粗蛋白质的测定

粗蛋白质的测定

蛋白质是评价饲料营养价值的重要指标。

蛋白质含量测定也就成为饲料质量检测中具有重要意义的常规项目。

蛋白质种类繁多，结构复杂，精确的测定难度较大。

但各种蛋白质都有其共同的特点——含有一定比例的氮。

长期以来，人们用测定总氮量的

方法，根据饲料中氮与蛋白质的比例

关系，推导出蛋白质的含量。

问题是，并非只是蛋白质才含氮，还有一些非蛋白质的化合物亦含氮（如核酸、生物碱、氨基酸、酰胺、硝酸盐及铵盐等）。

所以，用测定总氮量反推出来的，实际上包括了纯蛋白质和非蛋白质含氮物（氨化物）。

粗蛋白质——饲料中含氮化合物的总称，包括纯蛋白质和氨化物。

推算系数6.25的由来：

资料中常见在粗蛋白质这一名词后加注（N×6.25）

各种饲料蛋白质的含氮量由14.7~19.5%不等，平均为16%，即

每100克蛋白质平均含16克氮

而每测出1克氮，意味着存在100/16克蛋白质，即

1克氮相当于6.25克蛋白质

粗蛋白质测定最常用凯氏定氮法，1833年由凯达尔（Kjlehl）首创，至今仍广泛应用于土壤，肥料，饲料，食品分析中。

我国现行的国家标准亦将此法列为饲料粗蛋白质测定的法定方法。原理

消化

在催化剂帮助下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化为硫酸铵。

2CH3CHNH2COOH+13H2SO4——————

(NH4)2SO+6CO2+12SO2+16H2O蒸馏

加入强碱并蒸馏，使氨逸出

(NH4)2SO4+2NaOH2NH3+2H2O+Na2SO4

用硼酸吸收

NH3+4H3BO4————NH4HB4O7+5H2O滴定

硼酸吸收氨后，用酸滴定

NH4HB4O7+HCl+5H2O

NH4Cl+4H3BO4

测出样品含氮量，乘以氮与蛋白质的换算系数6.25，计算粗蛋白质的含量 操作步骤

称样——消煮——蒸馏———滴定称样

准确称取样品0.5~1克(过40目筛）

加催化剂（K2SO46克，CuSO40.4克）

加浓硫酸12ml

硫酸铜——作催化剂、指示剂。 （其他催化剂：Se,Hg,HgO,H2O2等）消煮时加入各试剂的作用

浓硫酸——分解有机物，使氨固定为硫酸铵。 硫酸钾或硫酸钠——增温剂，使硫酸沸点由317℃升至325-341℃。消煮时样品颜色变化：

黑色（稠糊状）——褐红色——黄褐色——黄绿色——蓝绿色（澄清）

铜在消化过程中的颜色

CuSO4+C+H+________

Cu2SO4(棕黑色)+SO2↑+CO2↑

Cu2SO4+2H2SO4________

2CuSO4(蓝色)+2H2O+SO2↑

消煮过程会产生大量二氧化硫和三氧化硫，需在通风橱内进行消煮消煮控制

消煮液呈现蓝绿色澄清后，继续

加热至少半小时。蒸馏

样品分解液加入NaOH，在强碱性条件

下蒸馏，氨逸出，全部被硼酸吸收。氨气半微量凯氏定氮蒸馏装置滴定

以盐酸标准溶液滴定。根据耗酸量及其浓度，算出含氮量，进而推算粗蛋白含量。

指示剂：甲基红—溴甲酚绿混合指示剂。

由蓝绿色滴定至灰红色为终点

HCl标准溶液浓度：

常量0.1mol/L,半微量0.02mol/L空白测定

以0.5克蔗糖代替试样，耗0.05mol/L

盐酸不应超0.3ml。计算

(V2-V1)×C×0.0140×6.25

CP(%)=×100% W×(V’/V)

重复性

当CP（%）>25%允许相对偏差1%

10-25%2%

<10%3%准确性检验

以硫酸铵代替试样进行测定，

应测得其含氮量为21.19±0.2%.操作注意事项以减量法准确称样：

将称量纸放在天平上，然后回零

于称量纸上称取适量的样品，然后回零

将样品倒入消化管

将称量纸放回天平，读取所显示的负值，即为倒入消化管的样品重

操作注意事项 而所加入的催化剂、蔗糖、硫酸不必精确度量

2.样品必须准确称重尽量避免样品粘在消化管的