CN119432939A 麦角硫因的制备方法以及巯基化合物在其中的应用 （弈柯莱生物科技(集团)股份有限公司）

司麦角硫因的制备方法以及巯基化合物在其本发明提供了一种麦角硫因的制备方法以化剂为含巯基的氨基酸和含巯基的多肽的一种2其中，所述催化剂体系包括第一催化剂和第二催化剂所述麦角硫因合成酶选自来源于耻垢分枝杆菌(Mycobacteriumsmegmatis)的EgtE或来源于里氏霉菌(Trichodermareese3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述还原酶选自下组中的任意一种或其组36.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述硫氧化物的浓度为1_100mM，优选为10.巯基化合物在麦角硫因合成酶催化硫氧化物生成麦角硫因中的用途，所述巯基化4麦角硫因的制备方法以及巯基化合物在其中的应用巯基化合物在其中的应用。[0002]麦角硫因(Ergothioneine)是由Tanret在1909年自麦角(ergot)中分离出的包含5,11870和CellChemicalBiology2018,25,519)，反应体系中二硫苏糖醇5smegmatis)的EgtE或来源于里氏霉菌(Trichode67[0064](1)本发明的麦角硫因的制备方法使用含巯基的氨基酸或多肽，避免了具有挥发[0065](2)在引入第二催化剂再生体系后，只需要添加极少量(催化量)的第二催化剂就理后的HPLC图谱。图2中，2(即图1中的硫氧化物2)表示底物硫氧化物所形成的峰，[0070]图4显示含Egt2和胱氨酸还原酶的反应体系中L_半胱氨酸的循环再生路径示意[0071]图5显示了含Egt2和谷胱甘肽还原酶(Gsr)的反应体系中还原型谷胱甘肽(GSH)参[0072]图6显示含Egt2和谷胱甘肽还原酶的反应体系中还原型谷胱甘肽的循环再生路径8[0073]本发明人经过广泛而深入的研究，首次发现了一种使用含巯基的氨基酸和/或含巯基的氨基酸和/或含巯基的多肽的持续再生，也能推动反应持续朝着由硫氧化物底物生[0082]本发明所要解决的技术问题是现有的麦角硫因的制备方法所用的小分子硫醇类β巯基乙醇，在达到较高的底物转化率的同时又可以避免价格高昂且具有挥发性臭味的9还原中间体6生成麦角硫因和氧化型谷胱甘肽(GSSG)，随后NADPH依赖的谷胱甘肽还原酶[0090]硫氧化物底物的转化率的计算方法：根据HPLC图谱数据利用面积归一化法计[0098]胱氨酸还原酶，英文全称为cystinereductase，辅因子为NADH，酶的编号为EC1.6.4.1或者EC1.8.1.6，酶的来源为Maresca,B.,Jacobson,E.,Medoff,G.andKobayashi,G.CystinereductaseinthedimorphicfungusHistoplasmacapsulatum.J.Bacteriol.135(1978)987[0104]将来源于里氏霉菌(Trichodermareesei)的trEgt2的基因序列(GeneBank登录号基因序列(NCBI登录号为NP_388275.1)，经密码子优化后由生工生物工16h后，收集菌体。按照1g：5mL的比例将菌体重悬到Tris_HCl缓冲液(50mMTris，100mM液，终浓度为9mM(约15g/L)的硫氧化物，终浓度为0.02mM的第一催化剂([0115]如图2b所示的实验结果表明，本实施例中硫氧化物的转化率为99.5说明当提称trEgt2粗酶液)，终浓度为75.0mM的第二催化剂L一半胱氨酸。将该反应体系在30℃,边的峰(图中标记为2)表示硫氧化物底物所形成的峰，右边的峰表示麦角硫因产物所形成称trEgt2粗酶液)，终浓度为75.0mM的第二催化剂高半胱氨酸。将该反应体系在30℃,[0130]如图2e所示的实验结果显示，本实施例中硫氧化物的转化率为99.7说明在麦[0136]实施例6在L半胱氨酸的存在下硫氧化物转化为麦角硫因的反应并且添加第二催[0140]实施例7在GSH的存在下硫氧化物转化为麦角硫因的反应并且添加第二催化剂再[0144]根据实施例2和实施例7的实验结果可知，在没有引入用于供第二催化剂GSH再生除臭设备等环保设备的投入。与之相比，本实施例通过构建GSH的酶法再生体系克服了以