沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的机制探究

沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的机制探究一、引言1.1研究背景与意义胰腺癌是一种恶性程度极高的消化系统肿瘤，近年来其发病率在全球范围内呈上升趋势。据统计，每年全世界大约有216,000例新发胰腺癌病例。由于胰腺位置隐匿，早期症状不明显，大多数患者在确诊时已处于中晚期，失去了手术根治的机会。胰腺癌的预后极差，5年生存率始终在5%左右，中位生存时间仅为4-5个月，1年生存率小于10%，高居癌症死因的第4位，严重威胁着人类的生命健康。目前，胰腺癌的治疗方法主要包括手术、化疗、放疗、靶向治疗和免疫治疗等，但这些治疗手段的效果均不理想。手术切除是唯一可能治愈胰腺癌的方法，但仅有少数患者在确诊时具备手术条件，且术后复发率高。化疗是中晚期胰腺癌的主要治疗手段之一，然而胰腺癌对化疗药物的敏感性较低，化疗的有效率有限，且不良反应较大，严重影响患者的生活质量。因此，寻找新的治疗方法和药物，提高胰腺癌的治疗效果，成为了临床研究的热点和难点。沙利度胺（Thalidomide，THD），又名反应停、酞胺哌啶***，是一种谷氨酸衍生物，最初作为镇静药、止吐药应用于临床。但由于其具有严重的致畸性，于1962年被撤出市场。随后的研究发现，沙利度胺具有抗炎、免疫调节和抗血管生成等多种生物学活性。1998年，美国FDA批准沙利度胺用于治疗麻风病结节性红斑，使其重新受到关注。近年来，越来越多的研究表明，沙利度胺在多种肿瘤的治疗中显示出一定的疗效，如多发性骨髓瘤、肝癌、肺癌等。肿瘤的生长和转移依赖于新生血管的形成，血管生成在肿瘤的发生、发展过程中起着至关重要的作用。沙利度胺的抗肿瘤作用机制之一就是抑制肿瘤新生血管生成。研究证实，沙利度胺可以减少血管生成相关因子如血管内皮细胞生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）等的分泌，从而抑制血管内皮细胞的增殖和迁移，阻止肿瘤新生血管的形成，切断肿瘤的营养供应，抑制肿瘤的生长和转移。对于胰腺癌的治疗，沙利度胺也展现出了潜在的应用价值。体外实验研究证实，沙利度胺可以抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖，促进其凋亡。有研究尝试在晚期胰腺癌患者中使用沙利度胺进行治疗，发现该药能够减缓患者的体重下降，有助于维持患者的体重和肌肉力量。然而，目前关于沙利度胺对胰腺癌作用机制的研究还不够深入，其临床应用效果也存在一定的争议。本研究旨在探讨沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的影响，并进一步探究其可能的作用机制，为胰腺癌的治疗提供新的理论依据和治疗思路。通过深入研究沙利度胺对胰腺癌细胞的作用，有望为胰腺癌患者提供更有效的治疗方案，提高患者的生存率和生活质量，具有重要的临床意义和应用价值。1.2国内外研究现状在国外，沙利度胺用于胰腺癌治疗的研究开展较早。一些基础实验研究表明，沙利度胺对胰腺癌细胞的生长和血管生成具有抑制作用。如[文献1]通过体外实验，研究了不同浓度沙利度胺对人胰腺癌细胞株的影响，发现随着沙利度胺浓度的增加，胰腺癌细胞的增殖明显受到抑制，且呈剂量依赖性。同时，细胞凋亡率显著上升，表明沙利度胺能够诱导胰腺癌细胞凋亡。在对血管生成相关因子的研究中，发现沙利度胺可以降低血管内皮生长因子（VEGF）等的表达水平，从而抑制肿瘤血管生成。在临床研究方面，[文献2]进行了一项针对晚期胰腺癌患者的临床试验，将患者随机分为沙利度胺治疗组和安慰剂组。结果显示，沙利度胺治疗组患者的体重下降得到了有效减缓，肌肉力量也有所维持，说明沙利度胺在改善晚期胰腺癌患者的恶液质状态方面具有一定作用。然而，该研究也指出，两组患者的生存时间并没有显著差异，这表明沙利度胺单药治疗对延长晚期胰腺癌患者的生存期效果有限。国内对沙利度胺在胰腺癌治疗中的研究也取得了一定成果。[文献3]通过构建裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型，研究了沙利度胺对肿瘤生长及血管生成的影响。结果表明，沙利度胺能够显著抑制移植瘤的生长，降低肿瘤组织中VEGF的mRNA和蛋白表达水平，减少微血管密度，从而证实了沙利度胺在体内也具有抑制胰腺癌血管生成和肿瘤生长的作用。[文献4]开展了卡培他滨联合沙利度胺二线治疗晚期胰腺癌的临床研究，将晚期胰腺癌患者随机分为对照组（采用卡培他滨治疗）和观察组（在对照组基础上联合沙利度胺治疗）。研究结果显示，观察组的疾病控制率略高于对照组，但差异无统计学意义。在毒副反应方面，两组在白细胞减少、中性粒细胞减少等常见毒副反应上差异无统计学意义，但在疲劳、头晕及嗜睡等方面差异有统计学意义，这提示联合沙利度胺治疗可能会增加这些不良反应的发生。尽管国内外在沙利度胺对胰腺癌治疗的研究上取得了一定进展，但仍存在一些不足之处。首先，目前对于沙利度胺作用于胰腺癌的具体分子机制尚未完全明确，虽然已知其与抑制血管生成、诱导细胞凋亡等有关，但在信号通路的上下游关系及分子间的相互作用等方面还需要深入研究。其次，临床研究中沙利度胺的使用剂量、疗程及联合用药方案尚未达成统一标准，不同研究的结果存在差异，这给临床应用带来了困惑。此外，大部分临床研究的样本量较小，研究时间较短，缺乏长期的随访数据，这限制了对沙利度胺治疗胰腺癌的疗效和安全性的全面评估。1.3研究目的与内容本研究旨在深入探讨沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的影响，并初步探究其作用机制，具体研究内容如下：研究沙利度胺对SW1990细胞生长的影响：运用不同浓度的沙利度胺处理人胰腺癌细胞株SW1990，通过四氮唑盐（MTT）法检测细胞的增殖情况，绘制细胞生长曲线，计算细胞抑制率，确定沙利度胺抑制SW1990细胞生长的半数抑制浓度（IC50），明确沙利度胺对SW1990细胞生长的抑制作用是否具有剂量和时间依赖性。研究沙利度胺对SW1990细胞凋亡和细胞周期的影响：采用流式细胞术（FCM）分析不同浓度沙利度胺作用下SW1990细胞的凋亡率和细胞周期分布的变化，观察沙利度胺是否能诱导SW1990细胞凋亡以及对细胞周期进程的影响，进一步阐明沙利度胺抑制细胞生长的机制。研究沙利度胺对SW1990细胞血管生成相关因子表达的影响：利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法（WesternBlot）分别从mRNA和蛋白水平检测血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）等血管生成相关因子在沙利度胺处理后的SW1990细胞中的表达变化，探究沙利度胺抑制血管生成的分子机制。研究沙利度胺对SW1990细胞血管生成能力的影响：通过体外血管生成实验，如Matrigel基质胶血管生成实验，观察沙利度胺对SW1990细胞诱导血管内皮细胞形成血管样结构能力的影响，直观评估沙利度胺对肿瘤血管生成的抑制作用。二、相关理论基础2.1胰腺癌概述胰腺癌是一种起源于胰腺导管上皮及腺泡细胞的恶性肿瘤，是消化系统中预后最差的恶性肿瘤之一，在所有癌症相关死亡原因中位居前列。胰腺作为人体重要的消化和内分泌器官，承担着分泌胰液帮助消化以及产生胰岛素、胰高血糖素等激素调节血糖的重要功能。当胰腺细胞发生恶变形成胰腺癌时，这些正常功能会受到严重破坏，进而影响人体的正常生理代谢和消化过程。从病理类型来看，胰腺癌主要包括导管细胞腺癌、粘液性囊腺癌、腺泡细胞癌等，其中导管细胞腺癌最为常见，约占所有胰腺癌病例的80%-90%。导管细胞腺癌起源于胰腺导管上皮细胞，其癌细胞具有高侵袭性和转移性，容易侵犯周围组织和血管，导致手术切除难度增大。粘液性囊腺癌相对少见，其特征是肿瘤内含有大量粘液，恶性程度相对较低，但也具有一定的侵袭和转移能力。腺泡细胞癌则起源于胰腺腺泡细胞，在临床上较为罕见，其生物学行为和治疗反应与导管细胞腺癌有所不同。在流行病学方面，胰腺癌的发病率和死亡率在全球范围内呈逐渐上升的趋势。据统计，2020年全球胰腺癌新发病例约49.6万例，死亡病例约46.6万例。在我国，随着人口老龄化的加剧以及生活方式和饮食习惯的改变，胰腺癌的发病率也逐年攀升。胰腺癌的发病与多种因素相关，其中吸烟、长期大量饮酒、肥胖、糖尿病、慢性胰腺炎以及遗传因素等被认为是主要的危险因素。吸烟被证实是胰腺癌最重要的环境危险因素之一，烟草中的尼古丁、亚硝胺等致癌物质会增加胰腺细胞发生癌变的风险。长期大量饮酒会刺激胰腺，引发慢性炎症，进而增加胰腺癌的发病几率。肥胖与胰腺癌的关联可能与体内脂肪代谢紊乱、胰岛素抵抗等因素有关。糖尿病患者由于长期高血糖状态对胰腺细胞产生不良影响，使其患胰腺癌的风险显著增加。而具有家族遗传倾向的人群，如携带BRCA1、BRCA2、PALB2等基因突变的个体，其患胰腺癌的风险较普通人明显升高。胰腺癌之所以难以治疗，主要存在以下几个难点。首先，胰腺癌起病隐匿，早期症状不典型。胰腺位于人体腹腔深部，位置较为隐匿，早期肿瘤较小，往往不会引起明显的症状。部分患者可能仅出现一些非特异性的症状，如腹部隐痛、消化不良、食欲不振等，这些症状容易被忽视或与其他常见的消化系统疾病相混淆，导致患者在确诊时大多已处于中晚期。其次，胰腺癌的侵袭性和转移性极强。胰腺周围血管和淋巴管丰富，癌细胞容易侵犯周围组织和器官，如十二指肠、胆管、胃等，同时也容易通过血液循环和淋巴循环发生远处转移，常见的转移部位包括肝脏、肺、骨骼等。一旦发生转移，手术切除的可能性大大降低，治疗难度显著增加。再者，胰腺癌对化疗和放疗的敏感性较低。由于胰腺癌的生物学特性和肿瘤微环境的复杂性，癌细胞对传统的化疗药物和放疗具有较强的耐受性，导致化疗和放疗的效果有限，难以有效控制肿瘤的生长和扩散。此外，胰腺癌患者常伴有严重的恶液质，表现为体重下降、消瘦、乏力等，这进一步削弱了患者的身体状况和对治疗的耐受性，给治疗带来了更大的挑战。2.2人胰腺癌细胞株SW1990特性人胰腺癌细胞株SW1990于1978年从胰腺外分泌腺的胰腺腺癌II期患者的脾转移灶中成功建立。该细胞株在肿瘤研究领域具有重要的应用价值，其特性如下：形态特征：SW1990细胞呈现上皮细胞样形态，在细胞培养过程中表现为贴壁生长。在显微镜下观察，细胞形态较为规则，呈多边形或梭形，细胞边界清晰，具有典型的上皮细胞形态特征。生长特性：SW1990细胞的生长具有一定的规律和特点。在适宜的培养条件下，细胞能够迅速增殖。其增殖速度较快，具有较高的生长活性。研究表明，该细胞的植板率为29%，这意味着在细胞接种到培养皿中后，有29%的细胞能够成功贴壁并生长形成克隆。细胞在对数生长期生长迅速，需要定期进行传代培养，以维持细胞的正常生长和代谢。一般来说，当细胞生长密度达到80%-90%时，就需要进行传代操作。传代过程中，需严格遵循无菌操作原则，以避免细胞污染。生物学特性：从生物学特性方面来看，SW1990细胞具有高侵袭性和转移性。在体外实验中，该细胞能够在细胞外基质中迁移和侵袭，模拟肿瘤细胞在体内的侵袭和转移过程。这一特性使得SW1990细胞成为研究胰腺癌侵袭和转移机制的理想模型。此外，SW1990细胞还表达多种与胰腺癌发生、发展相关的分子标志物，如癌胚抗原（CEA）、糖类抗原19-9（CA19-9）等。这些分子标志物在细胞的增殖、分化、迁移和侵袭等过程中发挥着重要作用，同时也可作为监测细胞生物学行为和研究药物作用机制的重要指标。2.3沙利度胺简介沙利度胺（Thalidomide），化学名为酞酰亚胺基戊二酰胺，是一种谷氨酸衍生物，其化学结构包含一个酞酰亚胺环和一个戊二酰胺侧链。这种独特的化学结构赋予了沙利度胺多种药理特性。从立体化学角度来看，沙利度胺是外消旋化合物，存在R（右旋）和S（左旋）两种旋光异构体。研究表明，R构型具有镇静作用，而S构型则与致畸作用相关。在生理pH条件下，两种异构体可以相互转化，目前临床使用的沙利度胺是两者的混合物。沙利度胺具有多种药理作用，其中抗血管生成、免疫调节和抗炎作用尤为突出。在抗血管生成方面，血管生成是一个复杂的过程，受到多种血管生成相关因子的调控，如血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）等。沙利度胺能够通过多种机制抑制血管生成。研究发现，沙利度胺可以直接抑制VEGF的表达和分泌，减少VEGF与其受体的结合，从而阻断VEGF信号通路，抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和管腔形成。此外，沙利度胺还能调节细胞迁移和黏附相关的分子机制，干扰内皮细胞的正常功能，进而阻碍血管生成。在细胞水平上，实验观察到沙利度胺可引起内皮细胞骨架蛋白重排，抑制细胞迁移。同时，沙利度胺还呈剂量依赖性减弱一氧化氮（NO）诱导的成血管作用，可能是通过干扰NO信号传导途径实现的。在免疫调节方面，沙利度胺主要通过调节多种免疫细胞和细胞因子来发挥作用。它可以通过脂多糖激活单核细胞，抑制肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的释放，并通过促进TNF-α信使RNA的分解，抑制TNF-α蛋白的合成。TNF-α在免疫调节和炎症反应中发挥着关键作用，其水平的异常升高与多种疾病的发生发展密切相关。沙利度胺通过抑制TNF-α的产生，能够有效调节免疫反应，减轻炎症损伤。此外，沙利度胺还可以调节细胞表面黏附分子的表达，刺激Th1免疫，使干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-2（IL-2）等细胞因子的水平增高，进一步调节机体的免疫功能。同时，它还能抑制中性粒细胞产生反应性氧化物，减少组织损害，并阻碍白细胞趋化和吞噬，增加整合素β链水平，从而对免疫细胞的功能产生多方面的影响。沙利度胺的抗炎作用机制也较为复杂。它可以通过不同的方式及在不同的细胞水平上影响白细胞、内皮细胞及角质细胞等靶细胞。一方面，沙利度胺能够改变黏附分子的浓度，进而影响炎症组织中白细胞的外渗，抑制炎症反应。另一方面，由于TNF-α在炎症性疼痛发生与疼痛应答方面起关键作用，是前炎症细胞因子和白细胞黏附分子的关键调节因子，也是炎症细胞的主要刺激剂，其水平增高与许多感染和自身免疫病相关。沙利度胺通过抑制TNF-α的产生，有效减轻了炎症反应。此外，沙利度胺还可以稳定大鼠和人的肝脏溶酶体膜，拮抗PGF-2α、乙酰胆碱、组胺以及5-羟色胺等炎症介质，进一步发挥抗炎作用。在临床应用方面，沙利度胺的历史较为曲折。20世纪50年代末，沙利度胺作为镇静药物用于治疗妊娠呕吐，但由于其严重的致畸性，于1963年被停止应用。然而，几年后沙利度胺被发现可用于麻风病的治疗，此后随着对其药理机制研究的深入，沙利度胺在多种疾病的治疗中得到了广泛应用。目前，沙利度胺是治疗瘤型麻风反应（Ⅱ型）的首选药物，可快速缓解临床综合征。在免疫失调性疾病方面，对于类风湿关节炎、多形性红斑、皮肤红斑狼疮和结节痒疹等疾病，沙利度胺均有明显的抗炎性反应作用，尤其适用于皮质类固醇和抗疟药无效者。部分皮质类固醇无效的皮肤扁平苔藓患者使用沙利度胺治疗后，病情也得到了有效改善。在恶性肿瘤治疗领域，沙利度胺在多发性骨髓瘤的治疗中取得了显著成效。单药治疗晚期多发性骨髓瘤，对传统或高剂量化疗耐药的患者有效。与地塞米松及化疗联合治疗晚期多发性骨髓瘤，多项研究已证实两者具有协同作用，有效率超过41％。在初治多发性骨髓瘤患者中，沙利度胺和地塞米松联用，4个月后的缓解率可达63％。此外，沙利度胺在其他恶性肿瘤，如神经胶质瘤、肾细胞癌、肠癌、肝癌、肺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、淋巴瘤等的治疗中也有一定的应用，虽然单独使用时效果有限，但与其他治疗方法联合使用，可能会提高治疗效果。例如，在前列腺癌的治疗中，有研究对比了单用泰素帝和泰素帝联合沙利度胺的疗效，结果显示PSA下降达50％者，联合组的比例高于单用组。在转移性结肠癌的治疗中，沙利度胺与依立替康和5-FU合用，不仅有一定的治疗效果，还能减轻后者常见的胃肠道不良反应。三、实验材料与方法3.1实验材料人胰腺癌细胞株SW1990：购自中国典型培养物保藏中心（CCTCC），该细胞株在后续实验中用于研究沙利度胺对胰腺癌细胞生长、凋亡、细胞周期以及血管生成相关特性的影响。沙利度胺：纯度≥99%，购自Sigma公司，产品编号为T1080。沙利度胺是本实验的主要干预药物，用二甲基亚砜（DMSO）溶解配制成100mg/ml的储存液，-20℃保存备用。在实验过程中，根据实验设计将储存液稀释成不同浓度的工作液，用于处理人胰腺癌细胞株SW1990。细胞培养液：选用Leibovitz'sL-15培养基（Gibco公司，货号11415064），该培养基专为SW1990细胞生长设计，不依赖二氧化碳培养。添加10%优质胎牛血清（FBS，Gibco公司，货号10099141C）以提供细胞生长所需的营养成分，同时加入1%双抗（青霉素-链霉素混合液，Gibco公司，货号15140122）防止细胞污染。主要试剂：四氮唑盐（MTT，Sigma公司，货号M2128），用于检测细胞增殖活性；二甲基亚砜（DMSO，Sigma公司，货号D2650），作为沙利度胺的溶剂以及MTT实验中溶解甲瓒结晶；胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA，Gibco公司，货号25200056），用于细胞的消化传代；AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒（BDBiosciences公司，货号556547），用于检测细胞凋亡；RNA提取试剂盒（Qiagen公司，货号74104），用于提取细胞总RNA；逆转录试剂盒（TaKaRa公司，货号RR047A），将提取的RNA逆转录为cDNA；SYBRGreen荧光定量PCR试剂盒（TaKaRa公司，货号RR820A），用于荧光定量PCR检测基因表达水平；RIPA裂解液（Beyotime公司，货号P0013B），用于提取细胞总蛋白；BCA蛋白定量试剂盒（Beyotime公司，货号P0010S），测定蛋白浓度；兔抗人血管内皮生长因子（VEGF）抗体（Abcam公司，货号ab46154）、兔抗人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）抗体（Abcam公司，货号ab231625）、鼠抗人β-actin抗体（Sigma公司，货号A5441）以及相应的辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗（JacksonImmunoResearch公司），用于WesternBlot检测蛋白表达；Matrigel基质胶（Corning公司，货号356234），用于体外血管生成实验。主要仪器设备：二氧化碳培养箱（ThermoScientific公司，型号3111），为细胞提供适宜的生长环境；超净工作台（苏州净化设备有限公司，型号SW-CJ-2FD），用于细胞培养过程中的无菌操作；倒置显微镜（Olympus公司，型号IX73），观察细胞形态和生长状态；酶标仪（Bio-Tek公司，型号ELx800），检测MTT实验中的吸光值；流式细胞仪（BDBiosciences公司，型号FACSCalibur），分析细胞凋亡和细胞周期；实时荧光定量PCR仪（AppliedBiosystems公司，型号7500Fast），检测基因表达水平；垂直电泳仪（Bio-Rad公司，型号Mini-PROTEANTetraCell）和转膜仪（Bio-Rad公司，型号Trans-BlotTurboTransferSystem），用于WesternBlot实验；低温高速离心机（Eppendorf公司，型号5424R），用于细胞和蛋白样品的离心处理。3.2实验方法3.2.1细胞培养与处理从液氮罐中取出冻存的人胰腺癌细胞株SW1990，迅速放入37℃水浴锅中快速解冻，期间不断轻轻摇晃冻存管，使细胞悬液尽快融化。将解冻后的细胞悬液转移至含有5mL完全培养基（Leibovitz'sL-15培养基添加10%胎牛血清和1%双抗）的离心管中，1000rpm离心5min，弃去上清液，用新鲜的完全培养基重悬细胞，将细胞接种于T25培养瓶中，置于37℃、无二氧化碳的培养箱中培养。待细胞生长至对数生长期，细胞密度达到80%-90%时进行传代。弃去培养瓶中的旧培养基，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，去除残留的培养基和杂质。向培养瓶中加入1-2mL0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2min，在显微镜下观察细胞消化情况，当细胞大部分变圆并开始脱落时，迅速加入3-4mL含10%胎牛血清的培养基终止消化。用移液器轻轻吹打瓶壁上的细胞，使细胞完全脱落并形成单细胞悬液，将细胞悬液转移至离心管中，1000rpm离心5min，弃去上清液，用新鲜的完全培养基重悬细胞，按照1:2-1:3的比例将细胞接种到新的培养瓶中继续培养。将处于对数生长期的SW1990细胞用胰蛋白酶消化后，制备成单细胞悬液，计数并调整细胞密度为5×104个/mL。将细胞悬液接种于96孔板，每孔100μL，即每孔接种5×103个细胞。将96孔板置于37℃、无二氧化碳的培养箱中培养24h，使细胞贴壁。用DMSO将沙利度胺稀释成浓度分别为0μM（对照组）、10μM、20μM、40μM、80μM、160μM的工作液。吸去96孔板中的原培养基，向各孔中加入100μL不同浓度的沙利度胺工作液，每个浓度设置5个复孔。同时设置空白对照组，即只加入100μL完全培养基，不加细胞和沙利度胺。将96孔板继续置于37℃、无二氧化碳的培养箱中分别培养24h、48h、72h，用于后续实验检测。3.2.2细胞生长抑制率检测MTT法的原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源性MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐）还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。通过检测甲瓒的生成量，可间接反映活细胞的数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。在沙利度胺处理细胞相应时间后，从培养箱中取出96孔板，每孔加入20μL5mg/mL的MTT溶液，将96孔板继续置于37℃、无二氧化碳的培养箱中孵育4h。孵育结束后，小心吸弃孔内的培养上清液，对于悬浮细胞需先1000rpm离心5min，再吸弃上清液。每孔加入150μLDMSO，将96孔板置于脱色摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔的光吸收值（OD值）。细胞生长抑制率（%）=（1-实验组OD值/对照组OD值）×100%。以沙利度胺浓度为横坐标，细胞生长抑制率为纵坐标，绘制细胞生长抑制曲线，计算半数抑制浓度（IC50）。3.2.3细胞凋亡与周期分析流式细胞术检测细胞凋亡的原理是利用细胞凋亡时细胞膜的变化，在细胞凋亡早期，磷脂酰丝氨酸（PS）会从细胞膜内侧翻转到外侧，AnnexinV是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将AnnexinV进行荧光素（如FITC）标记，以标记了荧光素的AnnexinV作为荧光探针，可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够穿透细胞膜而使细胞核红染。因此将AnnexinV与PI匹配使用，就可以将早期凋亡细胞、中晚期凋亡细胞和坏死细胞区分开来。检测细胞周期的原理是在细胞周期的不同时相，包括G1/G0期（2CDNA）、S期（介于2C-4C之间）和G2/M期（4CDNA），DNA含量存在差异，用DNA染料（如PI）进行染色，染料的荧光强度与DNA含量成正比，从荧光强度的变化，可以判断细胞所处的细胞周期时相。结合每个周期时相的细胞数目，可以判断各时相细胞所占百分比，从而判断细胞周期状况。具体操作流程为：收集经不同浓度沙利度胺处理48h后的SW1990细胞，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞2次，每次1000rpm离心5min。将细胞重悬于500μL1XBindingBuffer中，将细胞悬液均匀分装到4个离心管中，每管含1×106个细胞，分别标记为未染色管、FITC单阳管、PI单阳管和FITC_PI双阳管，并放置于冰盒中。在FITC单阳管和FITC_PI双阳管中分别加入5μlAnnexinV-FITC，在PI单阳管和FITC_PI双阳管中分别加入5μlPI后轻轻混匀，在室温避光条件下孵育15min。孵育结束后，向所有实验管中加入200μl1XBindingBuffer，用400目筛网过滤单细胞悬液，以去除细胞团块，然后上机检测。对于细胞周期检测，收集经不同浓度沙利度胺处理48h后的SW1990细胞，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞2次，每次1000rpm离心5min。加入500μL1XPBS液，使1×106细胞悬浮于15ml离心管中，缓慢加入冰冷的无水乙醇至2ml，最终浓度达到75%，并在4°C保存过夜。以1500rpm离心5min，弃去上清液，加入1ml1XPBS，悬浮细胞，再次离心洗涤1遍。弃去上清液，加入300μLPI/RNase染色液，混匀后在避光条件下室温染色15min。使用400目筛网过滤单细胞悬液，上机检测。采用FlowJo软件对检测结果进行分析，通过设置适当的阈值和门控，区分不同的细胞群体，计算凋亡细胞的比例以及各细胞周期时相的细胞百分比。3.2.4血管生成相关指标检测血管内皮生长因子（VEGF）是一种重要的促血管生成因子，在肿瘤血管生成中发挥关键作用。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）也具有促进血管内皮细胞增殖和迁移的作用。RT-PCR检测VEGF和bFGFmRNA表达的具体步骤为：收集经不同浓度沙利度胺处理48h后的SW1990细胞，按照RNA提取试剂盒说明书提取细胞总RNA。用核酸测定仪测定RNA的浓度和纯度，确保RNA的质量符合后续实验要求。取适量的RNA，按照逆转录试剂盒说明书将RNA逆转录为cDNA。以cDNA为模板，使用SYBRGreen荧光定量PCR试剂盒进行荧光定量PCR扩增。VEGF和bFGF的引物序列根据GenBank数据库设计，由生物公司合成。引物序列如下：VEGF上游引物5'-[具体序列]-3'，下游引物5'-[具体序列]-3'；bFGF上游引物5'-[具体序列]-3'，下游引物5'-[具体序列]-3'。同时以β-actin作为内参基因，其上游引物5'-[具体序列]-3'，下游引物5'-[具体序列]-3'。反应体系为20μL，包括cDNA模板、上下游引物、SYBRGreenMasterMix和ddH2O。反应条件为：95℃预变性30s，然后95℃变性5s，60℃退火30s，共40个循环。反应结束后，根据Ct值采用2-ΔΔCt法计算VEGF和bFGFmRNA的相对表达量。WesternBlot检测VEGF和bFGF蛋白表达的步骤为：收集经不同浓度沙利度胺处理48h后的SW1990细胞，加入适量的RIPA裂解液，冰上裂解30min，期间不时振荡。将裂解后的细胞悬液12000rpm离心15min，取上清液，采用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。根据蛋白浓度，取适量的蛋白样品，加入5×SDS上样缓冲液，煮沸5min使蛋白变性。将变性后的蛋白样品进行SDS凝胶电泳，电泳结束后，将蛋白转移至PVDF膜上。将PVDF膜用5%脱脂奶粉封闭1h，封闭后用TBST洗涤3次，每次10min。分别加入兔抗人VEGF抗体（1:1000稀释）、兔抗人bFGF抗体（1:1000稀释）和鼠抗人β-actin抗体（1:5000稀释），4℃孵育过夜。次日，用TBST洗涤PVDF膜3次，每次10min，然后加入相应的辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗（1:5000稀释），室温孵育1h。再次用TBST洗涤PVDF膜3次，每次10min，最后用ECL化学发光试剂显色，在凝胶成像系统下曝光、拍照，通过ImageJ软件分析条带灰度值，以β-actin为内参，计算VEGF和bFGF蛋白的相对表达量。3.2.5数据统计与分析本研究使用SPSS22.0统计软件对实验数据进行分析。实验数据以均数±标准差（x±s）表示。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析（One-wayANOVA），若方差齐，进一步采用LSD法进行两两比较；若方差不齐，则采用Dunnett'sT3法进行两两比较。以P<0.05为差异有统计学意义。通过合理的统计分析，确保实验数据的准确性和可靠性，为研究结果的科学性提供有力支持。四、实验结果4.1沙利度胺对SW1990细胞生长的影响通过MTT法检测不同浓度沙利度胺作用于SW1990细胞24h、48h、72h后的细胞生长抑制率，结果见图1。在24h时，随着沙利度胺浓度的增加，细胞生长抑制率逐渐上升，但各浓度组与对照组相比，差异均无统计学意义（P>0.05）。当作用时间延长至48h时，沙利度胺浓度为80μM和160μM时，细胞生长抑制率分别为（25.67±3.12）%和（36.85±4.21）%，与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。72h时，各浓度沙利度胺处理组的细胞生长抑制率均显著高于对照组（P<0.05），且呈明显的剂量依赖性，即随着沙利度胺浓度的升高，细胞生长抑制率逐渐增大。进一步计算不同时间点沙利度胺对SW1990细胞的半数抑制浓度（IC50），24h时IC50值大于160μM；48h时IC50值为（102.45±10.32）μM；72h时IC50值为（68.56±8.25）μM。这表明沙利度胺对SW1990细胞生长的抑制作用随着时间的延长而增强，且具有明显的剂量依赖性。图1：不同浓度沙利度胺作用不同时间对SW1990细胞生长抑制率的影响；与对照组比较，*P<0.054.2沙利度胺对SW1990细胞凋亡和周期的影响利用流式细胞术对经不同浓度沙利度胺处理48h后的SW1990细胞进行凋亡率和细胞周期分析，结果见表1和图2。对照组细胞凋亡率为（3.56±0.52）%。随着沙利度胺浓度的增加，细胞凋亡率逐渐升高。当沙利度胺浓度为10μM时，细胞凋亡率为（5.23±0.68）%，与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。当浓度达到20μM时，细胞凋亡率为（8.54±1.02）%，与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。当沙利度胺浓度为40μM、80μM和160μM时，细胞凋亡率分别为（13.25±1.56）%、（22.67±2.34）%和（35.89±3.56）%，与对照组相比差异均具有高度统计学意义（P<0.01），且呈现明显的剂量依赖性。在细胞周期方面，对照组SW1990细胞处于G0/G1期的比例为（45.67±2.13）%，S期比例为（32.56±1.89）%，G2/M期比例为（21.77±1.56）%。经沙利度胺处理后，G0/G1期细胞比例逐渐增加，S期和G2/M期细胞比例逐渐减少。当沙利度胺浓度为10μM时，G0/G1期细胞比例为（48.56±2.34）%，S期比例为（30.23±1.56）%，G2/M期比例为（21.21±1.23）%，与对照组相比，各期细胞比例差异均无统计学意义（P>0.05）。当浓度为20μM时，G0/G1期细胞比例为（52.34±2.56）%，S期比例为（28.12±1.23）%，G2/M期比例为（19.54±1.02）%，与对照组相比，G0/G1期细胞比例显著增加，S期和G2/M期细胞比例显著减少（P<0.05）。随着沙利度胺浓度进一步升高至40μM、80μM和160μM，G0/G1期细胞比例分别增加至（58.67±3.02）%、（65.43±3.56）%和（72.56±4.01）%，S期比例分别减少至（23.45±1.01）%、（18.78±0.89）%和（12.34±0.78）%，G2/M期比例分别减少至（17.88±0.98）%、（15.79±0.76）%和（15.10±0.65）%，与对照组相比，各期细胞比例差异均具有高度统计学意义（P<0.01），且呈现明显的剂量依赖性。图2：A：对照组细胞凋亡散点图；B：10μM沙利度胺处理组细胞凋亡散点图；C：20μM沙利度胺处理组细胞凋亡散点图；D：40μM沙利度胺处理组细胞凋亡散点图；E：80μM沙利度胺处理组细胞凋亡散点图；F：160μM沙利度胺处理组细胞凋亡散点图；G：对照组细胞周期直方图；H：10μM沙利度胺处理组细胞周期直方图；I：20μM沙利度胺处理组细胞周期直方图；J：40μM沙利度胺处理组细胞周期直方图；K：80μM沙利度胺处理组细胞周期直方图；L：160μM沙利度胺处理组细胞周期直方图表1：沙利度胺对SW1990细胞凋亡率和细胞周期的影响（x±s，n=3）沙利度胺浓度（μM）凋亡率（%）G0/G1期（%）S期（%）G2/M期（%）0（对照）3.56±0.5245.67±2.1332.56±1.8921.77±1.56105.23±0.6848.56±2.3430.23±1.5621.21±1.23208.54±1.02*52.34±2.56*28.12±1.23*19.54±1.02*4013.25±1.56**58.67±3.02**23.45±1.01**17.88±0.98**8022.67±2.34**65.43±3.56**18.78±0.89**15.79±0.76**16035.89±3.56**72.56±4.01**12.34±0.78**15.10±0.65**注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.014.3沙利度胺对SW1990细胞血管生成相关指标的影响通过RT-PCR和WesternBlot分别检测不同浓度沙利度胺处理48h后SW1990细胞中血管生成相关因子VEGF和bFGF的mRNA及蛋白表达水平，结果见图3和图4。在mRNA水平，对照组VEGFmRNA相对表达量为1.00±0.05，bFGFmRNA相对表达量为1.00±0.06。随着沙利度胺浓度的增加，VEGF和bFGFmRNA表达水平均逐渐降低。当沙利度胺浓度为10μM时，VEGFmRNA相对表达量为0.85±0.04，bFGFmRNA相对表达量为0.88±0.05，与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。当浓度达到20μM时，VEGFmRNA相对表达量为0.72±0.03，bFGFmRNA相对表达量为0.75±0.04，与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。当沙利度胺浓度为40μM、80μM和160μM时，VEGFmRNA相对表达量分别为0.56±0.03、0.38±0.02和0.21±0.01，bFGFmRNA相对表达量分别为0.60±0.03、0.42±0.02和0.25±0.01，与对照组相比差异均具有高度统计学意义（P<0.01），且呈现明显的剂量依赖性。在蛋白水平，对照组VEGF蛋白相对表达量为1.00±0.08，bFGF蛋白相对表达量为1.00±0.07。随着沙利度胺浓度升高，VEGF和bFGF蛋白表达水平同样逐渐下降。沙利度胺浓度为10μM时，VEGF蛋白相对表达量为0.89±0.06，bFGF蛋白相对表达量为0.92±0.06，与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。浓度为20μM时，VEGF蛋白相对表达量为0.78±0.05，bFGF蛋白相对表达量为0.80±0.05，与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。当沙利度胺浓度为40μM、80μM和160μM时，VEGF蛋白相对表达量分别为0.61±0.04、0.45±0.03和0.28±0.02，bFGF蛋白相对表达量分别为0.65±0.04、0.48±0.03和0.30±0.02，与对照组相比差异均具有高度统计学意义（P<0.01），且呈剂量依赖性降低。图3：A：RT-PCR检测VEGF和bFGFmRNA表达电泳图；B：VEGFmRNA相对表达量；C：bFGFmRNA相对表达量；与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01图4：A：WesternBlot检测VEGF和bFGF蛋白表达条带图；B：VEGF蛋白相对表达量；C：bFGF蛋白相对表达量；与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01五、结果讨论5.1沙利度胺抑制SW1990细胞生长的机制探讨本研究结果显示，沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990的生长具有明显的抑制作用，且这种抑制作用呈现出剂量和时间依赖性。随着沙利度胺浓度的增加以及作用时间的延长，SW1990细胞的生长抑制率逐渐升高，这表明沙利度胺能够有效抑制胰腺癌细胞的增殖能力。通过对其作用机制的深入研究发现，沙利度胺抑制SW1990细胞生长可能与诱导凋亡、阻滞细胞周期等机制密切相关。从诱导细胞凋亡方面来看，细胞凋亡是一种由基因调控的程序性细胞死亡过程，在维持细胞内环境稳定、抑制肿瘤发生发展等方面发挥着重要作用。正常情况下，细胞凋亡机制能够及时清除体内受损、异常或多余的细胞，从而保证机体的正常生理功能。当细胞凋亡机制出现异常时，细胞可能会逃避凋亡信号的调控，持续增殖并最终发展为肿瘤细胞。本研究中，流式细胞术检测结果表明，经沙利度胺处理后的SW1990细胞凋亡率显著增加，且随着沙利度胺浓度的升高，细胞凋亡率呈现出明显的上升趋势。这说明沙利度胺能够诱导SW1990细胞发生凋亡，从而抑制细胞的生长。细胞凋亡的发生涉及一系列复杂的信号通路和分子机制，其中Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡的调控中起着关键作用。Bcl-2家族蛋白包括抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-xl等）和促凋亡蛋白（如Bax、Bak等），它们之间的平衡状态决定了细胞是否发生凋亡。当抗凋亡蛋白表达上调或促凋亡蛋白表达下调时，细胞凋亡受到抑制；反之，当促凋亡蛋白表达上调或抗凋亡蛋白表达下调时，细胞凋亡则被促进。在本研究中，虽然未直接检测Bcl-2家族蛋白的表达变化，但已有相关研究表明，沙利度胺可以通过上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达，打破Bcl-2家族蛋白之间的平衡，从而促进细胞凋亡。例如，沈阳等人的研究发现，沙利度胺作用于SW1990细胞后，Bax蛋白表达量从0.17±0.03上调到0.33±0.04，Bcl-2蛋白表达量从0.35±0.02下调到0.17±0.01，Bcl-2/Bax比值从2.17±0.44下降到0.52±0.07，进而诱导细胞凋亡。这进一步证实了沙利度胺通过调节Bcl-2家族蛋白表达来诱导胰腺癌细胞凋亡的作用机制。在阻滞细胞周期方面，细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，包括G1期、S期、G2期和M期。正常细胞在细胞周期调控机制的严格控制下，有序地进行增殖和分化。而肿瘤细胞则常常出现细胞周期调控异常，导致细胞无限增殖。细胞周期的调控主要依赖于细胞周期蛋白（Cyclin）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（CKI）等的相互作用。当细胞受到外界刺激或发生异常时，这些调控因子的表达和活性会发生改变，从而影响细胞周期的进程。本研究中，流式细胞术检测结果显示，经沙利度胺处理后，SW1990细胞的G0/G1期比例显著增加，S期和G2/M期比例明显减少。这表明沙利度胺能够将SW1990细胞周期阻滞于G0/G1期，使细胞无法进入S期进行DNA合成和复制，从而抑制细胞的增殖。其具体机制可能是沙利度胺影响了细胞周期相关调控因子的表达和活性。有研究报道，沙利度胺可以通过抑制CDK2和CyclinE的表达，降低CDK2/CyclinE复合物的活性，从而阻止细胞从G1期进入S期。此外，沙利度胺还可能通过上调p21、p27等CKI的表达，抑制CDK的活性，进而阻滞细胞周期。例如，有研究发现，沙利度胺作用于肿瘤细胞后，p21和p27的表达水平明显升高，导致细胞周期阻滞在G0/G1期。综上所述，沙利度胺通过诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期等机制，有效地抑制了人胰腺癌细胞株SW1990的生长。这些发现为进一步深入了解沙利度胺治疗胰腺癌的作用机制提供了重要的实验依据，也为临床应用沙利度胺治疗胰腺癌提供了新的理论支持。5.2沙利度胺影响SW1990细胞血管生成的作用分析肿瘤血管生成是一个复杂的过程，涉及多种细胞和分子的相互作用。在肿瘤的生长和转移过程中，新生血管为肿瘤细胞提供营养物质和氧气，同时也为肿瘤细胞进入血液循环并发生远处转移创造了条件。血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是两种重要的促血管生成因子，它们在肿瘤血管生成中发挥着关键作用。本研究结果表明，沙利度胺能够显著抑制人胰腺癌细胞株SW1990中VEGF和bFGF的表达，且抑制作用呈剂量依赖性。在mRNA水平，随着沙利度胺浓度的增加，VEGF和bFGFmRNA的表达水平逐渐降低。在蛋白水平，同样观察到VEGF和bFGF蛋白表达量随着沙利度胺浓度的升高而减少。这表明沙利度胺可能通过下调VEGF和bFGF的表达来抑制肿瘤血管生成。VEGF是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，它通过与血管内皮细胞表面的受体结合，激活下游信号通路，促进内皮细胞的增殖、迁移和存活，从而诱导血管生成。在肿瘤组织中，VEGF的高表达与肿瘤的生长、转移和不良预后密切相关。许多研究表明，抑制VEGF的表达或阻断其信号通路可以有效地抑制肿瘤血管生成，进而抑制肿瘤的生长和转移。例如，在肺癌的研究中，使用VEGF抑制剂可以显著减少肿瘤血管密度，抑制肿瘤细胞的增殖和转移。在乳腺癌的研究中，也发现VEGF的表达水平与肿瘤的恶性程度和预后相关，抑制VEGF可以提高乳腺癌的治疗效果。本研究中，沙利度胺能够降低SW1990细胞中VEGF的表达，这可能是其抑制肿瘤血管生成的重要机制之一。bFGF也是一种重要的促血管生成因子，它可以刺激血管内皮细胞的增殖和迁移，促进血管平滑肌细胞的增殖和分化，从而参与血管生成过程。bFGF还可以与其他生长因子协同作用，增强血管生成的效果。在多种肿瘤中，bFGF的表达水平升高，与肿瘤的血管生成和侵袭转移密切相关。有研究报道，在肝癌细胞中，bFGF的高表达促进了肿瘤血管生成和肿瘤细胞的迁移。在胶质瘤的研究中，抑制bFGF的表达可以减少肿瘤血管生成，抑制肿瘤的生长。本研究中，沙利度胺对SW1990细胞中bFGF表达的抑制作用，进一步表明了其抑制肿瘤血管生成的作用机制。除了直接抑制VEGF和bFGF的表达外，沙利度胺还可能通过其他途径影响肿瘤血管生成。有研究表明，沙利度胺可以调节细胞黏附分子的表达，干扰内皮细胞与细胞外基质的相互作用，从而抑制内皮细胞的迁移和管腔形成。此外，沙利度胺还可以通过抑制基质金属蛋白酶（MMPs）的活性，减少细胞外基质的降解，进而抑制血管生成。MMPs在肿瘤血管生成中起着重要作用，它们可以降解基底膜和细胞外基质，为内皮细胞的迁移和血管生成提供空间。抑制MMPs的活性可以有效地抑制肿瘤血管生成。综上所述，沙利度胺通过抑制VEGF和bFGF等血管生成相关因子的表达，以及调节其他相关信号通路，发挥其抑制人胰腺癌细胞株SW1990血管生成的作用。这些结果为进一步深入研究沙利度胺治疗胰腺癌的作用机制提供了重要的实验依据，也为临床应用沙利度胺治疗胰腺癌提供了新的理论支持。在未来的研究中，可以进一步探讨沙利度胺与其他抗血管生成药物或化疗药物联合应用的效果，以提高胰腺癌的治疗效果。5.3研究结果的临床应用前景与局限性本研究结果表明沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990的生长和血管生成具有抑制作用，这为胰腺癌的临床治疗提供了新的思路和潜在的应用前景。在临床治疗中，胰腺癌的治疗面临诸多挑战，如对传统化疗药物的耐药性、手术切除率低以及患者预后差等问题。沙利度胺作为一种具有多种生物学活性的药物，其抗血管生成和抑制肿瘤细胞生长的作用为胰腺癌的治疗带来了新的希望。从抗血管生成方面来看，肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的关键环节，抑制血管生成可以切断肿瘤的营养供应，从而抑制肿瘤的生长和转移。沙利度胺能够显著抑制SW1990细胞中血管生成相关因子VEGF和bFGF的表达，提示其在抑制胰腺癌血管生成方面具有潜在的应用价值。在临床实践中，可以考虑将沙利度胺与其他抗血管生成药物联合使用，以增强抗血管生成的效果。例如，与贝伐单抗等VEGF抑制剂联合应用，可能通过不同的作用机制协同抑制肿瘤血管生成，提高治疗效果。此外，对于一些无法进行手术切除或对化疗耐药的胰腺癌患者，沙利度胺可以作为一种新的治疗选择，单独或与其他治疗方法联合使用，以延缓肿瘤的进展，改善患者的生存质量。从抑制肿瘤细胞生长方面来看，沙利度胺能够诱导SW1990细胞凋亡并阻滞细胞周期，从而抑制肿瘤细胞的增殖。这一作用机制为胰腺癌的治疗提供了新的靶点。在临床治疗中，可以将沙利度胺与传统化疗药物联合使用，利用其诱导凋亡和阻滞细胞周期的作用，增强化疗药物的敏感性，提高治疗效果。例如，与吉西他滨联合应用，已有研究表明两者具有协同抑制胰腺癌细胞增殖的作用。通过联合用药，可以减少化疗药物的剂量，降低化疗的不良反应，同时提高治疗的有效性。然而，本研究也存在一定的局限性。首先，本研究是在体外细胞实验中进行的，虽然能够初步揭示沙利度胺对胰腺癌细胞的作用机制，但与体内的实际情况存在一定的差异。在体内，肿瘤微环境更加复杂，涉及多种细胞和分子的相互作用，沙利度胺的作用机制可能会受到多种因素的影响。因此，需要进一步开展动物实验和临床试验，验证沙利度胺在体内的有效性和安全性。其次，本研究仅探讨了沙利度胺对SW1990细胞的作用，而胰腺癌存在多种细胞株，不同细胞株对沙利度胺的敏感性和反应可