【临床质谱检验作业指导】脂溶性维生素测定操作程序

【临床质谱检验作业指导】脂溶性维生素测定操作程序01目的本操作程序规范了临床质谱组采用液相色谱-串联质谱法对脂溶性维生素测定的方法，确保检测工作有章可循，使检测工作规范化、统一化，保证检测数据和结果的质量。02范围适用于利用浙江迪赛思诊断技术有限公司生产的脂溶性维生素检测试剂盒(液相色谱-串联质谱法)(浙械注准20222401020)在SCIEXTripleQuad4500MD液相色谱质谱联用仪(以下简称“4500MD”)上进行维生素A、25-羟基维生素D₂、25-羟基维生素D₃、维生素E及维生素K₁检测。03职责1.临床质谱组检验人员负责对标本进行登记、前处理、上机检测、数据处理及上传。2.临床质谱组质量管理员负责检验结果的质量保证。3.结果审核人负责检验结果的检验提示撰写及审核。04实验原理液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法通过液相色谱法对待测物进行分离，较小其受其他干扰物的影响，并进一步利用串联质谱选择性地对待测物的质荷比信号进行检测，排除干扰成分离子信号，使检测结果更加灵敏、准确。待测标本的各待测物的峰面积与内标峰面积的比值代入拟合的标准曲线方程，即可计算出标本中各待测物的浓度。05仪器和试剂1.仪器及设备1)液相色谱质谱联用仪(上海爱博才思分析仪器贸易有限公司，JasperHPLC-SCIEXTripleQuad4500MD)。2)氮气发生器[毕克气体仪器贸易(上海)有限公司，Genius1024]。3)离心机(杭州奥盛仪器有限公司，LEGENDMicro17R)。4)超纯水机[威立雅水处理技术(上海)有限公司，PMRELABChorus1]。2.试剂(1)试剂盒主要成分试剂盒主要成分见表8.5.1,校准品和质控品的靶值见各批次赋值证书。同一组分不同批号的试剂盒不能混用。该校准品中VA溯源至Cerilliant维生素A标准溶液，25(OH)VD2溯源至Cerilliant25-羟基维生素D₂标准溶液、25(OH)VD3溯源至Cerilliant25-羟基维生素D₃标准溶液，VE溯源至Sigma维生素E,VK₁溯源至中国食品药品检定研究院维生素K₁。(2)储存条件及有效期1)试剂盒在-30~-15℃未开封状态下可保存24个月。2)生产日期和使用期限见产品标签。3)试剂开瓶后应避光保存，在-30~-15℃可保存15天。4)校准品和质控品经复溶后在-30~-15℃保存，15天内可反复冻融3次。06标本要求1)抽取静脉血5.0mL于惰性分离胶促凝真空采血管(黄盖)中，并于2小时内分离出血清。2)不合格标本遵循“不合格标本处理程序”处理，并在“iLab管理平台”的电子记录模块下填写《不合格样本及处理情况登记表》。3)标本在室温条件(20~30℃)可保存24小时；在冷藏条件(2~8℃)可保存7天；在冷冻条件(-30~-15℃)可保存3个月；在超低温条件(-95~-65℃)可保存6个月。标本至多可反复冻融3次。07检验程序1.前处理程序(1)校准品和质控品的处理实验操作人在室温下精确量取180μL超纯水到FV-校准品或FV-质控品试剂瓶中，漩涡混匀5分钟至冻干粉完全溶解后备用(如瓶塞上存在粉末，请加塞后上下颠倒数次至冻干粉溶解),瓶塞不得混用。(2)标本的处理1)精密移取50μL标本(校准品、质控品、血清标本)于96孔深孔板中.2)精密加入250μLFV-内标液。3)置于96孔板振荡器，以1000rpm涡旋10分钟。4)在4000rpm离心10分钟。5)取上层清液至96孔低吸附板并覆膜待测。2.标本检测程序(1)液相色谱一串联质谱仪参数设置仪器检测参数设置见脂溶性维生素检测试剂盒(液相色谱-串联质谱法)(浙械注准20222401020)说明书。仪器操作程序见LHJY-SOP-0ZP3001《SCIEXTripleQuad4500MD液相色谱质谱联用仪操作程序》。(2)系统适用性测试检验人员取FV-系统适用性溶液，按照LHJY-SOP-0ZP3001《SCIEXTripleQuad4500MD液相色谱质谱联用仪操作程序》编辑“batch”,并至少检测FV-系统适用性溶液三次，3次进样结果中待测物和内标的保留时间的偏差应在±0.2分钟范围内，待测物与其内标的峰面积比值的变异系数应≤15.0%。如FV-系统适用性溶液测试结果不满足上述要求，可对仪器进行适当维护，并重复进样3针。(3)标本检测检验人员将7.1.2中处理好的样品板放入4500MD的标本仓内，按照LHJY-SOP-0ZP3001《SCIEXTripleQuad4500MD液相色谱质谱联用仪操作程序》进行标本检测操作。08性能参数1.分析测量范围1)维生素A线性范围为40.0~2000.0ng/mL,线性相关系数r≥0.990,当标本中的维生素A低于40.0ng/mL时报告为<40.0ng/mL,高于2000.0ng/mL时报告>2000.0ng/mL。2)25-羟基维生素D₂线性范围为2.00~100.00ng/mL,线性相关系数r≥0.990,标本中的25-羟基维生素D₂低于2.00ng/mL时报告为<2.00ng/mL,高于100.00ng/mL时报告>100.00ng/mL;25-羟基维生素D₃线性范围为3.00~150.00ng/mL,线性相关系数r≥0.990,当标本中的25-羟基维生素D₃低于3.00ng/mL时报告为<3.00ng/mL,高于150.00ng/mL时报告>150.00ng/mL。25-羟基维生素D的浓度即25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3浓度之和。3)维生素E线性范围为500~25000ng/mL,线性相关系数r≥0.990,当标本中的维生素E低于500ng/mL时报告为<500ng/mL,高于25000ng/mL时报告>25000ng/mL。4)维生素K₁线性范围在0.100~5.000ng/mL,线性相关系数r≥0.990,当标本中的维生素K₁低于0.100ng/mL时报告为<0.100ng/mL,高于5.000ng/mL时报告>5.000ng/mL。2.精密度1)质控品批内不精密度应不大于1/4TEa。2)实验室内精密度应不大于1/3TEa。3.生物参考区间各待测物的生物参考区间及来源见表8.5.2。09检验结果的解释1.维生素A1)维生素A升高可导致维生素A过剩症、肾功能不全、甲状腺功能减退症。2)维生素A降低可导致维生素A缺乏症(夜盲症、干眼症、角膜软化病)、脂类吸收不良综合征、毛囊角化增生症、锌缺乏症、肝损害、阻塞性黄疸、甲状腺功能亢进症等。2.维生素D1)儿童期维生素D降低可导致营养缺乏性佝偻病。2)成人期维生素D降低可导致骨软化症。3)老年期维生素D降低可导致骨质疏松。3.维生素E1)维生素E升高可导致出血性脑卒中。2)儿童期维生素E降低可导致维生素E缺乏病。4.维生素K1)维生素K升高可能导致溶血性贫血、新生儿高胆红素血症。2)维生素K降低可能导致婴儿凝血障碍性疾病、孕妇出血难止、获得性凝血酶原减低症，还可能与肝脏疾病的发生相关。10安全防护措施血液样品在离心过程中