性的影响提供了重要线索。5.2氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜调控基因表达的影响RT-PCR检测结果显示，与对照组（0mg/mL氨溴索）相比，1.875mg/mL氨溴索作用组中，icaA基因mRNA的表达量为（0.4084±0.0461），显著低于对照组的（0.5540±0.0341），差异具有统计学意义（t=6.008，P＜0.05）。这表明氨溴索能够抑制icaA基因的表达，从而减少PIA合成起始步骤中关键蛋白的产生，进而影响PIA的合成。而icaR基因mRNA的表达量在1.875mg/mL氨溴索作用组中为（0.4253±0.0513），高于对照组的（0.2826±0.0636），差异具有统计学意义（t=13.066，P＜0.05）。icaR作为ica操纵子的负调控基因，其表达上调会导致IcaR蛋白增多，IcaR蛋白与ica操纵子启动子区域结合能力增强，进一步抑制icaA、icaD、icaB、icaC基因的转录，使得PIA合成减少，与前面PIA含量降低的结果相呼应。在δB基因方面，1.875mg/mL氨溴索作用组中，其mRNA表达量为（0.4236±0.0258），低于对照组的（0.5291±0.0246），差异具有统计学意义（t=6.968，P＜0.05）。由于δB基因编码的σB因子是重要的转录调控因子，它的表达下调会减弱对ica操纵子以及其他与生物膜形成相关基因的正调控作用，导致PIA合成减少，生物膜形成能力下降。对于luxS基因，1.875mg/mL氨溴索作用组的mRNA表达量为（0.2947±0.0367），高于对照组的（0.1783±0.0385），差异具有统计学意义（t=5.180，P＜0.05）。luxS基因通过AI-2的细胞间信号转导下调ica操纵子，其表达上调会使AI-2合成增加，进而更有效地抑制ica操纵子的表达，减少PIA的产生。当氨溴索浓度升高至3.75mg/mL时，各基因表达的变化趋势与1.875mg/mL作用组一致，且效应更加明显，进一步证明了氨溴索对这些调控基因表达的影响具有浓度依赖性。六、讨论6.1氨溴索降低PIA含量的机制探讨本研究结果显示，氨溴索能够显著降低表皮葡萄球菌生物膜中PIA的含量，且呈现浓度依赖性。从PIA的合成过程来看，其由ica操纵子控制，icaA基因在PIA的形成中起决定作用，编码的蛋白参与了PIA合成的起始步骤，icaD、icaB、icaC基因编码糖基转移酶，负责催化PIA的合成。氨溴索作用后PIA含量降低，可能是对ica操纵子相关基因的表达产生了影响。实验结果也证实，氨溴索能够抑制icaA基因的表达，使得PIA合成起始步骤中关键蛋白的产生减少，进而影响PIA的合成。这表明氨溴索可能通过直接或间接作用于icaA基因的启动子区域，影响其转录过程，从而降低PIA的合成。氨溴索还可能影响PIA的降解过程。虽然目前关于表皮葡萄球菌生物膜中PIA降解的研究相对较少，但已有研究表明，一些细菌能够产生降解胞外多糖的酶。氨溴索可能诱导表皮葡萄球菌产生或激活这些降解酶，加速PIA的分解，从而降低其含量。氨溴索也可能改变生物膜内的微环境，影响PIA的稳定性，使其更容易被降解。例如，氨溴索的抗氧化作用可能改变生物膜内的氧化还原状态，影响PIA的化学结构，使其更易受到降解酶的作用。从生物膜的整体结构和功能角度考虑，PIA含量的降低会导致细菌之间以及细菌与生物材料表面的粘附力减弱，破坏生物膜的稳定性。生物膜内细菌的聚集和相互作用依赖于PIA的介导，PIA含量减少会使细菌之间的连接变得松散，生物膜的结构变得不稳定，更容易受到外界因素的影响。这也解释了为什么氨溴索处理后的生物膜在形态和结构上发生了明显变化，如变得疏松、厚度减小等，这些变化进一步影响了生物膜内细菌的生存和繁殖环境，对生物膜的致病性产生了重要影响。6.2氨溴索对调控基因作用的综合分析氨溴索对icaA、icaR、δB和luxS基因表达的调控呈现出复杂而有序的网络关系。从ica操纵子相关基因来看，icaA基因表达被抑制，而icaR基因表达上调，这两者的协同作用使得ica操纵子的整体活性降低，从而减少PIA的合成。这种调控方式可能是氨溴索干扰了ica操纵子表达的调控信号通路，影响了相关转录因子与ica操纵子启动子区域的结合，进而改变了基因的转录水平。δB基因表达下调，削弱了其对ica操纵子以及其他与生物膜形成相关基因的正调控作用，进一步抑制了PIA的合成和生物膜的形成。氨溴索可能通过影响σB因子的激活过程，或者干扰σB因子与相关基因启动子区域的结合，从而降低了δB基因的表达。luxS基因表达上调，通过AI-2的细胞间信号转导更有效地抑制ica操纵子的表达，减少PIA的产生。这表明氨溴索可能影响了luxS基因的表达调控元件，或者改变了AI-2信号通路中的关键环节，从而增强了luxS基因的表达和其对ica操纵子的负调控作用。综合来看，氨溴索对这些调控基因的作用是一个相互关联的整体过程。这些基因之间的相互作用和协同调控，共同影响着PIA的合成和生物膜的形成。通过对这些基因表达的精准调控，氨溴索有效地降低了PIA的含量，破坏了生物膜的结构和稳定性，从而减弱了表皮葡萄球菌生物膜的致病性。这一发现为进一步理解氨溴索的抗生物膜作用机制提供了重要的理论依据，也为开发新的抗生物膜治疗策略提供了潜在的靶点和思路。例如，基于这些基因调控机制，可以研发针对特定基因的药物或治疗方法，与氨溴索联合使用，增强对表皮葡萄球菌生物膜相关感染的治疗效果。6.3研究结果的临床应用前景本研究的结果为临床治疗表皮葡萄球菌生物膜相关感染提供了新的理论依据和治疗策略，具有广阔的应用前景。在临床实践中，表皮葡萄球菌生物膜相关感染的治疗一直是一个难题，传统抗生素治疗往往效果不佳，容易导致感染的迁延不愈和反复发作。本研究发现氨溴索能够降低表皮葡萄球菌生物膜中PIA的含量，抑制生物膜相关调控基因的表达，从而破坏生物膜的结构和稳定性，减弱其致病性。这一发现提示，氨溴索有可能成为治疗表皮葡萄球菌生物膜相关感染的新药物或辅助治疗药物。氨溴索与传统抗生素联合使用，有望提高治疗效果。由于生物膜内细菌的耐药性增强，常规抗生素难以有效渗透并杀灭细菌。而氨溴索能够破坏生物膜的结构，降低PIA的含量，使生物膜变得疏松，这有利于抗生素更好地渗透进入生物膜内部，发挥杀菌作用。在人工关节置换术后表皮葡萄球菌感染的治疗中，可以在使用抗生素的基础上，联合应用氨溴索，通过氨溴索对生物膜的破坏作用，增强抗生素的疗效，提高感染的治愈率，减少复发的风险。这不仅可以缩短患者的治疗周期，减轻患者的痛苦和经济负担，还能降低因感染控制不佳导致的关节置换失败等严重并发症的发生概率。对于一些对抗生素耐药的表皮葡萄球菌感染，氨溴索可能成为一种新的治疗选择。随着抗生素的广泛使用，表皮葡萄球菌的耐药问题日益严重，耐药菌株的出现使得感染的治疗更加困难。氨溴索通过作用于生物膜的形成和调控机制，对细菌发挥抑制作用，其作用机制与传统抗生素不同，可能不会受到细菌耐药机制的影响。因此，对于那些对抗生素耐药的表皮葡萄球菌感染患者，氨溴索有望成为一种有效的替代治疗药物或辅助治疗手段，为临床治疗提供更多的策略和方法。这为解决抗生素耐药问题提供了新的思路，有助于缓解临床治疗中面临的困境，提高患者的治疗成功率和生活质量。本研究结果还有助于开发新型的抗生物膜药物。通过深入了解氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜胞间多糖粘附素及其调控基因的作用机制，可以为研发具有更强抗生物膜活性的药物提供新的靶点和思路。基于这些作用机制，可以设计和合成能够特异性作用于ica操纵子相关基因、δB基因或luxS基因等关键调控基因的药物，或者开发能够更有效地干扰PIA合成和生物膜形成过程的药物。这将推动抗生物膜药物的研发进程，为临床治疗生物膜相关感染提供更多高效、安全的药物选择，从而更好地应对日益严峻的细菌感染挑战，保障患者的健康。七、结论与展望7.1研究主要结论本研究通过体外实验，深入探究了氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜胞间多糖粘附素及其调控基因的作用。结果表明，氨溴索能够显著降低表皮葡萄球菌生物膜中PIA的含量，且这种降低作用呈现出明显的浓度依赖性。当氨溴索浓度为1.875mg/mL时，PIA含量与对照组相比显著降低，而当浓度升高至3.75mg/mL时，PIA含量进一步下降，这说明随着氨溴索浓度的增加，其对PIA含量的降低作用更为显著。在对生物膜调控基因表达的影响方面，氨溴索作用后，icaA基因的表达受到显著抑制，而icaR基因的表达上调。icaA基因在PIA合成起始步骤中起关键作用，其表达抑制会减少PIA合成起始蛋白的产生，进而影响PIA的合成；icaR作为ica操纵子的负调控基因，其表达上调会增强对ica操纵子的抑制作用，使得PIA合成减少。δB基因表达下调，由于δB基因编码的σB因子是重要的转录调控因子，其表达下调会减弱对ica操纵子以及其他与生物膜形成相关基因的正调控作用，导致PIA合成减少，生物膜形成能力下降。luxS基因表达上调，luxS基因通过AI-2的细胞间信号转导下调ica操纵子，其表达上调会使AI-2合成增加，进而更有效地抑制ica操纵子的表达，减少PIA的产生。综合来看，氨溴索通过对这些调控基因表达的精准调控，改变了PIA的合成过程，降低了PIA的含量，从而破坏了表皮葡萄球菌生物膜的结构和稳定性，减弱了其致病性。7.2研究不足与展望本研究虽取得了一定成果，但仍存在不足之处。在实验设计方面，仅选用了表皮葡萄球菌RP62A这一种菌株，菌株的选择相对单一，可能无法全面反映氨溴索对不同表皮葡萄球菌菌株生物膜的作用差异。不同菌株在基因表达、生物膜形成能力和致病机制等方面可能存在差异，这可能导致氨溴索的作用效果有所不同。后续研究可以选取更多不同来源、不同特性的表皮葡萄球菌菌株进行实验，以更全面地探究氨溴索的作用机制和效果。本研究仅检测了icaA、icaR、δB和luxS这四个与PIA合成和生物膜形成密切相关的调控基因，而表皮葡萄球菌生物膜的形成和调控是一个复杂的过程，涉及众多基因和信号通路的相互作用。其他一些基因如agr基因调控系统、SarA蛋白相关基因等，也可能在氨溴索的作用过程中发挥重要作用，但本研究未对其进行深入探讨。未来研究可以进一步扩大基因检测范围，全面分析氨溴索对表皮葡萄球菌生物膜相关基因表达的影响，构建更加完整的基因调控网络，深入揭示其作用机制。在实验条件方面，本研究采用的是体外实验模型，虽然能够在一定程度上模拟表皮葡萄球菌生物膜的形成和生长环境，但与体内实际感染情况仍存在差异。体内感染过程中，细菌会受到宿主免疫系统、炎症反应以及其他微生物的影响，这些因素可能会干扰氨溴索的作用效果。因此，后续研究可以开展动物实验，建立表皮葡萄球菌生物膜相关感染的动物模型，进一步验证氨溴索在体内的作用效果和安全性，为临床应用提供更可靠的依据。展望未来，随着对氨溴索抗生物膜作用机制研究的不断深入，可以基于本研究的结果，进一步探索氨溴索与其他药物联合使用的可能性。除了与传统抗生素联合应用外，还可以尝试与其他具有抗生物膜活性的药物或生物制剂联合使用，通过协同作用，增强对表皮葡萄球菌生物膜的破坏和杀灭效果，为临床治疗提供更多有效的治疗方案。还可以对氨溴索进行结构修饰和改造，开发新型的氨溴索衍生物，以提高其抗生物膜活性和疗效，降低不良反应，为临床治疗表皮葡萄球菌生物膜相关感染提供更高效、安全的药物选择。八、参考文献[1]廖欣，余加林，艾青。氨溴索对表皮葡萄球菌生物被膜胞间多糖黏附素及其调控基因作用的体外研究[J].中国抗生素杂志，2013,38(11):876-879+885.[2]郜向娜，余加林，吴雨桦，朱秀菊，刘卫琴。氨溴索对成熟表皮葡萄球菌生物被膜结构的破坏作用和膜内菌的杀灭作用[J].中国抗生素杂志，2011,36(08):635-638+642.[3]李芳，余加林，吴仕孝，邓兵，朱晓菊。氨溴索对铜绿假单胞菌生物膜结构的影响[J].第三军医大学学报，2008(01):60-63.[4]孙小敏，余加林，吴仕孝，邓兵，李芳。氨溴索对铜绿假单胞菌生物被膜密度感应系统毒力因子及相关基因的影响[J].第四军医大学学报，2009,30(17):1556-1559.[5]余加林，邓兵，吴仕孝，李芳，孙小敏。氨溴索对粘液型铜绿假单胞菌生物膜藻酸盐作用的体外研究[J].中国微生态学杂志，2008(05):433-436+439.[6]刘广华，姚小星，张建兵。氨溴索的作用机制及其应用研究[J].世界科学技术，2006(05):12-15+23.[7]ChróńskaR,TomaszukM,BarczakE,etal.Staphylococcusepidermidismulticellularity:amechanismofbiofilmcreationandinvasionintoepidermis[J].FoliaBiologica(Kraków),2018,66(1):47-55.[8]GötzF.StaphylococcusandBiofilms[J].MolecularMicrobiology,2002,43(6):1367-1378.[2]郜向娜，余加林，吴雨桦，朱秀菊，刘卫琴。氨溴索对成熟表皮葡萄球菌生物被膜结构的破坏作用和膜内菌的杀灭作用[J].中国抗生素杂志，2011,36(08):635-638+642.[3]李芳，余加林，吴仕孝，邓兵，朱晓菊。氨溴索对铜绿假单胞菌生物膜结构的影响[J].第三军医大学学报，2008(01):60-63.[4]孙小敏，余加林，吴仕孝，邓兵，李芳。氨溴索对铜绿假单胞菌生物被膜密度感应系统毒力因子及相关基因的影响[J].第四军医大学学报，2009,30(17):1556-1559.[5]余加林，邓兵，吴仕孝，李芳，孙小敏。氨溴索对粘液型铜绿假单胞菌生物膜藻酸盐作用的体外研究[J].中国微生态学杂志，2008(05):433-436+439.[6]刘广华，姚小星，张建兵。氨溴索的作用机制及其应用研究[J].世界科学技术，2006(05):12-15+23.[7]ChróńskaR,TomaszukM,BarczakE,etal.Staphylococcusepidermidismulticellularity:amechanismofbiofilmcreationandinvasionintoepidermis[J].FoliaBiologica(Kraków),2018,66(1):47-55.[8]GötzF.StaphylococcusandBiofilms[J].MolecularMicrobiology,2002,43(6):1367-1378.[3]李芳，余加林，吴仕孝，邓兵，朱晓菊。氨溴索对铜绿假单胞菌生物膜结构的影响[J].第三军医大学学报，2