（正式版）DB43∕T 1367-2017 《十字花科蔬菜病毒病综合防控技术规程》

ICSICS65.020B16DB43/T1367—2017RegulationforIntegratedPrevenCruciferaeVegetableVirusDiseases2017-12-31发布2018-03-31实施湖南省质量技术监督局发布I Ⅱ 2规范性引用文件 本标准按照GB/T1.1—2009给出请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准起草单位：湖南省植物保护研究所、山东省农业科学院植物十字花科蔬菜病毒病综合防控技术规程本标准适用于大白菜、小白菜、萝卜、结球甘蓝等十字花科蔬菜病毒病的综合约型、环境友好型技术来控制农作物病虫害的植对特定病原物有特殊反应或表现特定症状的植物称为鉴别萝卜感病后，叶片可呈现花叶、皱缩、泡状、扭曲、蕨叶，重病株畸形、矮化重时叶片皱缩卷曲或畸形，花叶状皱缩，整株矮缩，老叶片上出现绿色斑驳。成株发病后，嫩叶表现浓淡不均斑驳，老叶背面有黑的使用角度开展综合防控，实现蔬菜生产安全、蔬菜生态环境安全和尽量不与十字花科作物邻作，与早、中甘蓝地保持一在田间调查十字花科病毒病发生情况时，具4附录A(资料性附录)十字花科蔬菜作物病毒病症状大白菜病毒病在大白菜生长的幼苗期和成株期均可染病，但不同时期受侵染后，发病程度有所差异，侵染越早，发病越重。大白菜受病毒病侵染后会表现各种症状，幼苗期受害后，会出现沿叶脉褪绿，花叶及皱缩，有的有坏死斑，至成株期还可表现孤丁、抽疯、不能包心、结球，叶片扭曲畸形、质脆、植株矮化(图A1)。图A1大白菜病毒病为害症状萝卜感病后，多呈现各种症状(图A2),叶片出现叶色不均匀，深绿和浅绿相间，花叶，浓绿部分常突起呈疱状，皱缩，有时畸形，有的显现为淡绿色至黄绿色花叶，有的叶片扭曲、蕨叶，外围的老叶变黄，叶面皱缩变形，重病株矮化。图A2萝卜病毒病为害症状小白菜染病后，从心叶发病，沿叶脉两侧产生褪绿，叶片呈黄绿相间的花叶，明脉或叶脉呈半透明状，严重时叶片皱缩卷曲或畸形，花叶状皱缩，整株矮缩，老叶片上出现坏死斑(图A3)。图A3小白菜病毒病为害症状5附录B(规范性附录)1.病毒摩擦接种方法将少许感染病毒的病叶，放于研钵，加入适量接种缓冲液，充分研磨。用喷粉器将金刚砂(200~400目)撒到待接种叶的表面(也可直接将金刚砂加在研磨液中),在营养钵内插上标签，注明处理及将植株放于温室(最好22～25℃)。用缓冲液接种植株作对照。将带毒叶片用接种缓冲液研磨后，采用2.病毒的保存与测定燥处理后，写明标签，存于-80℃冰箱。将经分离纯化后得到的不同病毒的病液，加100μLNLS,70℃温育10min,不时上下颠倒混匀，冰上放置5min,13000r/min离心10min;μ,μ,μ,μ,7引物引物酶(4)反应程序反应程序94℃预变性4min,94℃,45s;56℃,45s;72℃,30s,35个循环；72℃延伸7min。94℃预变性4min,94℃,45s;57℃,45s;72℃,1min,35个循环；72℃延伸7min。94℃预变性4min,94℃,45s;55℃,45s;72℃,1min,35个循环；72℃延伸7min。1%琼脂糖凝胶电泳检测，取5μL扩增反应物与2μLSYBRGreenI染料、3μLloadingbuffer混匀，点入样孔内。电泳缓冲液1×TAE适量，100V,4.目的片段的克隆与分析8图B4十字花科蔬菜作物携带CMN的检测图B5十字花科蔬菜作物携带TMN的检测5.病毒分子生物学检测所用试剂如下：4.0M异硫氰酸胍将1g月桂酰醇(NLS)溶于10mL水中即得10%NLS溶液。将60g二氧化硅溶于500mL水中，静置24h,倒掉470mL上清，