基因工程的基本操作程序第23步

1.2基因工程的基本操作程序复习提问1.基因工程的基本操作程序的四个环节2.目的基因重要指什么?也能够是什么?3.获得目的基因惯用的办法。4.基因文库重要涉及哪两种?5.PCR技术的原理、条件6.PCR与DNA复制的区别（表格）PCR技术—聚合酶链式反映

原理：条件：PCR扩增仪DNA双链复制的基本原理四种脱氧核苷酸一对引物热稳定DNA聚合酶(Taq酶）DNA的两条链为模板温度控制PCR技术与DNA复制的比较DNA复制PCR技术解旋酶催化DNA在高温作用下变性解旋细胞内（重要在细胞核内）细胞外（重要在PCR扩增仪内）DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等耐热的DNA聚合酶（Taq酶）细胞内温和条件需控制温度，在较高温度下进行区别解旋方式场合酶温度条件前提有一段已知的目的基因的核苷酸序列，方便根据这一序列合成引物联系①模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成②原料：均为四种脱氧核苷酸PCR技术扩增过程a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，

断裂，形成_______

b、复性（55℃-60℃）：系统温度减少，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链1.用一定的_________切割质粒，使其出现一种切口，露出____________。2.用_____________切断目的基因，使其产生_________________。——

核心3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一种重组DNA分子（重组质粒）限制酶黏性末端同一种限制酶的黏性末端切口DNA连接酶相似(二)基因体现载体的构建基因体现载体的构建——核心质粒DNA分子一种切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种限制酶目的基因与运载体的结合过程，事实上是不同来源的基因重组的过程。科学家在哺育抗虫棉时，通过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，成果抗虫基因在棉花体内没有体现。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，成果成长的植株，有了抗虫能力。资料:基因体现载体的构成：目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且能够遗传给下一代，同时使目的基因能够体现和发挥作用。a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因等(三)将目的基因导入受体细胞借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。转化——目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定体现办法导入植物细胞导入动物细胞导入微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法——显微注射法——Ca离子解决法(三)将目的基因导入受体细胞目的基因插入Ti质粒的T-DNA上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞的染色体上目的基因的遗传特性得以维持稳定和体现1.农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上2.转化1.下表有关基因工程中有关基因操作的名词及对应的内容，对的的组合是 2、下列属于获取目的基因的办法的是()①运用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④运用PCR技术⑤运用DNA转录 ⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥3.细菌的质粒分子带有一种抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的重要作用是A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性B．有助于对目的基因与否导入进行检测C．增加质粒分子的分子量D．便于与外源基因连接4.有关基因工程的叙述对的的是A．限制酶只在获得目的基因时才用B．重组质粒的形成是在细胞内完毕的C．质粒都可作为运载体D．蛋白质的构造可为合成目的基因提供资料5.哪项不是基因体现载体的构成部分()A.启动子B.终止密码C.标记基因D.目的基因6.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的办法()A．基因枪法B．显微注射法 C.农杆菌转化法D．花粉管通道法胰岛素是治疗糖尿病的特效药，长久以来只能依靠从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。如果让你用基因工程的办法使大肠杆菌生产出人的胰岛素，想一想，如何设计？

尝试设计(四)目的基因的检测与鉴定——检查与否成功检测—鉴定—