CN105431548B 用于癌转移的诊断、预后和治疗的方法 （生物医学研究机构基金会）

P2013303842013.03.12015.09.15PCT/IB2014/0011282014.03.14WO2014/140896ES2014.09.18WO2012/045905A2,2012.04.US2007/0010469A1,200疗法以外，还描述了基于其表达受c-MAF表达的升高调节的一个或多个基因的表达水平的测定来测定患有癌症的受试者发生转移的可能性的方法。其还描述了用于基于诱导c-MAF表达的调和最终PTHLH和PODXL抑制剂以及RERG激活剂在21.定量一个或多个目标基因在受试者的肿瘤样品中的表达水平的物质在制备用于体外预测受试者的ER+乳腺癌的溶骨性骨转移风险的制剂中的用途，其中所述预测包括定量一个或多个目标基因的表达水平，所述基因的表达响应于c-MAF在所述受试者的样品中的其中所述一个或多个目标基因相对于参照值的调节的表达水平表示发生溶骨性骨转其中所述的其表达响应于c-MAF的表达水平的升高而被调节的一个或多个目标基因选其中PTHLH和/或PODXL的表达水平响应于c-MAF的表达增加而升高2.定量一个或多个目标基因在受试者的肿瘤样品中的表达水平的物质在制备用于体外设计用于患有ER+乳腺癌的受试者的个体化疗法的制剂中的用途，其中所述设计包括定量一个或多个目标基因的表达水平，所述基因的表达响应于所述受试者的样品中c-MAF的其中所述一个或多个目标基因相对于参照值的调节的表达水平表示所述受试者适于其中所述的其表达响应于c-MAF的表达水平的升高而被调节的一个或多个目标基因选其中PTHLH和/或PODXL的表达水平响应于c-MAF的表达增加而升高3.权利要求1或2的用途，其中通过测定所述一个4.权利要求1或2的用途，其中通过测定所述一个或多个目5.能够抑制目标基因的表达或目标基因的表达产物的活性的试剂用于制备药剂的用途，所述药剂用于治疗和/或预防受试者中的ER+乳腺癌的溶骨性骨转移,其中所述受试者具有一个或多个目标基因的调节的表达，所述基因的表达响应于c-MAF的表达水平而被调高而增加或响应于所述细胞中的c-MAF的表达水平的降低而减少，并且其中所述目标基因6.权利要求5的用途，其中能够抑制目标基因的表达的试剂选自对于所述目标基因特7.能够刺激目标基因的表达或目标基因的表达产物的活性的试剂用于制备药剂的用3乳腺癌肿瘤细胞中目标基因的表达响应于所述细胞中c-MAF表达水平的升高而减少或者响8.权利要求7的用途，其中能够刺激所述目标基因的表达的试剂选自编码目标基因的4[0004]乳腺癌是是全世界第二大癌症类型(10.4排在肺癌之后)和第五大癌症引起的他莫昔芬或曲妥珠单抗的使用适合性。雌激素受体(ER)的α同种型在约65％的经诊断的乳[0006]具有实体瘤的癌症患者的大多数死亡是由晚期转移引起的事实使得理解使得肿展示对某些器官的向性以外，还举例说明转移是如何由对其知之甚少的复杂机制引起的。方法，其由确定相对于对照样品中的对应表达水平癌性组织样品中一个或多个标志物(包[0009]专利申请US2005/0181375描述用于基于许多在转移性肿瘤(特别是转移至脑的肿瘤)中被上调或下调的基因的表达水平的检测来检测转移[0010]国际专利申请WO2010/000907描述了用作乳腺癌患者的远处转移的基因组预测者[0011]然而，存在对诊断和/或预测患有特定乳腺癌诸如ER-或ER+乳腺癌的患者是否将5[0013]本发明的作者已鉴定了其表达因c-MAF基因的表达的变化而在乳腺癌样品中增加瘤的c-MAF表达水平的升高而被调节的基因在癌组织样品中的表达水平组成，其中相对于标准值的上述一个或多个基因的改变的表达水平是发生转移癌的高风达响应所述肿瘤的c-MAF表达水平的升高而被调节的基因在癌组织样品中的表达水平组[0016]本发明的第三方面涉及抑制基因的表达或该基因的表达产物的活性的试剂用于或甲状腺癌，尤其是乳腺癌，其中所述基因的特点在于其在肿瘤性细胞(特别是乳腺癌细[0017]本发明的第四方面涉及刺激刺激基因的表达或该基因的表达产物的活性的试剂[0019](i)原发癌(特别是乳腺癌)肿瘤样品中的候选者和c-MAF和[0021]其中所述基因的表达水平与原发癌(特别是乳腺癌)肿瘤样品中的c-MAF表达在统计上显著相关，并且响应c-MAF基因表达的调节的表达的变化与所述基因的水平的变化在[0023]图1.(A)增加的(左)或减少的(右)MBP基6生物(BoM2)在异种移植类型的实验性小鼠模型中进行的转移病灶的Ki-67表达水平、增殖证在MAF存在的情况下RERG在ER+乳腺癌转移至[0025]图3.(A)使用X射线对用表征不同MAF水平的不同细胞类型注射的小鼠中的溶骨性TRAP(抗酒石酸碱性磷酸酶)细胞、破骨细胞标志物的数目的定量。(C)使用定量RT-PCR对MAF表达与PTHLH基因之间的关系的验证。(D)使用干细胞对体外破骨细胞的分化进行的实达短的和长的MAF同种型的亲代细胞以及在中和PTHLH功能的肽存在的情况下后者细胞。后一种情况下，每日2次向小鼠的左心室接种腹膜内拮抗剂PTHLH肽(12微克/小鼠/日)的[0026]图4.(A)通过荧光定量结合于一层骨髓来源的细胞(BMSC)的表达高(shControl)或降低的(shMAF)c-MAF基因水平的细胞的数目。(B)通过荧光定量结合于一层细胞外肺基质蛋白诸如纤连蛋白的的表达高(shControl)或降低的(shMAF#1或#2)c-MAF基因水平的细结合过程的来自选择蛋白家族(糖蛋白)的蛋白的基因。(D)PODXL基因负责表达c-MAF的癌性乳腺细胞与骨髓细胞结合的功能验证。与整联蛋白介导的附着的中性(RGES)或阻断性所述基因的表达发生(破坏c-MAF基因的转录和/或阻断mRNA从c-MAF基因表达的翻译)和直于假定的抑制剂阻断c-MAF促进体外细胞增殖的能力(如在国际专利申请WO2005/046731中有c-MAF应答区域(MARE或c-MAF应答元件)的启动子控制下的报告基因的转录能力的能力7(如WO2008098351中描述的)，或基于假定的抑制剂在表达NFATc2和c-MAF的细胞中响应利用PMA/离子霉素的刺激的IL-4启动子控制下的基因表达的能力(如US2009048117A子在长度上可变化(通常为18-30个碱基对)并且在反义链含有不同程度的与其靶mRNA的互在登录号NG_016440下描述于NCBI数据库(对应于2011年12月18日的NCBI的版本)中。前述长的c-MAF同种型)和同种型β或2(对应于短的c-MAF同种型)之一。每一个前述同种型的互补DNA序列分别在登录号NM_005360.4和NM_001031804.2下描述于NCBI数据库(对应于20118于下面的一项：症影响4个或更多个腋淋巴结，并且在内乳淋巴结中或在前哨淋巴结活检组织中发现最少9的群体表达其本身并且其差异表达(单独地或与其它基因组合地)与特定表型的相关性达蛋白复合物中的所述蛋白与细胞内细胞骨架元件的Na+/H+交换体的调节因子的结合以及NM_005397.3(变体2)下提供于NCBI数据库(2013年3月3日版)中。由PODXL基因编码的蛋白质的序列于登录号NP_001018121.1(同种型1)和NP_005388.2(同种型2)下提交于NCBI数据[0055]“PTHLH”(甲状旁腺激素样激素基因)位于人12号染色体中，并且编码属于称为PTHrP(甲状旁腺激素相关蛋白)的属于甲状旁腺激素家族的蛋白质。该蛋白除在乳腺和牙AAA60359.1(形式C)下提供于NCBI数据库(1995年1月10日版)变体的说明在登录号NM_032918.2(变体1)和NM_001190726.1(变体2)下提交于NCBI数据库1)和NP_001177655(同种型2)下提供于NCBI数据库((2011年11月28[0058]“溶骨性骨转移”是指因肿瘤细胞对破骨细胞活性的刺激而导致的转移的邻近部加工成成熟miRNA的基因编码。成熟miRNA分子与一个或多个mRNA分子部分互补并通过与RNA的干扰相似的过程或抑制mRNA的翻译来减少Wearden,StatisticsforResearchbyWiley,John&定而无大的困难。关于这些统计工具的另外信息可见于Dowdy和Wearden,Statisticsfor于所述启动子的核酸能够在乳腺组织中特异性表面而在其它组织中未观察到显著的表达[0067]"原发肿瘤"是指源于在其中发现其的组织或器官并且未曾从另一个位置转移至[0068]"ER+肿瘤"是指表达高于确定水平的ER的肿瘤。高于或等于10fm超过10％的细胞核的通过免疫组织化学培养基的阳性检测，是将乳腺肿瘤认为是ER+的通疫组织化学技术(例如，使用由ElizabethH等人，2010,JournalofCli者，当每细胞核HER2基因拷贝数少于4或当HER2基因拷贝数相较于通过FISH测定的染色体测定描述于例如美国临床肿瘤学会/美国病理学家协会指南(AmericanSocietyof[0071]"PR-肿瘤"是指不可检测地表达孕酮受体的肿瘤。在本说明书中，孕酮受体低于[0073]表达"参照值"是指用作通过获自患者的样品获得的值/数据的参照的实验室值。例性核酸分子是亚磷酰胺、硫代磷酸脂和甲基膦酸酯DNA类似物(也参见美国专利号[0078]与mRNA的5'末端，例如5'非翻译序列互补并翻译区的互补寡核苷酸应当被包括在AUG起始密码子的互补序列中。针对mRNA的编码区的[0079]反义寡核苷酸可来自单链或双链DNA或RNA或所述DNA或RNA的化学混合物或衍生基因在身体的靶细胞中转录(一般参见，Helene,AnticancerDrugDes.6(6)：569-84,[0085]表达"RNA干扰"或RNAi是可在真核细胞中发生的基因表达的序列特异性和转录后列的降解。该dsRNA能够通过利用RNA酶II(切丁酶)将RNA转变成siRNA来引起基因表达沉[0086]如本文中所用,术语"核酸"是指具有两个或更[0087]如本文中所用的，"反义序列"包括组成能够结合靶DNA(反义)或mRNA(有义)序列序列的反义或有义寡核苷酸的能力描述于例如Stein和Cohen,CancerRes.48:2659,[0088]如本文中所用的，术语"核酶"或"RNA酶"或"催化RNA"是指催化化学反应的RNA分但已发现它们催化核糖体的氨基转移酶活性、DNA连接酶的连接活性和通过常规蛋白质测[0091]本发明的发明人已鉴定了一组其表达与c-MAF的表达正相关或负相关的基因。具体地，本发明人已鉴定一系列特征在于如下方面的基因：(i)它们在原发肿瘤中的表达与MAF表达显著相关和(ii)它们在MCF7细胞中的表达被来源于表达MAF的MCF7的高度转移至为是通过c-MAF介导的骨转移的程序的成员。这些基因示于表1(通过c-MAF程序增加的基功能性验证PTHLH、PODXL和RERG作为ER+乳腺癌的骨转移过程的原因性靶基因和作为由c-MAF介导的骨转移的程序的部分的作用。癌或甲状腺癌，尤其是乳腺癌在受试者中的转移的体外方法(在下文中，本发明的第一方响应c-MAF表达水平的升高而被调节，其中一个或多个基因相较于参照基因的改变的表达[0093]本发明的第一方法包括定量一个或多个基因(其表达响应c-MAF表达水平的升而[0094]如本发明中所用，表达"其表达响应c-MAF表达水平的升高而被调节的基因"是指高而被调节的基因包括其在原发肿瘤样品中的表达与c-MAF表达显著相关的基因和/或其在乳腺癌细胞中的表达响应c-MAF表达水平的变化[0095]以优选的形式进行，其表达响应c-MAF表达水平的升高而被调节的基因包括其表[0096]以优选的形式进行，其表达响应c-MAF表达水平的升高而被调节的基因包括其表[0099]以优选的形式进行，本发明的第一方法包括定量选自表1中显示的基因的一个或[0109]根据本发明的第一方法，表1中所示的基因的一个或多个的表达水平相较于参照水平与c-MAF表达水平反相关和(ii)当在乳腺癌细胞系中诱导c-MAF表达时它们的表达水平下降或当在乳腺癌细胞系中沉默c-MAF时它们[0112]根据本发明的第一方法，表2中所示的基因的一个或多个的表达水平相较于参照[0114]如本主题中的专利将理解的，基因表达水平的定量可通过测量所述基因的RNA水已知的并且是商购可得的方法来提取(Sambroock,J.，等人,“Molecularcloning：a[0116]因此，其表达响应c-MAF表达水平的升高而被调节的基因的表达水平的定量可从因所述基因的转录而产生的RNA(信使RNA或mRNA)或可选择地，从所述基因的互补DNA当的探针的使用、Northern印迹和受c-MAF调节的目标基因的mRNA或其对应的cDNA的特异规技术来定量，在该情况下，本发明的方法包括通过对应mRNA的反转录(RT)合成对应的[0118]在具体的实施方案中，其表达响应c-MAF表达水平的升高而被调节的基因的表达水平的定量使用定量聚合酶链式反应(PCR)或DNA或RNA阵列来进行。此外，其表达响应c-MAF表达水平的升高而被调节的基因的表达水平的定量还可通过定量由该基因编码的蛋白质或所述蛋白质的任何功能性等同物的表达水平来进行。其表达响应c-MAF表达水平的升高而被调节的基因的表达水平还可通过定量所述蛋白质的任何同种型的表达水平来进行。是特异性的抗体包括，但不限于，由Abcam提供的识别PTHrP的小鼠单克隆抗体3H1-5G8NovusBiologicals提供的识别人PTHrP的小鼠单克隆抗体(目录号NBP1-26542)等。对于体(10687-1-AP)、由Abcam提供的识别大鼠RERG的兔多克隆抗体(ab115806)和由NovusBiologicals提供的识别人RERG的小鼠多克隆抗体(H其是乳腺癌的受试者的肿瘤组织样品中响应c-MAF表达水平的升高而被调节)的表达水平[0123]当具体地实施本发明的第一方法时，如果表1中包含的一个或多个基因在的受试样品中的表达水平相对于参照范围升高，和/或表2中包括的一个或多个基因在受试者(其[0124]需要使其表达响应c-MAF表达水平的升高而被调节的基因的表达水平的测定与参样品中，可以例如通过提供关于参照群体的平均浓度来测定生物标志物的正常(参照)浓平导致的样品集合优选由具有与正被研究的患者相同类型的癌症多个其中疾病被上述方法的任何方法良好记录的分离的样品中测定其表达受c-MAF调节的节的一个或多个基因的表达水平的改变与发生转移的概率相关，这些受c-MAF调节的基因的水平的测定帮助决定用于患有癌症的受试[0133]本发明的第二方法在第一阶段包括定量一个或多个基因(其表达响应c-MAF表达MAF表达水平的升高而被调节的基因选自表1中包括的基因和/或表2中包括的基因中的一或来自表2的一个或多个基因的表达水平相对于参照范围降低，则受试者容易接受防止转[0141]在第二阶段，将其表达在受试者肿瘤样品中响应c-MAF表达水平的升高而被调节的一个或多个基因的表达与参照范围相比较。该参照范围获自其表达响应c-MAF表达水平但还未经历转移的受试者的肿瘤组织样品。并且对于对照样品甚至更优选的是具有ER+乳织检查中收集的肿瘤组织样品中测量的c-MAF表达水平的转移(如果受试者还未发生转移)和/或治疗转移(如果受试者已发生[0144]目标在于预防和/或治疗具有癌症，诸如乳腺癌的受试者的转移的治疗包括化学物可用于阻止这些器官产生激素或阻止所述激素作[0147]-免疫疗法是帮助免疫系统本身抵抗患者的癌症的治疗。存在几种类型的用于治[0149]本发明的发明人已说明通过乳腺肿瘤的异种移植产生的骨转移群集模型中的达的增加而增加(或在乳腺肿瘤中其表达响c-MAF表达的减少而减少)的基因是来自ER+乳能性验证了粘附测定中的转移基因PODXL的表达与骨髓细胞的关系(实施例5)。PODXL表达在体内在高度转移骨细胞MCF7中减少，所述MCF7显示造成PODXL基因的内源水平升高的c-因性靶基因和通过c-MAF介导的骨转移程序的部肾或甲状腺，尤其是乳腺中发现的那些癌细胞中的表达在这些细胞中响应c-MAF表达水平达在这些细胞中响应c-MAF表达水平的升高而增加或在这些细胞中响应c-MAF表达水平的状腺，尤其是乳腺中发现的那些肿瘤细胞中的表达在这些细胞中响应c-MAF表达水平的升高而增加或在这些细胞中响应c-MAF表达[0155]表达的抑制剂可通过用于测定化合物抑制某些基因的转录(RT-PCR、Northern印解物中的体外翻译测定)的能力的标准方法来鉴定。在本发明中，当化合物能够使基因的被认为是基因表达的抑制剂。[0156]用于本发明的基因表达的抑制剂的实例包括，但不限于基因特异性反义寡核苷[0160]-其中核苷酸之间的连接与自然出现的那些连接不同的(诸如硫代磷酸酯连接)的有在适合用于目标细胞中表达的启动子控制下的siRN[0166]适合用于siRNA表达的载体是存在于DNA的两个区域中的编码siRNA的两条链的那条链的转录单位以每一条DNA链的转录依赖于其自已所专有的可以是相同或不同的启动子2003,BMCBiotechnol.,3:21)、小鼠U6启动子和人H1启动子(Zheng,L.，等人,2004,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,135-140yWO2005026322)以及人U6启动子和小鼠H1启动子(Kaykas,A.yMoon,R.,2004,BMCCellBiol.,5:16)的那些系统中被描述为反向启动子系[0168]适合用于从收敛(convergent)和发散(divergent)载体表达siRNA的启动子包括的启动子包括，但不必限于组成型启动子，诸如来自真核病毒(诸如多瘤病毒、腺病毒、其适合在乳腺肿瘤中(优选在ER+乳腺肿瘤中)特异性表达目标基因，从而对于所述表达是[0169]siRNA可从所谓的shRNA(短发夹RNA)细胞内产生，其特征在于通过环或发夹区连[0170]适合用于siRNA和shRNA表达的载体包括原核生物表达载体诸如pUC18、pUC19、昆虫细胞中的表达载体诸如pAC系列和pVL系列载体、植物细胞中的表达载体诸如pIBI系(腺病毒、与腺病毒相关的病毒以及逆转录病毒，具体地，慢病毒)以及非病毒载体(诸如[0171]本发明的siRNA和shRNA可通过使用本领域专家已知的一系列技设计siRNA的基础的核苷酸序列区域不受限制，并且可含有编码序列的区域(起始密码子[0173]抑制基因表达的优选的试剂是被设计来催化切割靶mRNA的转录物以防止编码期望抑制其活性的PTHLH或PODXL的mRNA的翻译的核酶。核酶是能够催化RNA的特异性切割的起作用。明的实施例3中解释的测定来鉴定，所述测定的特征在于抑制剂在具有高转移群集能力的乳腺癌转移的动物模型中减少溶骨性病变的形成和/或分化破骨细胞体外转移性病灶的能克隆抗体可通过用希望被抑制的蛋白质免疫动物来制备。单克隆抗体可通过使用由存在的情况下未显示基线表达或显示不显著的基线表达并且能够促进位于位置3’的基因的激活的那些启动子。基于诱导剂的类型，诱导型启动子被分类为Tet开/关型启动子子(US2004132086)、蜕皮激素-依赖性启动子(Christopherson等人，1992,Proc.Nat[0182]适合于编码c-MAF的显性阴性变体[sic：变体]的多核苷酸的表达的核生物中的表达载体的载体衍生物诸如pUC18、pUC19、Bluescript及其衍生物、mp18、结合的病毒，诸如逆转录病毒，特别是慢病毒)以及非病毒载体(诸如pSilencer4.1-CMV[0184]在甚至更优选的实施方案中，其表达在乳腺肿瘤中响应c-MAF表达水平的升高而PTHLH的CambridgeBioscience'ssiRNA双链体(catalogNo.SR303[0188]PODXL-特异性siRNA包括，但不限于，商购可得的siRNA，诸如SantaCruz[0189]有效地用于本发明的PTHLH抑制性抗体包括多克隆抗体(目录号251478)、识别人PTHLH的BioVision's兔多克隆抗体(目录号5652-[0190]有效地用于本发明的PODXL抑制抗体包括，但不限于，识别人PODXL的N末端区的491-493,Doppelt等人，1986,Proc.Natl.Acad.34)、[Leu11,D-Trp12]hPTHrP(7-34)2、[Asn10Leu11]hPTHrP(7-34)-NH2和[Asn10,Leu11,D-[0197]-由Olstad等人(Peptides1995,16:1031-1037)和Roubini等人(Biochemis[0198]-由Nutt等人(Endocrinology,1990,127:491-3)描述的肽[Asn10Leu11]-PTHrP和/或缺失从本发明的肽的序列衍生的那些肽，只要所述肽的功能维持至少20％、至少法诸如BLAST(AltschulSF等人BasicLocalAlignmentSearchTool.JMol[0207]本发明的发明人已显示RERG基因的表达水平与c-MAF表达水平反相关并且乳腺肿[0210]在另一个方面，本发明涉及用于治疗和/或预防受试者的癌症转移，特别是乳腺胞表达响应所述细胞中的c-MAF的表达水平的升高而减少或在于其表达响应所述细胞中的核苷酸或其中刺激所述基因的表达产物的活性的试剂是由所述基因编码些方法包括磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖、电穿孔、直接显微注射、载有DNA的脂质体和l这些技术中的一些技术可被改造以在体内或离体正确酸寡聚物(Lindgren,A.等人，2000,[0233]在优选实施方案中，编码RERG的核酸对应于收集在NCBI数据库(于2011年11月28日版中)中的登录号为NM_032918.2(变体1)和NM_001190726.1(变体2)的两个转录变体的[0234]术语"RERG蛋白的功能等同变体"被理解为意指其序列通过一个或多个氨基酸的普通技术人员公知的计算机算法和方法来测定。两个核酸序列之间的同一性优选使用癌中的c-MAF的表达水平的降低而减少的基因的试剂，抑制其表达响应肿瘤，特别是乳腺癌中的c‑MAF的表达水平的降低而增加的基因的表达的试剂，和/或刺激其表达响应肿瘤，腺癌中的c‑MAF的表达水平的降低而增加的基因的表达产物的活性的试剂。液，特别是用于可注射溶液。合适的药物载体由EWMartin,1995在"Remington's[0240]制造本发明的药物组合物的所需药物施用形式所必需的媒介物和辅助物质将取[0241]对于在药物中的用途，本发明的抑制剂/激活剂可单独地或与另外的活性剂组合法的综述可见于TratadodeFarmaciaGalénica,C.FaulíiTrillo,Luzán5,S.A.de体的组合物可以通过本领域中已知的常规方法来配制。[0242]在施用核酸(siRNA、编码siRNA或shRNA的多核苷酸或编码显性阴性的多核苷酸)VP22蛋白和精氨酸寡聚物和WO07069090(L毒的载体、腺相关病毒中或逆转录病毒中的载体，诸如基于鼠白血病病毒(MLV)或慢病毒[0246]本发明的发明人已开发借助于其有可能鉴定与患乳腺癌患者发生转移的倾向性/易感性相关的基因的方法。该方法基于其在乳腺肿瘤中的表达与c-MAF的表达相关以及其在乳腺癌细胞系中的表达被观察为响应c-MAF的表达水平的变化而(在下文中称为本发是的基因鉴定法)，其包括(i)测定原发性乳腺癌肿瘤样品中的候选基因和c-MAF基因的表达水平，和(ii)测定一组乳腺癌细胞中的所述候选基因的表达水平响表明所述基因是患者对转移的倾向性/趋势的标[0249]在第一阶段，用于鉴定本发明的基因的方法包括测定候选基因和c-MAF基因在原[0250]所述候选基因和c-MAF基因在原发性组织样品中的表达水平的测定可基本上如体所述候选基因和c-MAF基因的表达水平可使用由所述基因的转录产生的RNA(RNA信使或[0252]候选基因的表达水平的变化的测定需要在其间c-MAF的表达水平的变化已被引入MAF的表达水平的所述变化可代表c-MA表达的增加或c-MAF的表达于将目标基因引入细胞并适当地排列以在细胞中表达目的基因的适当方法已在治疗方法的内容中进行了描述，所述治疗方法基于其表达与c-MAF的表达呈反相关并且以相同的形[0254]为了在靶/给定的细胞群中诱导c-MAF的表达水平的升高，可能通过将编码c-MAF通过形成除了所述多核苷酸以外还含有保证其在宿主原核生物中扩增的另外的序列(例CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&SonsInc,2003中的第9.1至9.5节)将编码c-MAF的多核苷酸或含有所述多核苷酸的载体引入作为本研究的目标的细VP22蛋白和精氨酸寡聚物(LindgreMol.Therapy8:143-150ySnyder,E.L.和Dowdy,S.F.,2004,Pharm.Re[0264]在更具体的模型中，对c-MAF的表达的增加在c-MAF的短的同种型在癌细胞(特别在另一个甚至更具体的模型中，对c-MAF的表达的增加在c-MAF的长的同种型在癌细胞(特平的降低的合适的试剂的实例包括特异于所述基因的反义寡核苷酸、特异于所述基因的RNA干扰(RNAi)处理、所述基因的催化性RNA或特异核糖核酸酶、C-MAF抑制剂和抑制性抗[0266]c-MAF的RNA干扰(RNAi)法包括WO2005046731中描述的RNAi，其中一条链为ACGGCUCGAGCAGCGACAA(SEQIDNO：1)。特异于c-MAF的RNCUUACCAGUGUGUUCACAA(SEQIDNO:2)、UGGAAGACUACUACUGGAUG(SEQIDNO：3)、AUUUGCAGUCAUGGAGAACC(SEQIDNO：4)、CAAGGAGAAAUACGAGAAGU(SEQIDNO：5)、二聚化，但鉴于它们不能同二聚化以及与AP-1家族的其它成员诸如FosyJun异二聚化而式激活的结构域的氨基-末端的任何小的maf蛋白(例如mafK、mafF、mafg和pi8)(Fujiwara等人(1993)Oncogene8,2371-2380；Igarashi等人(1995)J.Biol.Chem.270,7615-7624；Andrews等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90,11488-11492；Kataoka等人[0268]或者，用于c-MAF的显性阴性蛋白包括维持与其它蛋白二聚化的能力但缺乏激活[0276]表3：具有抑制c-MAF的能力的小分子c-MAF的其它抑制剂描述于专利申请甲状腺癌，但尤其是乳腺癌的癌细胞的c-MAF的长的同种型来产生c-MAF的表达水平的降型中，使用来自MCF7乳腺癌细胞系的细胞进行步骤(ii)。结肠癌细胞系包括，但不限于，[0285]一旦已测定下列方面：(i)候选基因和c-MAF基因在原发性癌肿瘤样品(诸如来自地乳腺癌细胞中的表达水平响应c-MAF基因的表达的调节的变化，用于鉴定用于鉴定对转样品中的c-MAF的水平直接相关以及如果响应c-MAF基因的表达的调节的表达水平的变化[0289]在另一个优选模型中，如果步骤(i)中测定的所述基因的表达与原发性肿瘤样品中的c-MAF的水平直接相关以及如果响应c-MAF基因的表达的调节的表达水平的变化与所[0290]通过两个基因的表达水平与参照值的比较来产生候选基因的表达与原发性肿瘤样品中的c-MAF的表达之间的相关性，其中如果两个基因都在相同样品中显示它们的表达(候选基因的表达相对于参照值的增加与c-MAF的表达相对所述基因的参照值的增加相关，或候选基因的表达相对参照值的减少与c-MAF基因的表达相对所述基因的参照值的减少相)或相反的(候选基因的表达相对于参照值的增加与c-MAF的表达相对于所述基因的参照值减少相关，或候选基因的表达相对于参照值的减少与c-MAF基因的表达相对于所述基因[0291]修饰基因的表达水平响应c-MAF基因的调节的变化之间的相关性，通过在诱导c-MAF基因的表达的调节之前测定所述基因的表达水平和在已产生c-MAF基因的表达的调节之后所述基因在相同样品中的表达水平来实现，如果候选基因的表达伴随c-MAF的表达的伴随减少的c-MAF表达而增加，或候选基因表达伴随着增加的c-MAF表达(相对于该基因的[0298]用于乳腺癌ER+和ER-PR-Her2-的转移的研究的新实验模型已被开发。为此目使用称为MCF7的乳腺癌ER+的人细胞系，已用允许表达GFP/荧光素酶的载体以稳定形式转染的所述乳腺癌ER+人细胞系。通过经由心室内或在或在(尾巴)尾静脉中的注射将该细胞接种在免疫缺陷型小鼠(Balb-c/裸鼠)中以能够选择在不同器官中具有转移能力的细胞。大鼠具有雌激素的皮下埋植剂以保证这些激素在整个实验过程观察可。因其灵敏度水平和速度而使用XenogenIVIS型的设备和Livingimage软件作为优选方法来在全身麻醉下对动物进行发光图像(荧光素酶活性)的捕获。为了分离转移细胞，无偏体内选择法确认发现其表达在转移细胞于特定组织和器官中的定殖中被改变的基因[0303]通过349个原发性乳腺肿瘤的全基因组转录特征谱的比较，鉴定了其表达以积极好相关的基因。通过在确定的细胞模型中分析它们相对于的c-MAF的表达的表达验证以该将候选基因的表达水平与使用原发性乳腺癌肿瘤和转移组群获得的基因表达的特征谱相比较，所述肿瘤和转移组群包括560个原发性乳腺癌肿瘤和46个来自乳腺癌患者的转移细[0306]为了获得转移中富含有的基因的组和验证它们的临床相关性，使用R统计包和Bioconductor。输入用于数据处理的特定函数和结构并上[0309]进行分析，其目的是选择在来源于单一R+乳腺癌细胞系中响应c-MAF的表达水平[0312]iii)与原发性肿瘤中和ii)中提及的细胞条件之一中的MAF的表达相关的基因被在表达水平上的变化是如何与ER+原发性乳腺癌[0316]相对含有来自乳腺癌患者的560个原发性乳腺癌肿瘤和58个转移的表达特征谱和[0317]获自骨转移的基因在ER+原发性肿瘤中的基因表达显示与骨中的复发的显著相关能性验证在先前的分析中呈阳性并且与c-MAF的表达直接相关的转移PTHLH基因(表1和图3)。验证指导转移过程的候选基因的标准逼近/接近是在表达c-MAF的低转移细胞中丢失PTH