肿瘤类器官构建规范共识2026

肿瘤类器官构建规范共识Contents目录共识制定背景共识制定方法样本处理规范培养与质控流程共识制定背景传统二维细胞系缺乏肿瘤三维结构及微环境，无法模拟体内异质性；PDX模型则存在构建周期长、成本高及物种特异性进化等问题，难以真实反映患者肿瘤特征，限制了精准治疗方案的开发。**小主题一：传统癌症研究模型的局限性**类器官由患者干细胞体外分化形成，能保留原肿瘤的组织结构、遗传特征与功能，为模拟肿瘤病理生理提供了新途径；其已纳入国家科研计划，在机制研究、药物筛选及个体化治疗中展现出重要价值。**小主题二：类器官技术的优势与应用潜力**目前国内类器官构建缺乏统一规范，导致模型质量参差不齐，影响研究可靠性与数据共享；制定全流程技术规范（如样本处理、培养质控）对提升模型可重复性、推动临床转化具有重要意义。**小主题三：类器官标准化建设的紧迫性**癌症治疗挑战传统二维细胞系模型的局限性患者来源异种移植模型的缺陷传统模型在个体化治疗中的不足传统二维细胞系缺乏体内生长的三维空间结构和肿瘤微环境，无法模拟细胞间相互作用及组织架构。其培养条件高度均质化，导致肿瘤细胞丢失原有的遗传异质性与功能表型，难以真实反映患者肿瘤的复杂生物学特征。PDX模型构建周期长、成本高且成瘤率有限，限制了其广泛应用。移植过程中肿瘤可能经历物种特异性进化，改变原有分子特征，且模型无法保留人体免疫微环境，因而在模拟患者真实疾病进程及个体化治疗预测方面存在明显不足。传统模型在重现肿瘤异质性、微环境及动态演变方面存在固有局限，导致其临床转化价值受限。这些模型难以高效模拟患者特异性药物反应，无法满足精准医疗对高度可靠、可重复且生理相关性强的临床前模型的需求。传统模型局限010203类器官由患者干细胞体外分化形成，能长期保留原发肿瘤的组织结构、遗传特性和功能表型，克服了传统二维细胞系缺乏三维空间和肿瘤微环境的局限，为个体化治疗研究提供了高度可靠的模型。相比患者来源异种移植模型，类器官构建周期短、成本较低，且避免了物种特异性进化偏差，能更真实反映患者肿瘤的病理生理状态，显著提升临床前研究的效率和临床转化潜力。类器官技术已被列入中国“十四五”重点研发计划，通过制定构建、鉴定与质控的全流程规范，可解决当前实验室操作差异大、模型质量参差不齐的问题，促进多中心数据共享与研究成果的可靠转化。更精准地模拟肿瘤生物学特征有效弥补传统模型的重大缺陷推动肿瘤研究与治疗的标准化应用类器官技术优势共识制定方法010203本共识由上海市抗癌协会类器官专业委员会、中国医师协会临床精准医疗专业委员会等七家全国性学术组织共同发起，确保了共识的专业基础与行业代表性。共识编制汇聚了73位专家，涵盖肿瘤学、病理学、细胞生物学等多学科领域，来自全国40余家单位，保障了内容的科学性与实践指导价值。共识严格依据文献检索、证据分级与专家审议的循证流程制定，最终形成19条推荐意见，旨在推动肿瘤类器官技术的规范化与标准化。共识由多家权威学术机构联合发起多学科专家团队共同参与编制共识制定遵循严谨的循证流程多机构联合发起循证医学方法本共识严格遵循循证医学方法制定，流程包括文献检索、证据评估与多轮专家论证，最终形成19条推荐意见，确保内容的科学性与可靠性。共识制定遵循严格循证流程共识由肿瘤学、病理学、生物样本库等多领域73位专家共同编制，涵盖全国40余家单位，通过会议与函审结合方式整合专业意见。采用多学科专家协作机制共识证据等级与推荐级别依据GRADE分级框架修订，分为A、B、C三级证据与1、2两级推荐，以提升建议的规范性与适用性。证据分级参照国际标准体系本共识通过专家会议与多轮函审相结合的方式形成。初稿由执笔组起草后，经线上线下专家会议研讨并广泛征求意见，最终由全体专家投票通过，确保内容的科学性与共识性。共识参照GRADE分级体系，将证据分为A、B、C三级，推荐级别分为1级和2级。每条推荐意见均标注证据等级与推荐强度，提升建议的可靠性与适用性。共识最终形成19条推荐意见，覆盖合规伦理、样本采集处理、培养传代、质量控制等全流程，为肿瘤类器官构建提供标准化技术框架与操作规范。共识制定采用多轮专家投票与审议机制共识意见基于证据分级与推荐级别系统共识涵盖类器官构建全流程关键环节专家投票形成样本处理规范010203严格遵守法律法规与伦理审查要求建立知情同意与样本使用规范加强个人信息保护与数据安全管理开展肿瘤类器官研究必须遵守《中华人民共和国生物安全法》《人类遗传资源管理条例》等法规，确保研究合法合规。同时需严格履行伦理审查程序，依据《涉及人的生物医学研究伦理审查办法》获得批准，保障受试者权益与安全。研究前须取得受试者知情同意，并建立规范的同意制度。样本采集、运输和使用需遵循标准化流程，确保人类遗传资源的合法、合规使用，并完整记录相关操作与审批文件。依据《中华人民共和国个人信息保护法》，对患者临床信息与样本数据采取匿名化或去识别化处理。仅保留研究必要数据，并实现安全存储与传输，严防信息泄露与滥用风险。伦理合规要求010203样本质量是构建肿瘤类器官的关键，受采集运输过程影响。冷缺血时间指组织离体至处理的时间间隔，延长会降低细胞活性。为保障成功率，样本离体后应立即置于预冷保存液中，并在2~8℃环境下快速转运，以最大限度维持细胞活力。样本送达实验室后需立即登记，赋予唯一可追溯编号，并详细记录样本类型、采集时间、运输条件及冷缺血时间等关键信息。对于超过推荐时限的样本，应标记为高风险样本，并记录所采取的特别处理措施，以确保后续培养的可控性与可靠性。手术切除组织应选取无坏死区域，体积不小于5mm³，并于24小时内处理；活检或穿刺样本则需在12小时内完成处理。对于体液或循环肿瘤细胞等低细胞量样本，应尽快进行富集与去杂质步骤，以提高培养的成功率与稳定性。确保样本质量与缩短冷缺血时间规范样本接收与信息记录流程根据样本类型采取差异化的采集与处理策略样本采集运输010302共识强调样本质量是构建成功的关键，需规范采集流程。实体组织应选取无坏死区域，离体后立即置于预冷保存液中低温运输。手术标本建议在24小时内处理，活检标本需在12小时内完成，以最大限度保持细胞活性，确保后续培养成功率。样本送达实验室后需立即登记，赋予唯一追溯编号，并记录样本类型、采集时间、运输条件等关键信息。超出推荐时限的样本标记为高风险，需评估细胞活性后再决定是否继续培养，确保流程可追溯、结果可靠。预处理包括机械剪切和酶解消化。组织需剪切成1mm³小块，再根据肿瘤类型使用胶原酶、透明质酸酶等组合消化。消化后经滤网获得细胞悬液，要求活细胞率≥70%才可直接接种，否则需优化处理或视为高风险样本。样本采集与运输的标准化要求样本接收与信息管理的规范化流程样本预处理与细胞悬液制备的关键步骤样本预处理标准培养与质控流程组织送达后需立即进行机械剪切与酶解消化，以获取高活性细胞悬液。关键步骤包括将组织剪切成小于1毫米的碎块，并使用胶原酶、分散酶等混合酶液进行优化消化。消化后需通过细胞筛网过滤，并评估细胞活力，要求存活率不低于70%才可直接接种培养。类器官培养主要采用基质胶滴法或悬浮培养法。基质胶滴法需将细胞悬液与基质胶按比例混合后接种成胶滴；悬浮法则需在含低浓度基质胶的培养基中振荡培养。接种密度需优化，例如24孔板推荐每孔接种5万至10万个细胞，以确保类器官有效形成与生长。培养基应以AdvancedDMEM/F12为基础，添加核心组分如N2、B27及生长因子EGF、Noggin、R-spondin1等，并可针对不同癌种微调。培养环境需保持温度37℃、二氧化碳浓度5%，并在接种后72小时内完成首次换液，之后每2至3天更换一半培养基，以维持营养供应与代谢平衡。样本预处理与细胞悬液制备三维培养体系构建培养基配方与培养环境控制原代培养条件010203传代时机与判断标准传代操作流程与关键控制点传代后培养与记录要求传代操作应在类器官生长过密时进行，主要判断标准包括培养孔内类器官数量密集、体积增大（如直径超过300µm）以及部分类器官中心因营养不足出现凋亡性暗区。通常当囊性类器官直径达200–300µm或实心致密类器官布满培养孔时，即达到适宜传代节点。传代时需先用冰冷PBS缓慢吹洗使基质胶部分解离，收集类器官后以TrypLE等消化液在37℃下消化数分钟。消化须严格控制时间（一般不超过15分钟），至大团块解离为直径<50µm的小细胞簇即终止。消化后细胞存活率应≥80%，否则需优化消化条件。消化后的细胞经低速离心、计数后，按1∶2至1∶5的比例重新混入基质胶进行下一代培养。每次传代须准确记录日期、传代比例、代次等信息，并录入信息管理系统，确保全过程可追溯，同时维持培养环境的稳定（37℃、5%CO₂）。传代操作规范所有样本送达实验室后须立即录入信息管理系统，并赋予唯一可追溯编号。至少需记录样本类型、采集时间、运输条件及冷缺血时间等关键信息，确保样本全流程可追踪与管理。类器官培养过程中需详细记录接种密度、