CN112312970B 用双特异性抗CD3xMUC16抗体和抗PD-1抗体治疗癌症的方法 （瑞泽恩制药公司）

2020.12.16PCT/US2019/0381632019.06.20WO2019/246356EN2019.12.26WO2017197259A1,2017.11.16WO2018058003A1,2018.03.29TRANSLATIONALMEDICINE.2019,1-14.用双特异性抗CD3xMUC16抗体和抗PD-1抗体本发明的方法包含向有需要的个体施用治疗有效量的特异性结合到程序性死亡1(PD-1)受体的抗体或其抗原结合片段以及治疗有效量的特异性结合粘蛋白16(MUC16)和CD3的双特异性21.抗PD-1抗体或其抗原结合片段与双特异性抗MUC16×CD3抗体的组合在制备用于治(ii)第二抗原结合臂包含三个重链互补决定区B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3和三个轻NOs:26,27,28,11,12和13的氨基酸序列组2.根据权利要求1所述的用途，其中所述个体对先前疗法具有抗性或反应不充分或在3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述双4.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述双特异性抗MU5.根据权利要求4所述的用途，其中所述双特异性抗MUC16×CD3抗体的第二抗原结合臂包含由SEQIDNO:3的氨基酸序列组成的HCVR，和由SEQIDNO:2的氨基酸序列组成的6.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述双特异性7.根据权利要求6所述的用途，其中所述双特异性抗MUC16×CD3抗体的第二抗原结合臂包含由SEQIDNO:7的氨基酸序列组成的HCVR，和由SEQIDNO:2的氨基酸序列组成的8.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含由SEQ9.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述双特异性抗MUC16×10.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述双特异性抗MUC16×CD3抗体包含由SEQ311.根据权利要求1或2所述的用途，其中抗PD-1抗体包含由SEQIDNO:41的氨基酸序12.根据权利要求1或2所述的用途，其中抗PD-1抗体或抗原结合片段和双特异性抗13.根据权利要求1或2所述的用途，其中抗PD-1抗体或抗原结合片段和双特异性抗4[0002]本申请以引用的方式并有以计算机可读形式作为文件10469WO01-Sequence.txt异性结合到程序性死亡1(PD-1)受体的抗体以及结合到粘蛋白16(MUC16)和CD3的双特异性抗原125或CA-125，其为在卵巢癌中高度表达的单一跨膜域高度糖基化整合膜糖蛋白。MUC16由以下三个主要结构域组成：细胞外N末端域、穿插有海胆精子、肠激酶和集聚蛋白 (SEA)域的大串联重复域以及包含跨膜区的区段和短细胞质尾的羧基末端域。蛋已经探究使用抗MUC16抗体治疗卵巢癌的方法。奥戈伏单抗(Oregovomab)和阿巴伏单抗 (abgovomab)为已经具有有限成效的抗MUC16抗体。(Felder,同上,Das,S.和Batra,[0005]CD3为于T细胞受体复合物(TCR)相关T细胞上表达的均二聚或异二聚抗原并且为T肽负载型MHC分子进行的TCR接合的方式引起T细胞活化。因此，已经出于治疗目的提议抗抗体参与使T细胞免疫反应靶向表达标靶抗原的[0006]在肿瘤微环境中进行信号传导的程序性死亡-1(PD-1)受体在使得肿瘤细胞逃脱期数据已经证实PD-1阻断在患有侵袭性NHL和霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin'slymphoma)的患Francisco,Calif.)的第56届美国血液学会年会暨博览会(56thASHAnnualMeeting5的患者而言肿瘤为上皮内CD8+T淋巴细胞浸润阳性的卵巢癌患者具有显著更好的总体和阻断已经在卵巢癌中显示一些益处；在早期临床试验中PD-1阻断单一疗法产生约10％到胞功能的试剂(例如PD-1抑制剂，例如抗PD-1抗体)以及针对靶抗原的试剂(双特异性抗效量的特异性结合到程序性死亡1(PD-1)的抗体或其抗原结合片段以及治疗有效量的特异用一次或多次剂量的治疗有效量的特异性结合到PD-1的抗体或其抗原结合片段以及一次或多次剂量的治疗有效量的特异性结合到MUC16和CD需要的个体施用(a)治疗有效量的特异性结合程序性死亡1(PD-1)的抗体或其抗原结合片6酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:[0016]在一些实施例中，双特异性抗体的第一抗原结合臂包含有包含SEQIDNO:1基酸序列的重链可变区(A-HCVR)的三个重链CDR(A-HCDR1、A-HCDR2和A-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的三个轻链CDR(A-LCDR1、A-LCDR2和A-基酸序列。在一些情况下，A-HCVR包含SEQIDNO:1的氨基酸序列并且ANO:2的氨基酸序列。HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-LCVR)的三个轻链CDR7含SEQIDNO:2的氨基酸序列。[0018]在一些实施例中，双特异性抗体的第二抗原结合臂包含有包含SEQIDNO:3基酸序列的重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-LCVR)的三个轻链CDR(B-LCDR1、B-LCDR2和B-[0019]在一些实施例中，双特异性抗体的第二抗原结合臂包含有包含SEQIDNO:4基酸序列的重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-LCVR)的三个轻链CDR(B-LCDR1、B-LCDR2和B-[0020]在一些实施例中，双特异性抗体的第二抗原结合臂包含有包含SEQIDNO:5基酸序列的重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-LCVR)的三个轻链CDR(B-LCDR1、B-LCDR2和B-[0021]在一些实施例中，双特异性抗体的第二抗原结合臂包含有包含SEQIDNO:6基酸序列的重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-LCVR)的三个轻链CDR(B-LCDR1、B-LCDR2和B-[0022]在一些实施例中，双特异性抗体的第二抗原结合臂包含有包含SEQIDNO:7基酸序列的重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-LCVR)的三个轻链CDR(B-LCDR1、B-LCDR2和B-有需要的个体施用(a)治疗有效量的特异性结合程序性死亡1(PD-1)的抗体或其抗原结合包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)的三个轻链互补决SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的三个轻链CDR(A-LCDR1、A-LCDR2和A-重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的8且A-LCDR3包含SEQIDNO:13的氨基酸序列；并且(c)B-HCDR1包含SEQIDNO:14的氨基酸B-LCDR3包含SEQIDNO:13的氨基酸序SEQIDNO:33的氨基酸序列，并且LCVR包含SEQIDNO:34的氨SEQIDNO:1的氨基酸序列并且A-LCVR包含SEQIDNO:2的氨基酸序列；并且(c)B-HCVR包性抗体的第二抗原结合臂包含有包含SEQIDNO:31的氨基酸序列的重链和包含SEQID有需要的个体施用(a)治疗有效量的特异性结合程序性死亡1(PD-1)的抗体或其抗原结合包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)的三个轻链互补决SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的三个轻链CDR(A-LCDR1、A-LCDR2和A-重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的且A-LCDR3包含SEQIDNO:13的氨基酸序列；并且(c)B-HCDR1包含SEQIDNO:26的氨基酸B-LCDR3包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。9IDNO:7的氨基酸序列并且B-LCVR包性抗体的第二抗原结合臂包含有包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的重链和包含SEQID性并不显著地受浓度高达10kU/ml的循环CA-125阻碍。在上文或本文讨论的方法中的任一种的各个实施例中，个体已经被诊断患有卵巢癌并且个体具有高达10kU/ml的CA-125循环常CA-125血清含量上限的2倍的CA-125血清含量。上文或本文讨论的方法的一些实施例包患者中的基线血清CA-125含量或总患者群中的基线血清CA-125含量进行比较来估算治疗[0036](A)一种包含特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂的双特异性抗体的用途，其用于制造用以与特异性结合程序性死亡1(PD-1)的抗体或其抗原结合片段组合来治疗有需要的个体的肿瘤或抑制肿瘤生长制造用以与包含特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂的双特异性抗体组合来治疗有需要的个体的肿[0038](C)一种包含特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂的双特异性抗体的用途，其用于制造用以与特异性结合程序性死亡1(PD-1)的抗体或抗体或其抗原结合片段包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区臂包含有包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的重链可变区(A-HCVR)的三个重链CDR(A-HCDR1、A-HCDR2和A-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的三个轻链SEQIDNO:3的氨基酸序列的重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-LCVR)的三个轻链CDR(B-LCDR1、制造用以与包含特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂抗体或其抗原结合片段包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区臂包含有包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的重链可变区(A-HCVR)的三个重链CDR(A-HCDR1、A-HCDR2和A-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的三个轻链SEQIDNO:3的氨基酸序列的重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-LCVR)的三个轻链CDR(B-LCDR1、[0040](E)一种包含特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂的双特异性抗体的用途，其用于制造用以与特异性结合程序性死亡1(PD-1)的抗体或抗体或其抗原结合片段包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区臂包含有包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的重链可变区(A-HCVR)的三个重链CDR(A-HCDR1、A-HCDR2和A-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的三个轻链SEQIDNO:7的氨基酸序列的重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-LCVR)的三个轻链CDR(B-LCDR1、制造用以与包含特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂抗体或其抗原结合片段包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区臂包含有包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的重链可变区(A-HCVR)的三个重链CDR(A-HCDR1、A-HCDR2和A-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的三个轻链SEQIDNO:7的氨基酸序列的重链可变区(B-HCVR)的三个重链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-LCVR)的三个轻链CDR(B-LCDR1、[0042](G)一种包含特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂的双特异性抗体，其用于与特异性结合程序性死亡1(PD-1)的抗体或其抗原结合片段特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂的双特异性抗体[0044](I)一种包含特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂的双特异性抗体，其用于与特异性结合程序性死亡1(PD-1)的抗体或其抗原结合片段包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)的三个轻链互补决1的氨基酸序列的重链可变区(A-HCVR)的三个重链CDR(A-HCDR1、A-HCDR2和A-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的三个轻链CDR(A-LCDR1、A-LCDR2和特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂的双特异性抗体包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)的三个轻链互补决1的氨基酸序列的重链可变区(A-HCVR)的三个重链CDR(A-HCDR1、A-HCDR2和A-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的三个轻链CDR(A-LCDR1、A-LCDR2和[0046](K)一种包含特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂的双特异性抗体，其用于与特异性结合程序性死亡1(PD-1)的抗体或其抗原结合片段包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)的三个轻链互补决1的氨基酸序列的重链可变区(A-HCVR)的三个重链CDR(A-HCDR1、A-HCDR2和A-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的三个轻链CDR(A-LCDR1、A-LCDR2和特异性结合MUC16的第一抗原结合臂和特异性结合CD3的第二抗原结合臂的双特异性抗体包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)的三个轻链互补决1的氨基酸序列的重链可变区(A‑HCVR)的三个重链CDR(A‑HCDR1、A‑HCDR2和A‑HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A‑LCVR)的三个轻链CDR(A‑LCDR1、A‑LCDR2和[0049]图1说明如通过ELISA所测定(描述于本文实例2中)的各种浓度的抗MUC16克隆3A5和BSMUC16/CD3‑001与CA125的结合。与结合到MUC16的重复区的抗MUC16克隆3A5相比，BSMUC16/CD3‑001和其MUC16亲本抗体在所有测试浓度下皆展现出明显减结合对照+抗PD‑1(▲)和BSMUC16/CD3‑005+抗PD‑1(■)治疗的小鼠组(每组5个)(如本文实例3中所描述)的平均肿瘤生长曲线。抗PD‑1抗体与抗CD3xMUC16双特异性抗体的组合协同[0051]图3说明T细胞与BSMUC16/CD3‑001一起进行的培育对PD‑1阳性T细胞百分比的影任何具体值皆可以与上文或本文中讨论的另一个相关值组合以叙述具有表示范围的上端[0054]虽然类似或等效于本文所描述的方法和材料的任何方法和材料皆可以用于本发量的特异性结合PD‑1的抗体或其抗原结合片段以及治疗有效量的双特异性抗MUC16和CD3或已经被诊断患有癌症(包括卵巢癌)并且需要癌症的一种或多种症状或适应症或癌症治例来说，人类个体可能被诊断患有原发性或转移性肿瘤和/或患有一种或多种症状或适应于铂的化学治疗剂(例如顺铂(cisplatin))或紫杉醇化合物(例如多西他赛(docetaxel))物标志物(例如程序性死亡配体1(PD-L1)、CA125、人类附睾蛋白4(HE4)和/或癌胚抗原疗有效量的抗PD-1抗体以及双特异性抗MUC1PD-1抗体与一次或多次剂量的治疗有效量的双特异性抗MUC16/抗CD3抗体组合施用，其中有需要的个体施用一次或多次剂量的抗PD-1抗体以及一次或多次剂量的双特异性抗后施用治疗有效量的双特异性抗MUC16/抗CD3抗体，其中抗PD-1抗体可以在双特异性抗体[0065]在某些实施例中，本发明的方法包含向患有卵巢癌的个体施用治疗有效量的抗PD-1抗体和治疗有效量的双特异性抗CD3xMUC16抗体。在具体实施例中，卵巢癌为浆液性向在利用例如化学疗法的先前疗法之后已经复发的个体施用抗PD-1抗体以及双特异性抗[0068]在某些实施例中，本发明的方法用于治疗患有MRD阳性疾病的患者。微小残留病(MRD)是指在治疗期间或之后留存于患者中的少量癌细胞，其中患者可能显示或可能不显括用于在MRD测试时抑制且/或消除患者中的残留癌细胞的方法。MRD可以根据所属领域中向有需要的个体施用抗PD-1抗体以及双特异性抗MUC16异性抗MUC16/抗CD3抗体中的每一种以及第三治疗剂。第三治疗剂可以为选自由以下组成本发明包括包含向使用背景抗癌治疗方案的个体施用治疗有效量的抗PD-1抗体以及双特异性抗MUC16/抗CD3抗体的方法。背景抗癌治疗方案可以包含施用例如化学治疗剂或放射的过程。可以在背景抗癌治疗方案基础上添加抗PD-1抗体以及双特异性抗MUC16/抗CD3抗在某些实施例中，相比于未被治疗的个体或施用有作为单一疗法的任一种抗体的个体来治疗的个体或施用有作为单一疗法的任一种抗体的个体来说，存活持续时间延长超过15例中，抗PD-1抗体以及双特异性抗MUC16/抗CD3抗体施用增强个体中的反应且延长反应持卵巢癌的个体施用抗PD-1抗体和双特异性抗MUC16/抗CD3抗体引起肿瘤细胞/病变(包括新超出单独施用时两种药剂的组合作用的协同抗肿瘤作用。于施用有作为单一疗法的双特异性抗体的患者来说，有害副作用(例如增加的细胞因子释CH抗IL-4R抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人类胚系序列一致或可以经天然或人工修蛋白水解消化或涉及操纵和表达编码抗体可变域和任选恒定域的DNA的重组基因工程改造基酸组成并且将一般包含与一个或多个构架序列相邻或同框的至少一个CDR。在具有与VLLL所述氨基酸在单一多肽分子中的相邻可变域和/或恒定域之间产生柔性或半柔性连接。此缔合(例如通过一个或多个二硫键)的具有以上列出的任何可变域和恒定域配置的均二聚本发明的情形下的示范性双特异性格式包括但不限于例如基于scFv或双功能抗体双特异用肽/核酸偶联来构筑，例如其中具有正交化学反应性的非天然氨基酸用于生成位点特异仍然可以包括不由人类胚系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过活体外无规或位点特异性诱变或通过活体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR并且确切地说CDR3中如些实施例中，所述重组人类抗体经受活体外诱变(或当使用对于人类Ig序列来说转基因的类胚系VH和VL序列并且与其相关、但可以不天然地存在于活体内人类抗体胚系组库内的序国专利公开第20150203579号中所阐述的抗PD-1抗体的任何氨基酸序列的重链可变区方法的情形下的抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含有包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR)和包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的轻链可原结合片段包含有包含SEQIDNO:33的HCVR和包含SEQIDNO:34的LCVR。在某些实施例中，本发明的方法包含抗PD-1抗体的使用，其中抗体包含有包含SEQID含有包含SEQIDNO:41的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:42的氨基酸序列的轻链的示范性抗体为称为REGN2810(也称为赛咪单抗(cemiplimab))的全人类抗PD-1抗体。根据某些示范性实施例，本发明的方法包含REGN2810或其生物同等物的使用。如本文所用，术语验条件下以单次剂量或多次剂量施用时吸收速率和/或程度与REGN2810的吸收速率和/或程度不显示显著差异的药物同等物或药物替代物。在本发明的情形下，所述术语是指结合义的差异。[0083]可用于本发明方法的情形下的其它抗PD-1抗体包括例如所属领域中提及和已知MEDI0608(美国专利第8,609,089号)、皮立珠单抗(pidilizumab)(美国专利第8,686,119779,105号或第8,900,587号中所阐述的任何抗P[0084]用于本发明方法的情形下的抗PD-1抗体可以具有pH依赖性结合特征。举例来说，用于本发明方法中的抗PD-1抗体可能展现相比于中性pH来说在酸性pH下减弱的与PD-1的pH下抗体与PD-1的结合KD值与在中性pH下抗体与PD-1的结合KD值的比率来说加以表述(或[0086]具有pH依赖性结合特征的抗体可以例如通过筛选相比于中性pH来说在酸性pH下域(例如在CDR内)的一个或多个氨基酸获得相对于中性pH来说在酸性pH下抗原结合减弱的[0088]根据本发明的某些示范性实施例，方法包含施用治疗有效量的特异性结合CD3和MUC16的双特异性抗体。所述抗体在本文中可以被称为例如“抗MUC16/抗CD3”或“抗并且第二抗原结合域特异性结合第二相异抗原(例如CD3)。双特异性抗体的每一个抗原结的部分的两个Fc域。第一多聚化域和第二多聚化域可以是相同IgG同型，例如IgG1/IgG1、IgG2/IgG2、IgG4/IgG4。或者，第一多聚化域和第二多聚化域可以是不同IgG同型，例如[0092]任何双特异性抗体格式或技术皆可以用于制造本发明的双特异性抗原结合分举例来说，具有第一抗原结合特异性的抗体或其片段可以功能性地连接(例如通过化学偶情形下的具体示范性双特异性格式包括但不限于例如基于scFv或双功能抗体双特异性格作用Fab(DAF)-IgG和Mab2双特异性格式(关于前述格式的述评，参见例如Klein等人2012,[0093]在本发明的双特异性抗体的情形下，相比于Fc域的野生H95R修饰(根据IMGT外显子编号；根据EU可以包括于本文所阐述的任何抗原结合分子中的嵌合Fc域的特定实例包含从N末端到C末所阐述的任何抗原结合分子中的嵌合Fc域的另一个实例包含从N末端到C末端：[IgG1CH1]-[IgG1上铰链]-[IgG2下铰链]-[IgG4原结合分子中的嵌合Fc域的这些和其它实例描述于美国专利公开第20140243504号中，所[0096]根据本发明的某些示范性实施例，双特异性抗MUC16/抗CD3抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(A-HCVR和B-HCVR)、轻链可变区(A-LCVR和B-LCVR)和/或互补决定区(CDR)，所述区包含如美国专利公开第20180112001号中所阐述的双特异性抗MUC16/抗CD3NO:1的氨基酸序列的重链可变区(A-HCVR)的重链互补决定区(A-HCDR1、A-HCDR2和A-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(A-LCVR)的轻链互补决定区(A-链CDR(B-HCDR1、B-HCDR2和B-HCDR3)和包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的轻链可变区(B-氨基酸序列；B-LCDR3包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在又其它实施例中，双特异性抗包含MUC16结合臂和CD3结合臂，所述MUC16结合臂包含有包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的轻链，所述CD3结合臂包含有包含SEQIDNO:31的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的轻链。在某些示范性实施例含SEQIDNO:29的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的轻链，所述CD3结合臂包含有包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的重链和包含SEQIDNO:30的氨基酸序列[0097]在某些实施例中，本发明的双特异性抗CD3xMUC16抗体的抗肿瘤活性大体上不受量CA125将不显著地干扰本发明的双特异性抗体的抗[0098]可以用于本发明方法的情形下的其它双特异性抗MUC16/抗CD3抗体包括例如美国[0100]根据某些实施例，本发明的方法包含向个体施用抗MUC16/抗CD3双特异性抗体以特异性抗MUC16/抗CD3抗体少于5分钟内(之前、之后或同时)以单独剂量形式施用至个体，或以包含抗PD-1抗体和双特异性抗MUC16/抗CD3抗体的单一组合剂量配制物形式施用至个炭疽菌素二酮(dihydroxyanthracindione)、米托蒽醌(mitoxantrone)、光神霉素(mithramycin)、放线菌素D(actinomycinD)、1-去氢睪固酮、糖皮质激素、普鲁卡因比珠单抗(ranibizumab))；或VEGF受体的小分子激酶抑制剂(例如舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)或帕佐泮尼(pazopanib))]；Ang2抑制剂(例如，内斯瓦库单抗[0103]在某些实施例中，本发明的方法包含施用抗PD-1抗体和抗MUC16/抗CD3双特异性抗体以及放射疗法以生成长期持久抗肿瘤反应且/或延长患有癌症的患病变全身性施用抗PD-1抗体和/或双特异性抗MUC16/抗CD3抗体之后局部施用放射疗法以增强患者的肿瘤的局部免疫原性(辅助放射)且/或杀灭肿瘤细胞(烧蚀放射)。在某些实施如阿法利贝)组合施用。[0106]本发明包括包含向个体施用抗PD-1抗体以及双特异性抗MUC16/抗CD3抗体的方 《用于非经肠配制物的赋形剂纲要(Compendiumofexcipientsforparenteral[0107]各种递送系统为吾人所知并且可以用以施用本发明的药物组合物，例如于脂质用泵。在另一个实施例中，可以使用聚合材料；参见《受控释放的医学应用(MedicalApplicationsofControlledRelease)》，Langer和Wise(编)，1974,CRCPres.,Boca描述的抗体或其盐溶解、悬浮或乳化于常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中来制聚乙二醇)、非离子型表面活性剂[例如聚山梨醇酯80、HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧化乙烯[0114]根据本发明的某些实施例，多次剂量的抗PD-1抗体以及双特异性抗MUC16/抗CD3次或多次剂量的抗PD-1抗体以及一次或多次剂量的双特异性抗MUC16/抗CD3抗体。如本文依序施用单次初始剂量的双特异性抗MUC16/抗CD3抗体，接着为一次或多次第二剂量的双[0115]根据本发明的某些实施例，多次剂量的抗PD-1抗体和双特异性抗MUC16/抗CD3抗的患者施用约1到3mg/kg患者体重的速效剂量、接着为一次或多次约0.1到约20mg/kg的维[0117]在本发明的一个示范性实施例中，每一次第二剂量和/或第三剂量是在前一剂量患者施用的抗PD-1抗体(和/或双特异性抗MUC16/抗CD3抗[0118]根据本发明的这个方面的方法可以包含向患者施用任何次数的第二剂量和/或第者施用第二剂量和/或第三剂量的频率在治疗方案过程内可以变化。施用频率也可以在治疗过程期间在临床检查之后由医师取决于单独患者的需要来体是在治疗方案开始时在更频繁的基础上(一周两次、一周一次或2周一次)作为“诱导剂[0121]本发明包括包含向患者依序施用抗PD-1抗体以及双特异性抗MUC16/抗CD3抗体以量的抗PD-1抗体，接着为一次或多次剂量的双特异性抗MUC16/抗CD3抗体。在某些实施例中，本发明方法包含施用单次剂量的抗PD-1抗体，接着为一次或多次剂量的双特异性抗的抗PD-1抗体、接着为约0.1mg/kg到约20mg/kg的一次或多次剂量的双特异性抗体以抑制被治疗的个体或施用有作为单一疗法的任一种抗体的个体相比，肿瘤生长抑制程度更大，体是以单一剂型形式与抗PD-1抗体一起施用。[0123]根据本发明的方法施用至个体的抗PD-1抗体和/或双特异性抗MUC16/抗CD3抗体(f)延长患有癌症(例如卵巢癌)的个体的存活期；和/或(g)与未被治疗的个体或施用有作为单一疗法的任一种抗体的个体相比，常规抗癌疗法的使用或需求减少(例如化学治疗剂1700mcg、约2000mcg、约2050mcg、约2100mcg、约2200mcg、约2500mcg、约2700mcg、约2800mcg、约2900mcg、约3000mcg、约4000mcg、约5000mcg、约6000mcg、约7000mcg或约[0126]含于单独剂量内的抗PD-1抗体或双特异性抗MUC16/抗CD3抗体的量可以就每千克抗PD-1抗体或双特异性抗MUC16/抗CD3抗体可以以约0.0001到约100mg/kg个体体重的剂量双特异性抗MUC16/抗CD3抗体可以以约0.1mg/kg到约20mg/kg患者体重的剂量施用。[0132]提出以下实例以便为所属领域的普通技术人员提供如何制造和使用本发明的方法和组合物的完整公开内容和描述，并且并不打算限制本发明人视作其发明之物的范围。子的抗CD3部分适用于活化T细胞。肿瘤细胞上的MUC16和T细胞上的CD3的同时结合有助于通过经活化T细胞定向杀灭(细胞裂解)靶[0135]使用标准方法构筑包含抗MUC16特异性结合域和抗CD3特异性结合域的双特异性抗体，其中抗MUC16抗原结合域和抗CD3抗原结合域各自包含与共同LCVR配对的不同相异自抗MUC16抗体的重链和来自抗CD3抗体的轻链或已知与多个重链臂有效混杂或配对的抗具有IgG1Fc域(BSMUC16/CD3-001、-002、-003和-004)或经修饰(嵌合)IgG4Fc域[0137]所构筑的各种抗MUC16xCD3双特异性抗体的抗原结合域的组成部分的概述阐述于[0141]可溶性CA-125(MUC16的梭口形式)对BSMUC16/CD3-001活性的影响是在存在从卵巢癌患者的腹水纯化的高含量CA-125的情况下使用FACS结合和细胞毒性分析来加以评估。大部分卵巢癌患者的血清中的CA-125含量增加并且循环含量可以通过充当抗原沉默而影响任何靶向MUC16的疗法。分析中所用的CA-125含量(10,000U/ml)远超过卵巢癌患者中的656.6U/mL中值公布含量。在存在来自人类腹水的富NY，USA)或表达五个羧基端SEA域和MUC16的近膜区(MUC16Δ)的近膜构筑体的情况下BSMUC16/CD3-001杀灭表达MUC16的OVCAR-3细胞的能力是在37℃下以4:1效应子/标靶比用固定浓度的BSMUC16/CD3-001或CD3结合对照抗体(100pM)和MUC16-1H或MUC16Δ的连续稀PBMC以1×106个细胞/毫升涂铺于补充有RPMI的培养基中并且在37℃下培育隔夜以便通过T细胞(CD2+)中的经活化(CD69+)T细胞或(CD25+)T细胞百分比来评估T细[0142]通过酶联结免疫吸附分析(ELISA)测量BSMUC16/CD3-001与已知使CA-125(克隆CD3-001、MUC16亲本抗体、a-MUC163A5和非结合对照(BSMUC16/CD3-001同型对照和a-用PBST洗涤。将与辣根过氧化酶(SA-HRP)(美国马萨诸塞州沃尔瑟姆的赛默飞世尔科技液的1:10000稀释液形式添加到孔中并且培育1小时以检测板结合型经生物素标记的抗体。根据制造商说明书洗涤板并且用3-3'-四甲基联苯胺、5-5'-四甲基联苯胺(美国新泽西州富兰克林湖的BD生物科学(BDBiosciences，FranklinLakes，NJ，USA))受质显影。在Victor多标记读板仪(MultilabelPlateReader)(纽约梅尔维尔的珀金埃尔默(Perkin中更详细地讨论，含有到达MUC16的第5SEA域(MUC16Δ)的近膜区的可溶性MUC16构筑体显存在CA-125的情况下而非在存在高浓度MUC16Δ的情况下BSMUC16/CD3-001也可以诱导T细[0145]在异基因肿瘤模型和同基因肿瘤模型中评估抗MUC16/抗CD3双特异性抗体以及定，用12.5μgBSMUC16/CD3-001进行的治疗产生如通过BLI测量所测定的显著抗并且与REGN2810(抗PD-1)的组合进一步增强抗肿瘤功效。如在给药开始之前通过BLI所评[0148]12.5μgBSMUC16/CD3-001显著地减小肿瘤负荷并且抗PD-1的添加相比于单独BSMUC16/CD3-001的添加来说增强抗肿瘤功效。将人类OVCAR-3/Luc细胞植入经人类T细胞移植的NSG小鼠中。在第5天和第8天将小鼠用12.5μgIV施用的BSMUC16/CD3-001治疗或用天如通过BLI所评估的肿瘤负荷。使用不成对非参数Mann-Whitneyt测试来测定统计显著CD3-001进行的治疗和与REGN2810CD3-005双特异性抗体结合情况下表达含有一部分人类MUC16的嵌[0153]对于这种第一同基因肿瘤模型，使用经工程改造以表达人类MUC16的部分的ID8-VEGF细胞系。在植入之后三天向小鼠IP植入ID8-VEGF/huMUC16细胞并且用5mg/kgBSMUC16/CD3-001或CD3结合对照和同型对照或与抗PD-1的组合(5mg/kgIV)进行治疗。与[0154]BSMUC16/CD3-001显著地延长ID8-VEGF腹水模型中的中值存活时间并且PD-1(REGN2810)阻断物的添加使得若干小鼠存活。向表达人类CD3而非小鼠CD3和嵌合MUC16分子的小鼠中植入表达一部分人类MUC16的鼠类卵巢肿瘤系。在植入之后第3天向小鼠施用CD3-001和BSMUC16/CD3-001+抗PD-1治疗引起中值存活时间延长，并且BSMUC16/CD3-001+抗PD-1的组合产生50％存活率，证明MUC16xCD3双特异性抗体与抗PD-1抗体之间的协同效69.5换并且一部分小鼠MUC16基因经人类序列置换。置换产生T细胞表达人类CD3并且在BSMUC16/CD3-001和BSMUC16/CD3-005双特异性抗体结合情况下表达含有一部分人类MUC16[0160]对于这种第二同基因肿瘤模型，使用经工程改造以表达人类MUC16的部分的MC38系。向小鼠SC植入MC38/huMUC16细胞并且在肿瘤植入之后第7天用BSMUC16/CD3-005或CD3物的组合产生更好的抗肿瘤功效。向表达人类CD3而非小鼠CD3和嵌合MUC16分子的小鼠中[0163]使用PET成像在野生型和基因人类化小鼠中评估BSMUC16/CD3-001和BSMUC16/抗体(使用相同抗MUC16重链和轻链作为双特异性物生成的二价抗MUC16抗体，在本文中称组织中的离体生物分布分析证实到淋巴结和脾脏的定位(数据未示出)。相对于BSMUC16/CD3-001来说，淋巴组织中的经89Zr标记的BSMUC16/CD3-005双特异性抗体的吸收极大地减以在MUC16表达肿瘤中积聚，向携带ID8-VEGF-huMUC16Δ肿瘤的小鼠施用经89Zr标记的BSMUC16/CD3-001和经89Zr标记的BSMUC16/CD3-005。尽管BSMUC16/CD3-001的淋巴吸收较[0164]制备免疫偶联物和小型动物PET：通过利用微生物谷氨酰胺转胺酶进行的转酰氨[0165]使用经预校准的SofieBiosciencesG8PET/CT仪器(SofieBiosciences(加利福尼亚州卡尔弗城(Culvercity,CA))和珀金埃尔默)以获取PET和CT图片。能量窗范围为体积注射剂量的0到30％信号范围的比色计上使用VivoQuant软件(inviCRO成像服务)将经衰减校正的PET数据和CT数据处理成假色共同注册的PET-CT最大强度投射。为了离体生物分布分析，在给药之后第6天成像以后使小鼠安乐死。通过心脏穿刺将血液收集到计数管预先称重，并且随后再称重以测定血液和组织的重量。随后，在自动γ计数器(Wizard[0166]经89Zr标记的BSMUC16/CD3-001和经89Zr标记的BSMUC16/CD3-005展现到MUC16+肿情况下两种MUC16xCD3双特异性物均展[0168]BSMUC16/CD3-001与猴MUC16和CD3交叉反应。为了确定双特异性抗体的安全性和周之后0.01mg/kg组中的任何动物中的血清中未检测到BSMUC16/CD3-001。BSMUC16/CD3-[0169]在给药期或恢复期期间不存在BSMUC16/CD3-001相关临床观测，也不存在尿分析在1.0或0.1mg/kg初始剂量之后1天内观察到循环发炎性标志物(C反应蛋白(CRP)和IL-6)针对若干抗血液肿瘤的CD3双特异性分子所描述[0170]根据IACUC的准则进行食蟹猴研究。通过30分钟IV输注每周一次向食蟹猴(6只动稀释的10mM组氨酸。在各个时间点收集血液样品或组织以用于临床病理学和病理组织学。通过ELISA测定BSMUC16/CD3-001浓度，并且使用WinNonLin软件执行毒理动力学分析。在RocheModularP800系统上分析CRP。通过MSD测量细胞因子(MesoScaleDiagnostics,苏木精和曙红(H&E)组织学染色评估的BSMUC16/CD3-001相关显微变化包括发炎(白细胞浸[0172]