【临床质谱检验作业指导】临床质谱检验定量项目性能验证

【临床质谱检验作业指导】临床质谱检验定量项目性能验证01目的本程序建立临床质谱检验定量项目性能验证程序的要求和标准操作程序，对新购置的检测系统在正式用于检测标本前对检测系统的分析性能进行评价，确认检测系统的分析性能符合临床要求，以保证检验结果的可靠性。02范围适用于临床质谱组各类定量检验项目的性能验证。03职责1.专业组质量监督员负责临床质谱组性能验证程序的编写和实施。2.专业组组长负责临床质谱组性能验证程序的制定和审核。3.科室技术负责人负责临床质谱组性能验证程序的批准。04定义和术语1.精密度(precision)指在规定条件下所获得独立测量结果的接近程度。2.不精密度(imprecision)指特定条件下各独立测量结果的分散程度。可分为批间、日内、日间、仪器内以及“室内”不精密度。3.重复性(repeatability)指在相同检测条件下对同一待测物进行连续测量所得结果的接近程度，也称作批内精密度。4.重现性(reproducbility)指在变化的检测条件下对同一待测物进行检测所获得结果的接近程度。根据条件变化因素需对条件进行阐明，可分为批间、日内、日间、仪器内及室内等精密度。5.批(run)指在检测系统真实性和精密度稳定的间隔期，一般不超过24小时或少于2小时。6.样品(sample)指源自总体的一个或多个部分，能提供总体的信息，通常作为总体的结论基础。7.准确度(accuracy)指检测结果与被测量真值之间的一致程度。8.不准确度(inaccuracy)指检测值与真值数量上的差异。通常用来衡量准确度的好坏。9.正确度(truness)指大批检测结果的均值与真值的一致程度。通常用统计量“偏倚(bias)”来表示。10.偏倚(bias)指测量结果的预期值与可接受值间的差异。以检测计量单位或百分率表示，即平均值与参考值的差异。11.误差(error)指对于真值或对于可接受的、预期真值或参考值的偏离，分为随机误差和系统误差。12.系统误差(systematicerror)指可重复条件下，对相同的被测量无数次检测结果的均值与被测量真值的差异。用统计量偏倚表示。13.随机误差(randomerror)在可重复的条件下，对相同的被测量无数次检测结果的均值与检测结果的差异。以该均值下的标准差大小来衡量。14.总误差(totaleror)能影响分析结果准确度的确定误差的组合，包括随机误差和系统误差，是不准确度的估计。15.分析测量范围(analyticalmeasurementrange,AMR)指患者标本未经任何处理，由检测系统直接测量得到的可靠结果范围，在此范围内一系列不同标本分析物的测量值与其实际浓度呈线性比例关系。16.临床可报告范围(clinicalreportablerange,CRR)指定量检测项目向临床能报告的检测范围，患者标本可经稀释、浓缩或其他预处理。多数定量检测项目的CRR比AMR窄，可通过最大浓缩度来确定CRR。对于CRR大于AMR的检验项目需进行最大稀释度验证试验，并结合临床决定水平和功能灵敏度来共同确定该项目的CRR。17.线性范围(linearrange)指覆盖检测系统的可接受线性关系的范围，非线性误差小于设定标准。18.线性(linearity)检测标本时，在一定范围内可以直接按比例关系得出分析物含量的能力。19.参考个体(referenceindividual)依据临床对某个检验项目的使用要求确定选择原则，以此选择检测参考值的个体。确定参考个体的健康状态非常重要。20.参考总体(referencepopulation)所有参考个体的总和。注意：参考总体中的参考个体数量通常未知，因此它是一个假设的实体。21.参考抽样组(referencesamplegroup)能够代表参考总体的足够数量的个体。22.参考值(referencevalue)通过对参考个体特殊类型的量的观察或测量而获得的值。23.参考范围(referencedistribution)所有参考抽样组的各个参考值的集合即为参考范围。24.参考限(referencelimit)依据所有参考值的分布特性以及临床使用要求，选择合适的统计方法进行归纳分析后确定的限值，包括参考上限和参考下限。参考值的一部分小于或等于参考下限，一部分大于或等于参考上限。25.参考区间(referenceinterval)介于参考上限和参考下限之间的值，包括参考上限和参考下限。在某些情况下可能只有一个参考上限，若该限为“×”,则相应的参考区间为0~x。26.观测值(observedvalue)即患者检测结果，通过观察或测量受试者某标本而获得的值。临床可用该值与参考值，参考范围，参考限或参考区间相比较。27.检测低限(lowerlimitofdetection,LLD)指样品单次检测可以达到的非空白检测响应量对应的分析物量。28.生物检测限指某样品单次检测可能具有的最小响应量刚大于LLD响应量时，该样品内含有的分析物浓度。29.功能灵敏度(functionalsensitivity,FS)指检测系统可定量报告分析物的最低浓度。30.携带污染率样品之间导致浓度低的样品的测定结果假性升高的污染程度。31.基质效应在基于液相色谱质谱(LC-MS)的方法分析生物标本时，标本中的一些化合物可能对目标待测物的离子化效率产生影响，且这个影响可以从仪器响应上观察到。05性能验证程序对于厂商无法提供完整性能指标的检验项目，临床质谱组定量检验项目的性能验证至少应对该项目的精密度、正确度、可报告范围、参考区间、功能灵敏度、携带污染率及基质效应进行评价。质量监督员在实验过程中及实验结束后的数据汇总及处理过程中将各类信息在“iLab管理平台”的性能评价模块中进行登记。1.精密度性能验证程序按照WS/T492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》中介绍的方案进行精密度验证。精密度性能验证与携带污染评价程序可以同步完成。1)在实验前质量管理员应熟练掌握仪器的操作程序、校准程序、保养程序及检测程序的，并参照WS/T492-2016进行精密度性能实验的基本要求和注意事项。选取的实验样本的浓度尽可能选择与厂商声明性能相近的浓度或接近该项目医学决定水平的浓度。建议选择稳定性好的、血清基质的质控物作为实验样本。注意冰冻保存实验样本内含分析物的稳定性。严格控制冻融的时间、混匀的操作手法。2)质量管理员对稳定的实验样本每天进行1批实验，每批重复测定3次，每天两个浓度水平，连续测定5天。实验过程中严格按照厂商操作规程进行检测系统的校准，如果厂家指出其声明的精密度数据是在多个校准周期下产生的，操作者应在实验周期内选择重新校准。按照室内质控程序进行常规室内质控，用于室内质控的控制品的检测数据不可以作为精密度性能验证实验的评价数据。如果出现失控数据，则应查找原因，重做实验。2.正确度性能验证程序按照WS/T492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》中介绍的利用患者样本结果的比较方案进行正确度验证。1)在实验前质量监督员应熟练掌握仪器的操作程序、校准程序、保养程序及检测程序的，并参照WS/T492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》进行正确性能实验的基本要求和注意事项。实验过程中注意冰冻保存实验样品内含分析物的稳定性。严格控制冻融的时间、混匀的操作手法。2)收集20份患者标本，选取的实验标本中待测物的浓度尽可能分布整个线性范围，不得使用超出线性范围的标本。有些浓度不易得到，可将同一病种标本混合(不超过2份)或采取校准物质添加的方式，加入量需少于总体积的10%。如果整个线性范围的标本不能获得，结论也仅适用已检测的范围。3)在4天内，用实验方法和比较方法分别检测这20份标本，每天测定5个，每天测1次。按照室内质控程序进行常规室内质控，如果出现失控数据，则应查找原因，重做实验。4)按照下列公式计算每个标本两种方法间结果的差值：3.临床可报告范围性能验证程序质量监督员可以采用平均斜率法及最大稀释度评价实验对项目的临床可报告范围进行验证。(1)平均斜率法的分析测量范围评价程序1)进行分析测量范围实验的样品必须和真实标本尽可能相似，和真实标本具有相同的基质状态。收集5个或以上系列浓度的实验样品，浓度范围遍布整个预期可报告范围，最高浓度的样品应达到可报告范围的上限，各实验样品内含分析物浓度呈等比例关系，如果高浓度样品难以获得可通过在低浓度水平的患者样品中添加校准物质的方法制备，加入量原则上少于总体积的10%,可根据具体情况用合适的稀释剂作系列不同程度稀释，形成多个浓度的系列评价样品。2)实验时，质量监督员用高值(H)和低值(L)的样品，按1L、0.8L+0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H、1H等不同稀释浓度形成系列浓度样本，对系列样本在检测系统上检测，每个样品按随机方式重复测定4次，在一个分析批内完成，依照系列浓度血清的配制稀释关系计算出各实验样品内含分析物的浓度，为系列浓度样品的预期值，通过测试获得6对测量值(y)和预期值(x),并作图得到回归方程。3)对于得直线回归(y=bx+a)。若b很接近1,a近于0,则可直接判断该测定方法可报告范围在实验已涉及浓度。若b不接近1(<0.97,或>1.03)且a较大，须重新对所有实验结果进行分析，判断是高浓度处还是低浓度处的实测值和预期值间有较大偏倚。尝试舍去某组数据，另作回归统计。若缩小分析范围后回归式有明显改善，b近于1,a趋于0,则缩小的分析范围是真实的分析测量范围。若b很接近1,单从a无法判断和0之间是否有显著性差异，需要做截距与0的t检验。(2)最大稀释度评价程序1)进行分析测量范围实验的样品必须和真实标本尽可能相似，和真实标本具有相同的基质状态。选择1个超过分析测量范围上限的标本，如果超过分析测量范围上限的标本难以获得可通过在低浓度水平的患者样品中添加校准物质的方法制备，加入量原则上少于总体积的10%,可根据具体情况用合适的稀释剂作系列不同程度稀释，或按照厂商提供的可稀释倍数形成多个浓度的系列评价样品。2)按从低到高对系列样品在检测系统上检测，在一个分析批内完成检测。3)将已知超过分析测量范围上限的实验样品在系统上进行检测获得的实测值除以理论值，计算稀释回收率(稀释回收率=实测值/预期值×100%),当稀释后样品的稀释回收率≤1/2TEa,或当浓度大于定量下限的3倍时，稀释回收率在100%±15%的范围内，选择满足上述要求的稀释倍数或满足昌盛声明的稀释倍数为最大稀释倍数，(3)临床可报告范围评价程序平均斜率法的分析测量范围验证实验获得的分析测量范围上限乘以的最大稀释度评价实验获得的最大稀释倍数即为临床可报告范围上限，结合分析测量范围的下限或功能灵敏度确定临床可报告范围。4.生物参考区间验证程序当直接采用国家权威机构或权威刊物颁发的适合实验室的生物参考区间或引用试剂供应商提供的对应的生物参考区间时，需进行小样本参考个体的生物参考区间验证，验证方案参考WS/T402-2012《临床实验室检验项目参考区间的制定》。1)对每个分组的生物参考区间验证，质量管理员须选取20个参考个体样本作为验证对象。20个参考个体应合理地代表临床质谱组选择的健康总体，并且满足其排除和分组标准。2)样本参考个体验证的过程需严格按照实验室操作程序进行标本采集、处理、检测和质控，检测前还需保证分析系统性能符合相关要求。3)依照临床质谱组标准操作规程检测标本，检测结果用“1/3”规则进行离群值检验，即将疑似离群点与其相邻点的差值D和数据全距R相除，即D/R≥1/3判为离群点，剔除离群值后用新的参考个体代替，以确保20例测试结果不含离群值。如有2个或以上疑似离群点，可将最小值进行处理，若均大于1/3,全剔除；若均小于1/3,全保留。4)若20例参考个体中不超过2例(或10%的结果)的观测值在原始报告的参考限之外，厂商或提供参考区间的实验室报告的95%参考区间可以接收。若3例以上超出界限，再选择20个参考个体进行验证，若少于或等于2个观测值超过原始参考限，厂商或提供参考区间的实验室报告的参考区间可以接收。若仍有3个观察值超出参考限，应重新检查所用的分析程序，考虑两个样本总体生物学特征上是否存在差异，并且考虑建立自己的参考区间。5)即使小样本量参考个体的生物参考区间验证数据在参考区间以外不超过10%,若这些数据均集中分布在单侧参考限附近，可能存在抽样偏差，应选择大样本验证。5.分析灵敏度评价程序当厂商声明了检测限或功能灵敏度时，可只进行功能灵敏度评价实验，所使用的接近检测限的样品浓度应与厂商声明的浓度接近，实验方法参考《临床生化检验诊断学》中第19章的内容进行。1)质量监督员需在实验开始前准备5份接近检测限的功能灵敏度评价样品。如果从患者样本中难以获得接近检测限的评价样品可在检测系统的系列校准品中的“零浓度”校准品或不含分析物的样品专用稀释液作为空白样品中加入待测物的校准物质进行配制。2)将5份评价样品进行日间重现性测定，测定次数为每天1次至少连续测定10天。检测的过程严格按照实验室操作程序进行样本、采集、处理、检测和质控。3)计算各检测限评价样品的日间变异系数(CV),以日间CV≤20%,Bias%<15%的对应的检测限评价样品检测的平均浓度为功能灵敏度。6.携带污染评价程序携带污染评价程序参照《生化分析仪携带污染的分析评估及处理方法专家共识》中的方法进行。1)精密度性能验证与携带污染评价程序可以同步完成无须额外制备样品，但是需严格按照低浓度样本1→低浓度样本2→低浓度样本3→高浓度样1→高浓度样2→高浓度样3→空白1→空白2