（正式版）DB4505∕T 0010-2023 《岛礁石斑鱼生态增殖技术规范》

4505TechnicalspecificationforecologicI 鼎II 7 7 7 7 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。广西精工海洋科技有限公司、湛江市东海岛东方实业有1岛礁石斑鱼生态增殖技术规范GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分：GB/T20361水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法GB31656.13食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质GB/T34748.7水产种质资源基因组DNA的微卫星分析第7部分：NY5070无公害食品水产品中渔药残留限量农业部公告第1125号一、二、三类动物疫病病种目录（水生动生态增殖ecologicalenhanc适应性驯化adaptivedome2b)溶解氧≥5mg/L,盐度22～35,水温22℃~33℃。 定的方法进行，培育期间应做好培育过程的采样分析和观测数据记录，主要包括海水理化因子(水温、溶解氧、pH、盐度、氨氮和有机质等)、投喂的饲料类型(或活饵种类)、饲料粒径(饲料号数)、苗6.2规格3规格合格率≥90%以上，死亡个体比例、伤残其它到无公害食品类标准4鱼回捕占比率，见公式(1):5Ni——第i种类石斑鱼回捕抽样样本中标志石斑鱼的个体数，单位为尾；Pi——第i种类标志石斑鱼在该种类放流石斑鱼中的占比，用％表示；T优良差RMH≥20%＜5%按照附录B的方法对放流海域的环境DNA进行调查和分析，鉴定放流海域存在的石斑鱼种类和相对表3基于微卫星分子标记的石斑鱼生态优良差RH≥20%＜5%斑鱼的活动和生长情况，为进一步优化石斑鱼生态增殖技术6pH7积物处取1L海水，重复取样3次，1L去离子水作为对照。用于鱼类属、种鉴定的条形码为12SrRNA基因，片段长度为163bp～18MiFish-U-F：5’-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNNGTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3’MiFish-U-R：5’-GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTNNNNNNCATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3’在上述两条引物中，前面的33个和34个核苷酸（nt）部分为高通量测序引物的结合位点，随后的6个随机引物（NNNNNN，如AAGGTT）用于促进测序平台流动池（flowcell）DNA簇的分离，最后的21个和5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAXXXXXXXXACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT-3’在上述两条引物中，8个连续X碱基代表Illumila测序技术通用的Index序列，可以用于区分不同样连续X碱基后面的3’端序列是Illumila测8延伸15s，共30个循环；72℃再延伸5min。将第一轮PCR产物稀释10倍作为第二轮PCR模板，PCR体系的采用生物信息学软件FastQC、Cutadapt和USEARCH，对原始测序数据质量进行分析并去除低质量数据。采用QIIME2分析软件，在97％的序列相似水平下，对高质量的eDNA测序序列数据进行聚类，去通过序列比对方法，将所有的分类单元数据与已知物种的核糖体RNA序列数据库进行序列比对，从B.5.7.1特定石斑鱼属的相对丰度为特定石斑鱼属序列条数占全部鱼类序列条数的百分比，计算见公=(⁄)×100%······································Rg——特定石斑鱼属相对丰度，用％表示；Tn——全部鱼类序列条数，单位为条。9B.5.7.2特定石斑鱼种的相对丰度为特定石斑鱼种序列条数占全部鱼类序列条数的百分比，计算见公=(⁄)×100%·····························································(A.2)Rs——特定石斑鱼种相对丰度，用％表示；基于微卫星分子标记的石斑鱼增殖放流群体回捕占对于用于增殖放流的不同种类石斑鱼，增殖放流前分别采集原生种群和增殖放流苗种群体样本各50尾～60尾，回捕时分别从每种石斑鱼的回捕样本中随机抽采用常规的海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取石斑鱼样本DNA，DNA浓度≥50ng/μL，分别筛选各增殖放流石斑鱼种类的高度多态性微卫星分子标记用于遗传多样性分析。按照GB/T34748.7规定的方法进行分析，对所有增殖放流种类的石苗种群体和原生种群间的遗传距离，如某一种类石斑鱼回捕抽样样本与该种类增殖放流苗种群体具有相似的分子遗传特征，且聚为一类时，可确定其为该种类增殖放流群体的回捕个统计每种石斑鱼回捕抽样样本中增殖放流群体的回捕个体数，计算石斑鱼增殖放流群体回捕占比）：=∑"∑!#×100%·················································(C.1)RH——石斑鱼增殖放流群体回捕占比率，用％表示；Hi——第i种类增殖放流石斑鱼回捕抽样样本中增殖放流群体的回捕个体数，单位为尾；Ci——第i种类增殖放流石斑鱼回捕抽样样本的总个体数，Yamanaka