复件 常用培养基的制备消毒与灭菌

微生物学实验吉林大学生物基础实验教学中心常用培养基的制备、灭菌与消毒目的要求培养基分类消毒与灭菌结果检查实验目的：1.了解培养基的配制原理

2.掌握配制培养基的一般方法和步骤

培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质原则：目的明确;营养协调;控制PH、渗透压等条件;经济节约方法：生态模拟；查阅文献;精心设计;试验比较步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查称量熔化调pH值分装与加塞包扎(1)包扎(2)灭菌无菌检查培养基种类:碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐、水一、按成份的不同划分天然培养基、合成培养基、半合成培养基二、按培养基的物理状态划分固体培养基、液体培养基、半固体培养基三、按培养基用途划分基础培养基、加富培养基、鉴别培养基、选择培养基

一级种培养基:

一级种又称母种，其培养基一般用试管作为容器，所以又称试管斜面培养基，这类培养基又常用于菌种分离提纯，扩大，转管及菌种保存等。二、三级种培养基:

二、三级种培养基通常采用天然营养物质，如秸秆、棉籽壳、蔗渣等农作物废物，加适量的无机盐类等制成固体培养基。牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15～20g，水1000mL，pH7.0～7.2(后调)高氏1号培养基高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下：可溶性淀粉20g，KNO31g，NaCl0.5g，K2HPO4·3H2O0.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，琼脂15～20g，水1000mL，pH7.4～7.6。

查氏合成培养基查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的培养基,其配方如下：NaNO33g,K2HPO41g,KCl0.5g,MgSO4.7H2O0.5g,FeSO40.01g,蔗糖30g,琼脂15～20g,H2O1000ml,pH自然麦芽汁培养基用来培养酵母菌,干麦芽粉加4倍水,在50-60℃保温糖化3-4小时，用碘液试验检查至糖化完全为止,调整糖液浓度,煮沸后，过滤，调pH为6.0。BCG-MSG培养基鉴定几种常见的丝状真菌

新鲜平皿培养基搁置斜面

消毒与灭菌：消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。方法：物理的方法：加热、过滤、辐射化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。

加热法：干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。3、注意事项：

1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；

2）温度控制在<180°；

3）物品不能太挤；

4）温度降至70°时才开箱门。

湿热法：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。高压蒸汽灭菌法：1、设备：高压灭菌锅2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。4、注意事项：

1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。

在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表2

常压蒸汽灭菌：

对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。

煮沸灭菌法：适用注射器和解剖器皿，时间10－15min，

超高温杀菌

135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。优点：保持食品价值和营养成分。

过滤除菌：

原理：介质在有压力时阻隔微生物。

适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。

设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。

优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。

注意事项：1、压力适当；

2、无菌条件下进行；

3、防止渗透现象。

辐射灭菌：

原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，以265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。

缺点：穿透力不大。距照射物<1.2m为宜。应用：无菌室，医院。

注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用。

化学药品灭菌：

原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。杀菌剂如重金属离子；

抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以及微生物所处的环境有关。常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸

福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等常用消毒剂种类

类别作用机制常用种类酚类蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸醇类蛋白变性乙醇氧化剂氧化、蛋白沉淀高锰酸甲重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞氧化剂氧化、蛋白沉淀过氧乙酸、碘酒表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭染料干扰氧化、抑制繁殖龙胆紫各种消毒剂的应用种类使用浓度用途石炭酸3%~5%地面、器具表面、皮肤消毒乙醇3%~5%皮肤、体温计消毒高锰酸甲3%~5%皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒红汞3%~5%皮肤、粘膜、小创伤消毒硫柳汞3%~5%皮肤消毒、手术部位消毒过氧乙酸3%~5%塑料、玻璃器材消毒碘酒3%~5%皮肤消毒新洁而灭3%~5%手术洗手、浸泡手术器械龙胆紫3%~5%浅表创伤消毒消毒与灭菌效果的检查：

消毒与灭菌效果好坏，直接关系到菌种成品率的高低。因此，除了要严格把好消毒、灭菌关外，同时还要严格执行检验制度，两者缺一不可。

培养基灭菌效果检验：

１、试管母种培养基经灭菌后，从高压灭菌锅中不同部位随机抽取５支，放置28±2℃恒温箱中培养5-7天,如无霉菌、细菌、酵母等杂菌出现，则认为灭菌彻底。２、原种及栽培种培养基经灭菌后，从灭菌锅中上、中、下三层进行取样，每层对角线随机取样５瓶（袋），放置28-30℃恒温培养箱中培养5-7天，检查是否有霉菌菌落生成。如检查是否有细菌没有杀死，必须使用细菌培养基进行检测。上述抽取的样品，分别在无菌下取出少量培养基接入细菌培养基，然后在37℃培养2