（正式版）DB4505∕T 0009-2023 《岛礁石斑鱼资源养护技术规范》

4505TechnicalspecificationforrI 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 4 5A.1抽样 5 5 5 5A.5鱼类物种鉴定 5 8本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。广西精工海洋科技有限公司、湛江市东海岛东方实业有1岛礁石斑鱼资源养护技术规范GB/T12763.9海洋调查规范第9部分：海洋生态调GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分：SC/T9401.4水生生物增殖放流技术规程第SC/T9401.6水生生物增殖放流技术规程第6部SC/T9401.7水生生物增殖放SC/T9401.11水生生物增殖放流技术规程第11部分：投放SC/T9403.5海洋渔业资源调查规范第5部分：SC/T9405.5岛礁水域生物资源调查评估技术规范第5部分：礁栖SC/T9405.7岛礁水域生物资源调查评估技术规范第7部分SC/T9417.4人工鱼礁资源养护效果评价技术规范SC/T9417.5人工鱼礁资源养护效果评价技术规范礁栖石斑鱼reef-inhabitingg生物资源养护biologicalresourceconserv24.1养护礁栖石斑鱼资源的岛礁海域应符合国家和地方的国土空间规划、旅游规划、渔业发展规划和5.1按照SC/T9405.5规定的方法对拟进行资源养护海域的石斑鱼生物量进行调查和评估。5.2按照SC/T9417.5规定的方法和内容对拟进行资源养护海域的底质和水文状况等环境要素进行调根据目标海域的功能定位和海域环境，选择目标海区及其周边海区现有或历史上存在的石斑鱼种类为养护目标种类。可选择斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)、棕点石斑鱼(E.fuscoguttatus)3培育苗种的亲鱼应捕自天然海区或是原种场保种的原生种繁殖的F1代，不得使用近亲繁殖亲鱼的6.3.3投放方法8.1环境要素按照SC/T9405.7规定的方法对各类作业的努力量、渔4应定期巡查石斑鱼资源养护海域，防止非法捕捞养护区的石5积物处取1L海水，重复取样3次，1L去离子水作为对照。A.3保藏A.5鱼类物种鉴定A.5.1用于鱼类鉴定的条形码用于鱼类属、种鉴定的条形码为12SrRNA基因，片段长度为163bp～18MiFish-U-F：5’-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNNGTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3’MiFish-U-R：5’-GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTNNNNNNCATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3’在上述两条引物中，前面的33个和34个核苷酸（nt）部分为高通量测序引物的结合位点，随后的6个随机引物（NNNNNN，如AAGGTT）用于促进测序平台流动池（flowcell）DNA簇的分离，最后的21个和5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAXXXXXXXXACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT-3’在上述两条引物中，8个连续X碱基代表Illumila测序技术通用的Index序列，可以用于区分不同样连续X碱基后面的3’端序列是Illumila测6延伸15s，共30个循环；72℃再延伸5min。将第一轮PCR产物稀释10倍作为第二轮PCR模板，PCR体系的A.5.5测序A.5.6石斑鱼属、种鉴定A.5.6.1序列聚类采用生物信息学软件FastQC、Cutadapt和USEARCH，对原始测序数据质量进行分析并去除低质量数据。采用QIIME2分析软件，在97％的序列相似水平下，对高质量的eDNA测序序列数据进行聚类，去A.5.6.2物种注释通过序列比对方法，将所有的分类单元数据与已知物种的核糖体RNA序列数据库进行序列比对，从A.5.6.3分类鉴定A.5.7特定石斑鱼属、种的相对丰度计算A.5.7.1特定石斑鱼属的相对丰度为特定石斑鱼属序列条数占全部鱼类序列条数的百分比，计算见公=(⁄)×100%······································Rg——特定石斑鱼属相对丰度，用％表示；Tn——全部鱼类序列条数，单位为条。7A.5.7.2特定石斑鱼种的相对丰度为特定石斑鱼种序列条数占全部鱼类序列条数的百分比，计算见公=(⁄)×100%·····························································(A.2)Rs——特定石斑鱼种相对丰度，用％表示