CN113196055B 用于治疗疾病的化合物及其筛选方法 （马克斯·普朗克科学促进协会）

compoundlibrary.Proteinneurodegenerativedisease.20embomeeting-oralabstdiseases.PharmacolRes.2020,105143.compoundlibrary.Protein2021.07.302021.06.11PCT/EP2019/0778182019.10.14WO2020/078924EN2020.04.23本发明涉及一种用于在与应激颗粒的形成有关的神经退行性疾病的预防或治疗中使用的相关分子的一种或多种凝聚物有关的特性，包含：(a)使所述化合物与包含一种或多种凝聚物的细胞组合物或能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定与所述一种或多种2(a)使所述化合物与包含一种或多种凝聚物的细胞组合物或能够形成一种或多种凝聚(b)基于所述的包含凝聚物相关分子的一种或多种凝聚物的数目、所述一种或多种凝其中，与参比相比，所述特性的调节指示所述化合物调节2.根据权利要求1所述的方法，其中基于以下中的任何一种或多种测定与所述一种或3.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种凝聚物在所述细胞组合物中的一4.根据权利要求1所述的方法，进一步包含在步骤(b)之5.根据权利要求1所述的方法，进一步包含6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述凝聚物316.根据权利要求1所述的方法，进一步包含使所述细胞组合物的至少一部分与DNA损20.根据权利要求1所述的方法，进一步包含23.一种识别用于治疗疾病的化合物的方法，所述方法包含根据权利要求1–22中任一25.根据权利要求24所述的方法，其中所述神经退行性疾病是肌萎缩性侧索硬化症26.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种凝27.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种凝聚物选自由应激颗粒、P体、28.权利要求1–27中任一项所述的方法所识别的化合物在制备用于治疗个体中的RNA结合蛋白RBP相关疾病的药物中的用途，其中所述RBP相关疾病的特征在于所述RBP从细胞31.根据权利要求28所述的用途，其中所述RBP选自由FUS、TDP–43、EWSR1、TIAL1、436.根据权利要求29所述的用途，其中所述药物37.根据权利要求36所述的用途，其中所述其他42.根据权利要求41所述的用途，其中所述神经元缺陷包含44.一种根据权利要求1–27任一项所述的49.权利要求44或45所述的化合物或权利要求46–48任一项所述的药物组合物在制备51.根据权利要求49所述的用途，其中所述与应激颗粒的形成有关的神经退行性疾病52.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞5[0002]本申请要求在2018年10月15日提交的EP18200401.0和2019年8月2日提交的[0003]肌萎缩性侧索硬化症(ALS)是一种致命的神经退行性疾病，其预后差且治疗选择种凝聚物的细胞组合物或能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定与所6[0025]本发明涉及用于治疗与应激颗粒形成相关的神经退行性疾病(特别是用于治疗肌7[0026]本发明的一个方面涉及一种用于在预防或治疗与应激颗粒形成有关的神经退行方法中使用的药物组合物包含如0025段所述的有关的神经退行性疾病的方法，其中所述方法包含向有需要的患者施用本发明的化合物，8(一种砷螯合药物)以及吐根碱(其通过稳定多核糖体防止应激颗粒形成)的阳性对照应激滴数(●,左轴)和核/细胞质信号比率(○,右轴)的剂量响应。b)i9[0055]图3示出了硫辛酰胺和硫辛酸在不同方案下对不同应激的作用模式，报告了可能的平均FUSGFP信号强度响应以及高于和低于平均值的一个标准偏差。米托蒽醌在低于细[0057]图5显示硫辛酰胺和硫辛酸在体外影响FUS凝聚物的性质和ALS相关的突变体FUS成。d)在老化过程中，在FUS凝聚物和纤维的光漂白胺处理的老化凝聚物保持大的FUSGFP流动分数和短的FRAP半衰期，而未处理的凝聚物硬2.8μMFUSGFP在体外与不同浓度的KCl(其抑的光漂白(FRAP)后的代表性荧光恢复。硫辛酰胺或硫辛酸处理的老化液滴保留了快速理的液滴硬化时，硫辛酰胺和硫辛酸处理使得液滴保持大的FUSGFP流动分数和短的FRAP强度(绿色)与从具有(红色)和不具有细胞(青色)信号强度计算的来自培养基的大量摄取d)在用0.02％DMSO培养60天后iPS衍生的神经元。表达野生型FUS的神经元具有稳定的轴滴数(●,左轴)和核/细胞质信号比率(○,右轴)的剂量应响时砷酸盐应激、接着用30μM硫辛酰胺或DMSO阴性对照1小时应激的组合下，表达野生型或P525LFUSGFP的同基因iPS细胞中的FUSGFP定位。FUSP525L导致形成更大的细胞质FUS小时砷酸盐应激或无应激，通过a)中的iPS细胞的滤膜阻滞来评估聚集的FUS的相对光密用化合物溶剂(DMSO)或2μM硫辛酰胺处理3天后，FUSP525LGFP运动神经元轴突远侧部分[0065]图13示出了通过1HNMR对15N硫辛酰胺的表征。a)15N硫辛酰胺的化学结构。b)1H号强度是浓度的明确量度。e)在10℃,顺式-和反式-酰胺质子共振的强度随着pH降低而增[0067]传统上，细胞的各种膜结合区室(细胞器)被认为是拥挤子在膜界限细胞器内分选至凝聚物中。大分子在相分离反应中组装或凝聚到液体液滴中，[0069]形成凝聚物的过程不是由如先前所认为的特定简单的化[0073]本申请提供了用于识别调节细胞和细胞外凝聚物的一种或多种特性并因此可用或多种凝聚物的一些(如合物的方法，所述化合物调节与一种或多种凝聚物有关的特性和/或可用于治疗疾病的方细胞组合物或与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定与所述一种或物的细胞组合物或与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定与该一种二组一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定与所述第一组一种或多种凝聚物有二组一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定与所述第一组一种或多种凝聚物有种候选化合物与包含所述第一组一种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成所述第一组一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定与所述第一组一种或多种凝聚物有关的特性，(c)使所述多种候选化合物与包含第二组一种或多种凝聚物或能够形成所述第二[0080]在一些实施方式中，与第一组有关特性的调节不同于与范围的上限与下限之间的到下限的单位的十分之一的每一中间值和在所述范围中的任何[0088]如本文所用，除非上下文另有明确规定，包括在所附权利要求书中，单数形式[0093]如本文所用，术语治疗(treating)或治疗(treatment)任何疾病或病症(例如ALS)，在一个实施方式中指改善该疾病或病症(例如减缓或阻止或减少疾病或其至少一种(例如可辨别症状的稳定化)、在生理上(例如身体参数的稳定化)或两者上调节疾病或病病症(例如ALS)是指抑制(包括完全抑制)疾病或病症的发展或发作(例如延迟疾病或病症聚物的细胞组合物或与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定与所述化合物中的每一种与包含一种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成一种或多种凝聚一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，(b)测定与所述第一组一种或多种凝聚物有关的特多种凝聚物的细胞组合物接触，所述第二组一种或多种凝聚物包含第二凝聚物相关分子，述第一和第二组一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，(b)测定与所述第一组一种或多种种候选化合物与包含所述第一组一种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成所述第一组一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，(b)测定与所述第一组一种或多种凝聚物有关的特性，(c)使多种候选化合物与包含第二组一种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成凝聚物相关分子，和(d)测定与所述第二组一种或多种凝聚物有关的特性，其中与参考相或与能够形成一种或多种应激颗粒的细胞组合物接触，和(b)测定与所述一种或多种应激应激颗粒的细胞组合物或与能够形成一种或多种应激颗粒的细胞组合物接触，和(b)测定Cajal体和/或PML体的细胞组合物接触，(b)测定与所述一种或多种应激颗粒有关的特性，合物或与能够形成所述一种或多种应激颗粒的细胞组合物接触，(b)测定与所述一种或多Cajal体和/或PML体的细胞组合物接触，(b)测定与所述一种或多种应激颗粒有关的特性，节与所述一种或多种应激颗粒有关的特性的多种应激颗粒的细胞组合物或与能够形成所述一种或多种应激颗粒的细胞组合物接触，关的特性的调节不同于与所述一种或多种旁斑、在DNA损伤位点周围形成的凝聚物、P体、Cajal体和/或PML体有关的特性的调节，表明所述化合物调节与所述一种或多种应激颗粒在一种或多种凝聚物的生命周期中的任何时点使组合物(诸如细胞组合物)与化合物接触。[0112]在一些实施方式中，所述细胞组合物在与化合物接触之前包含一种或多种凝聚物接触的同时和之后形成所述一种或多种凝聚物的附加够形成一种或多种凝聚物，其中在使所述细胞组合物与所述化合物接触的同时和/或之后种或多种凝聚物的细胞组合物或能够形成一种或多种凝聚物的物的流动性；(viii)所述一种或多种凝聚物的凝固；(ix)所述一种或多种凝聚物的溶解；法包括测定与一种或多种凝聚物有关的第一特性和与一种或多种凝聚物有关的第二特性。包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目，并且第二特性是(ii)一种或多种凝聚物的尺寸、物相关分子的位置、(xii)所述凝聚物相关分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝聚包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目，并且第二特性为(iii)所述一种或多种凝聚物的位(i)包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目，并且第二特性是(v)和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目，并且第二特性是(viii)所述一种或多种凝述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目，并且第二特性是(x)的组成、(vii)所述一种或多种凝聚物的流动性、(viii)所述一种或多种凝聚物的凝固、子的位置、(xii)所述凝聚物相关分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝聚物相关分第一特性为(ii)所述一种或多种凝聚物的尺寸，并且第二特性为(iii)所述一种或多种凝寸，并且第二特性是(xii)所述凝聚物相关分子向所述凝聚物中的分隔。在一些实施方式(iii)所述一种或多种凝聚物的位置，并且第二特性为(v)所述一种或多种凝聚物的表面第一特性是(iii)所述一种或多种凝聚物的位置，并且第二特性是(x)纤维形成的存在和/种或多种凝聚物的位置，并且第二特性是(xii)所述凝聚物相关分子向所述凝聚物中的分聚物相关分子的位置、(xii)所述凝聚物相关分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝述第一特性是(iv)一种或多种凝聚物的分布，并且第二特性是(v)所述一种或多种凝聚物且第二特性是(ix)所述一种或多种凝聚物的溶解。在一些实施方式中，所述第一特性是述凝聚物相关分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝聚物相关分子的聚集中的任一性为(v)所述一种或多种凝聚物的表面积，并且第二特性为(ix)所述一种或多种凝聚物的述一种或多种凝聚物的组成，并且第二特性是(vii)所述一种或多种凝聚物的流动性、性是(vi)所述一种或多种凝聚物的组成，并且第二特性是(xi)所述凝聚物相关分子的位述一种或多种凝聚物的流动性，并且第二特性是(viii)所述一种或多种凝聚物的凝固、子的位置、(xii)所述凝聚物相关分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝聚物相关分(vii)所述一种或多种凝聚物的流动性，并且第二特性是(viii)所述一种或多种凝聚物的物相关分子的位置、(xii)所述凝聚物相关分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝聚相关分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝聚物相关分子的聚集中的任何一种(或多或多种凝聚物的位置；(iv)一种或多种凝聚物的分布；(v)所述一种或多种凝聚物的表面或量；(xi)所述凝聚物相关分子的位置；(xii)所述凝聚物相关分子向所述凝聚物中的分一些实施方式中，所述化合物调节(iii)所述一种或多种凝聚物的位置。在一些实施方式[0133]在一些实施方式中，所述化合物不调节选自以下中的一种或多种(例如两种、三所述一种或多种凝聚物的凝固；(ix)所述一种或多种凝聚物的溶解；(x)纤维形成的存在调节与所述一种或多种凝聚物有关的第二特性，其中所述第一特性不同于所述第二特性，的表面积；(vi)所述一种或多种凝聚物的组成；(vii)所述一种或多种凝聚物的流动性；述细胞组合物的第二部分(例如细胞的第二部分)中种凝聚物的位置；(iv)一种或多种凝聚物的分布；(v)所述一种或多种凝聚物的表面积；(xi)所述凝聚物相关分子的位置；(xii)所述凝聚物相关分子向细胞质中的凝聚物中的分种凝聚物的位置；(iv)一种或多种凝聚物的分布；(v)所述一种或多种凝聚物的表面积；(xi)所述凝聚物相关分子的位置；(xii)所述凝聚物相关分子向用于第一组一种或多种凝凝聚物相关分子的位置；(xii)所述凝聚物相关分子向用于第二组一种或多种凝聚物的凝种凝聚物的位置；(iv)一种或多种凝聚物的分布；(v)所述一种或多种凝聚物的表面积；(xi)所述凝聚物相关分子的位置；(xii)所述凝聚物相关分子向一种或多种应激颗粒中的的凝聚物的数目；(ii)所述一种或多种凝聚物的尺寸；(iii)所述一种或多种凝聚物的位[0142]在一些实施方式中，所述方法是一种识别化合物的方法，该化合物调节(i)包含实施方式中，所述方法是一种识别调节(vi)所述一种或多种凝聚物的组成的化合物的方述方法是一种识别调节(xiii)所述凝聚物相关分子的聚集的[0143]在一些实施方式中，所述化合物不调节选自下列中的一种或多种(例如两种、三所述一种或多种凝聚物的凝固；(ix)所述一种或多种凝聚物的溶解；(x)纤维形成的存在种或多种凝聚物的溶解；(x)纤维形成的存在和/或量；(xi)所述凝聚物相关分子的位置；(xii)所述凝聚物相关分子向所述细胞组合物的第一部分(例如细胞的第一部分)中的凝聚子的位置；(xii)所述凝聚物相关分子向所述细胞组合物的第二部分(例如细胞的第二部向用于第一组一种或多种凝聚物的凝聚物中的分隔，并且不调节选自以下的一种或多种和/或不包含所述凝聚物相关分子的凝聚物的数目；(ii)所述一种或多种凝聚物的尺寸；向一种或多种应激颗粒中的所述凝聚物中的分隔，并且不调节选自以下的一种或多种(例的表面积；(vi)所述一种或多种凝聚物的组成；(vii)所述一种或多种凝聚物的流动性；[0151]在一些实施方式中，所述方法包含在接触所述化合物之前和之后测定所述特实施方式中，所述方法包含对所述细胞组合物的第一部分和所述细胞组成的第二部分(例所述细胞组合物中的细胞的第一部分和所述细胞组合物中的细胞的第二部分进行所述测[0159]在一些实施方式中，与所述一种或多种凝聚物有关的特性基于包含和/或不包含别化合物的方法，该化合物调节与包含凝聚物相关分子的一种或多种凝聚物有关的特性，所述方法包含：(a)使所述化合物与包含一种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成一与参比相比，所述特性的调节指示所述化合物调节与所述一种或多种凝聚物有关的特性，其中所述特性是调节包含和/或不包含所述凝聚物相关分子的凝聚物的数目。在一些实施所述方法包含测定细胞组合物的一部分中包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的数含测定细胞组合物中单种细胞中的包含和/或不包含凝聚物相关分子实施方式中，所述方法包含测定细胞组合物中一种或多种细胞的一部分中包含和/或不包单种细胞的一部分中包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目。在一些实施方式在一些实施方式中，所述方法包含测定细胞器中包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的第一部分(例如本文公开的细胞组合物的任何部分)中包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目；测定在细胞组合物的第二部分(例如本文公开的细胞组合物的任何部分)中包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目；和将所述第一部分中包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目和所述第二部分中包含和/或不包含凝聚物相关分所述细胞组合物的第一部分中包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目增加，并且与参比相比，所述细胞组合物的第二部分中包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物细胞组合物的第二部分中包含和/或不包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目增加。在一些实施方式中，所述方法包含测定所述细胞组合物中单种细胞中的一种或多种凝聚物的尺第一部分是细胞核且所述细胞组合物的第二部与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定所述一种或多种凝聚物的位式中，所述方法包含测定所述细胞组合物中一种或多种细胞中的一种或多种凝聚物的位识别化合物的方法，该化合物调节与包含凝聚物相关分子的一种或多种凝聚物有关的特中与参比相比，所述特性的调节指示所述化合物调节与所述一种或多种凝聚物有关的特种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)[0179]在一些实施方式中，一种或多种凝聚物的分布基于细胞位置(如胞质溶胶、细胞在一些实施方式中，当与参比细胞组合物(例如未与所述化合物接触的细胞组合物或与对照化合物接触的细胞组合物)的细胞位置中包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目相比，细与所述化合物接触的细胞组合物或与对照化合物接触的细胞组合物)的细胞位置中包含凝分中(例如一个或多个视野或细胞组合物的图像的一个或多个部分中)包含凝聚物相关分个或多个部分)中包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目相比，细胞组合物的一个或多个部一个或多个部分(诸如未与所述化合物接触的细胞组合物的一个或多个部分，或与对照化合物接触的细胞组合物的一个或多个部分)中包含凝聚物相关分子的凝聚物的数目相比，细胞组合物的一个或多个部分(诸如胞质溶胶或细胞核的一部分)中包含凝聚物相关分子方式中，所述方法包含测定细胞组合物的第一部分中包含凝聚物相关分子的凝聚物的数在一些实施方式中，与参比(例如未与所述化合物接触的细胞组合物或与对照化合物接触组合物的第一部分(如细胞核)与所述细胞组合物的第二部分(如胞质溶胶)中的凝聚物的比相比，所述细胞组合物的第一部分(如细胞核)与所述细胞组合物的第二部分(如胞质溶包含一种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，或与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定所述一种或多种凝聚物的组合物的第一部分是细胞核且所述细胞组合物的第二部分聚物中包含的一种或多种大分子(如包含一种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，合物或与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定所述一种或多种凝聚物的第一部分是细胞核且所述细胞组合物的第含测定细胞组合物中一种或多种细胞中的一种或多种凝聚物的凝固。在一些实施方式中，所述方法包含测定细胞组合物中单种细胞中一种或多种凝聚物的凝固。在一些实施方式[0205]在一些实施方式中，当一种或多种凝聚物的凝固与参比(包括参比凝聚物或其产第一部分是细胞核且所述细胞组合物的第二部第一部分是细胞核且所述细胞组合物的第二部[0218]在一些实施方式中，与所述一种或多种凝聚物有关的特性基于纤维形成的存在胞组合物或与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定与所述一种或多所述化合物与包含一种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成一种或多种凝聚物的细和/或量的调节指示所述化合物调节所述纤维形成的存[0219]纤维形成可通过多种方法检测和测量，例如通过使用显微镜可视化纤维和/或纤方式中，所述方法包含测定整个细胞组合物中纤维形成的存在和/或量。在一些实施方式(a)使所述化合物与包含一种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成一种供了识别化合物的方法，该化合物调节所述凝聚物相关分子向一种或多种凝聚物中的分一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定所述凝聚物相关分子向所述一种或多种[0232]可以对细胞组合物的一部分或全部测定凝聚物相关分子向凝聚物中的分隔。因中一种或多种细胞中凝聚物相关分子向一种或多种凝聚物中的分隔。在一些实施方式中，所述方法包含测定细胞组合物中单种细胞中凝聚物相关分子向一种或多种凝聚物中的分[0233]也可以对细胞组合物中的一部分或全部细胞测定凝聚物相关分子向凝聚物中的定细胞组合物中单种细胞的一部分中的所述凝聚物相关分子向所述一种或多种凝聚物中物的第二部分中凝聚物相关分子向一种或多种凝聚物中的分隔不增加。在一些实施方式或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测所述方法包含：(a)使所述化合物与包含一种或多种凝聚物的细胞组合物或与能够形成一[0246]在一些实施方式中，所述化合物能够在活细胞中普遍存在的条件下与生物分子些实施方式中的任一种可应用并可与本文所述的任何化合物(包括前胞组合物包含具有神经退行性或增生性疾病的一个或多个特性的细胞。在一些实施方式2017,“Biomolecularcondensates:organizersofcellularbiochemistry”；Brangwynneetal.,Science,324,2009,“GermlinePgranulesareliquiddroplets2015,“ALiquid-to-SolidPhaseTransitionoftheALSProteinAcceleratedbyDiseaseMutation”；Alberti,S.,CurrentBiology,27,R1089–R1107,2017,“Phase[0265]实施方式1.一种用于在预防或治疗与应激颗粒形成相关的神经退行性疾病的方[0270]实施方式2.根据实施方式1所述的用于在预防或治疗与应激颗粒形成相关的神经[0272]实施方式3.根据实施方式1或2所述的用于在预防或治疗与应激颗粒形成相关的[0273]实施方式4.一种用于在预防或治疗与应激颗粒形成相关的神经变性的方法中使[0274]实施方式5.根据实施方式4所述的用于在预防或治疗肌萎缩性侧索硬化症的方法[0281]实施方式12.根据实施方式10或11所述的用于治疗或预防神经退行性疾病的方[0282]实施方式13.根据实施方式10至12中任一项所述的用于治疗或预防神经退行性疾[0283]实施方式14.一种减少或抑制细胞中[0293]E1.一种识别化合物的方法，该化物或能够形成一种或多种凝聚物的细胞组合物接触，和(b)测定与所述一种或多种凝聚物[0294]E2.根据实施方式E1所述的方法，其中基种或多种凝聚物有关的特性：(i)包含和/或不包含所述凝聚物相关分子的凝聚物的数目；种或多种凝聚物的溶解；(x)纤维形成的存在和/或量；(xi)所述凝聚物相关分子的位置；(xii)所述凝聚物相关分子向所述一种或多种凝聚物中的分隔；和(xiii)所述凝聚物相关[0295]E3.根据实施方式E1或E2[0296]E4.根据实施方式E1-E3中任一项所[0297]E5.根据实施方式E1-E3中任一项所[0298]E6.根据实施方式E4或E5所述的方法，其中所述凝聚[0302]E10.根据实施方式E1-E9中任一项所述的方法，其中所述凝聚物相关分子选自：[0311]E19.根据实施方式E1-E17中任一项所述的方法，其中所述参比是第二细胞组合[0315]E23.一种识别可用于治疗疾病的化合物[0318]E26.根据前述实施方式E1至E25中任白质与其它大分子(特别是DNA和/或RNA)中的一种或多种的相分离形成的无膜包封的区[0324]本发明人开发了使用在近内源水平上稳定表达GFP-标记的FUS的HeLa细胞系的细核斑点数目和细胞核/细胞质分隔)用于通过对应激细胞中FUS定位的影响强度来对化合物有影响。倾向于对FUS定位有很大影响(通常是减少应激粒数目)的新选出物类别包括强心出物。通过对形成的FUS液滴数目的影响和在体外低盐条件下在1mMDTT存在下FUS向形成的HeLa细胞中，剂量响应分析显示，硫辛酰胺减少应激颗粒的数目并增加细胞核/细胞质砷酸盐应激下表达FUSGFP的诱导多能干细胞(iPSC)系证实了硫辛酰胺的这些关键活性。乎同时逆转了FUS响应应激而从细胞核的运出和向应激颗粒的掺入。后来显示硫辛酸具有且通常作为硫辛酰基部分通过仲酰胺共价结合到蛋白质上。这种结合形式类似于硫辛酰循环的酶和一种在三羧酸(TCA)循环的酶)用作氢载体。R-(人类中实现-硫辛酸在糖尿病性神经病变治疗中以约600mg/天的剂量使用具有悠久的使用与硫辛酸的直接砷酸盐反应程度、抗氧化作用和酶/糖酵解作用对硫辛酸化合物活性的贡可以补充涉及二氢硫辛酰胺脱氢酶的氧化还原循环(其中只有天然存在的R-(+)异构体可[0338]为了测定硫辛酸是否能够导致存在的应激颗粒溶解，本发明人对表达FUS-GFP细盐的新鲜培养基轻微降低了应激颗粒数目(图3A)。这[0340]预期有用的治疗剂可以防止所有含PLD的应激颗粒蛋白定位至应激颗粒。在无处理或使用10μM硫辛酸或硫辛酰胺的情况下，本发明人使用1mM砷酸盐对一组表达应激颗粒应激颗粒形成至关重要的一种蛋白可能是靶标。这是神经退行性疾病疗法的有前景的性成。它们对不同蛋白质和不同应激的作用模式与对重要LCD应激颗粒蛋白(如TIA1)的相分离的复合作用或者通过特定应激共享的应激颗粒形[0346]FUS被募集到DNA损伤位点，并且促使ALS发病的潜在机制是由于应激颗粒的细胞硫辛酰胺(其溶解应激颗粒)对FUSGFP至DNA损伤位点的募集没有显著影响。1μM硫辛酰胺[0348]本发明人选择硫辛酸和硫辛酰胺以进行进一步表征，因为硫辛酰胺在体外影响[0350]测定了硫辛酸或硫辛酰胺是否影响FUS在体外发生相分离的条件。本发明人仅看到100μM硫辛酸或硫辛酰胺的微小影响，略微增加了可发生相分离的最小KCl浓度(图6A)。[0352]防止硬化和更快粗化表明FUS的直接相互作用，以增加在细胞中达到的浓度下的粒)在体内的聚集。本发明人首先使用过滤结合测定法在体外测试iPSC以检测不溶性FUS聚集体。这表明硫辛酰胺降低了砷酸盐应激细胞中不溶性FUS、野生型或P525L的量(图11B，C)。[0353]体外数据表明，硫辛酰胺作用机制需要硫辛酰胺和颗粒内FUS之间的短暂和弱相时也揭示酰胺基团的任何化学修饰(表现为应激细胞的组合，通过计算有细胞或无细胞培养的培养基之间的差来测定细胞摄取(图[0358]没有证据表明硫辛酰胺的代谢或任何其它化学修饰：来自细胞样品的NMR信号表胺浓度-这些指示平均胞内浓度为5.0±1.6mM(图7D)，明显高于在具有1％v/保留测定(其中来自细胞裂解物的聚集蛋白质倾向于保留在膜上)来测试硫辛酰胺是否对PAB-1、有LCD/RBP结构的应激颗粒蛋白和PABC1直系同源物的聚集的动物比例的剂量依赖[0364]为了研究硫辛酸的作用是否对具有LCD的RBP具有特异性，测试了两种球状蛋白短期内的行为有关。硫辛酸行为与直接与应激颗粒蛋白相互作用以减少应激颗粒形成和/者中的运动神经元缺陷一致的缺陷。iPSCMN可以通过硅树脂通道生长，将胞体定位在一但到60天时，在培养物中枯死的轴突物质已经在神经酰胺的情况下表达P525LFUS的iPSMN的轴突内溶酶体的转运(图12)。硫辛酰胺将P525L[0368]使用苍蝇模型进一步测试了硫辛酸是否在体内对运动神经元具有类似的有益作或R521C人类FUS(两者都是NLS突变体)的表达导致甚至更严重的运动缺陷。具有硫辛酸的[0370]应激颗粒被认为是ALS发病机理的关键位点。它们通过蛋白质液-液相分离形发明人寻找了通过与含LCD的应激颗粒蛋白直接相互作用而影响应激颗粒形成的化合物，复神经元和动物中由与家族性ALS相关的FUS突变体激下形成的应激颗粒(图3D)，但不是其它无膜界限的液体状区室-这包括由相同蛋白在由细胞的不同区域中形成的区室(细胞核旁斑和DNA损伤位点周围)或由其它蛋白形成的区室个数量级，并且比为在体外增加相分离FUS的流动性和减少硬化所需的浓度高得多(图5)。胞质和细胞核环境，使其成为更复杂的三相体系(可能与硫辛酰胺对FUS细胞核/细胞质分[0373]不能明确测定硫辛酰胺或硫辛酸的细胞靶标。尽管这些化合物在体外改变了FUS[0374]硫辛酰胺和硫辛酸可能影响多种FUS样应激颗粒蛋白或关键生命应激颗粒蛋白的相互作用以调节凝聚物性质而不是具有单种结合位点。尽管在体外对FUS凝聚物的物理性体外神经元中轴突稳定性缺陷以及黑腹果蝇中由与ALS发病机制相关的FUS突变体表达引们的工作显示了其通过新型作用机制在应激颗粒蛋白驱动的ALS发病机理模型中发挥功相关疾病中被简单地认为是抗氧化剂，但是活性不依赖于硫辛酸在细胞上的氧化还原状[0378]应激颗粒通过细胞质内蛋白质的相分离形成并且先前已经识别了一些调节相分离的小分子(特别是1,6-己二醇)，然而硫辛酸和硫辛酰胺作为治疗剂似乎远们在我们的筛选中识别的分子(杂三环化合物四环化合物以及硫辛酰胺和相关化合物)在4B)或由细胞质或细胞核中的其它蛋白质形成的细胞核区室(图4A)，并且被培养物中的膜界限的DNA损伤休憩区室的数目-在此可能也有物理化学机制的作用。[0380]硫辛酸是天然代谢物是令人感兴趣的。最近的数据已经识别了另一种代谢物ATP[0382]使用BAC重组工程产生表达具有C-末端GFP荧光标志物的蛋白质的稳定的Kyoto序列。将JS-SL-C1和KOLF-C1iPS细胞系用作分析DNA损伤响应和硫辛酰胺对P525LFUS作通过同时标签和诱变校正P521C突变。使iPS细胞在37℃和5％CO2下生长于TeSRE8培养基universit⃞tDresden的伦理委员会(EK45022009，EK393122012)批准。Aldrich)、米托蒽醌(M6545，SigmaAldrich)、N-(2-羟乙基)乙二胺(127582，SigmaAldrich)、1,4-二羟基蒽醌(Q906，SigmaAldrich)、氯化十六烷基吡啶(C9002，Sigma个细胞并且孵育24小时，然后用40μl新鲜培养基替换培养基，并且通过声分散(Labcyte备溶液加入砷酸钾至终浓度1mM，并将细胞再孵育1小时，然后用7.4％甲醛固定细胞，用1mg/mlHoechst33342和1:10,000CellMask蓝(ThermoFisher)染色。使用CellVoyager每个板包括用0.1％DMSO处理并用砷酸盐(化合物溶剂对照)应激的48个孔，以及带有亲本上)成像。将六个视场的悬浮液中的液滴成像为每个样品2μm步长的6个焦平面的最大强度物镜和CoolSNAPHQCCD相机(Photometrics)，使用DeltaVision气候控[0397]通过用其它条件代替1h1mM砷酸钾处理，获得了各种细胞应激：100μM鱼藤酮透压应激)。在正常生长培养基中42℃,30分钟(热应激)。100mM6-脱氧葡萄糖(D9761，辣根过氧化物酶偶联的抗-小鼠或抗-兔(Dianova1:[0400]除了以1.189×稀释步骤手动制备从80μM至～0.4nM在培养基中连续化合物稀释的样品的更大的统计学能力。所有样品中最终DMSO浓度为0.08每个板包括至少12个含0.08％DMSO的对照孔。使用ImageJ中的自定义宏分析细胞质FUS液滴数目和FUS的细胞核/值化的细胞核掩蔽的10px权重0.9反锐化滤镜之后的绿色图像进行强度阈值化而得到细胞质FUS液滴，并且通过在掩蔽为仅包括阈值化的细胞核的5px权重0.9反锐化滤镜和10px滚HealthcareLifeSciences)，用PlanApoN物浓度和0.3％DMSO的最终KCl浓度系列。[0403]在具有NikonApo100×NA1.49油浸物镜的NikonTiE倒置显微镜上使用YokogawaCSU-X1旋转盘头和AndoriXonEM+DU-897EMCCD相机进行FUSGFP液滴和纤维的光漂白(FRAP)后的荧光恢复。使用AndorFRAPPA光束[0405]进行活细胞的UV微辐射以诱导DNA损伤。通过加入1mM砷酸钾将表达野生型GFP的基1至163)，并使用1H-15N异核单量子相干NMR和先前描述的样品条件14在500μM化合物或等[0408]为了分析细胞对15N硫辛酰胺的摄取，将表达FUSGFP的HeLa细胞在6孔板中在补度的化合物以使信号最大化。然后取出并保留培养基(培养基样品)，用～2mlPBS洗涤细胞，然后通过胰蛋白酶消化除去细胞：加入0.3mlTrypLEExpress(12604013,辑的1H敏感性增强的HSQ用于定量15N硫辛酰胺浓度(参见补充信息)。使用由适当的溶剂和[0410]为了分析轴突枯死转运，将表达P525LFUS的AH-ALS1-F58iPSMN或表达WTFUS的等基因对照与2μM化合物或等体积的DMSO一起生长60天。在所述长度的培养中，表达WT体红色探针红(ThermoFisher)标记脂质体，并使用具有100×NA1.46油浸物镜和Andor[0413]使用用于应力颗粒形成和聚集的秀丽隐杆线虫模型分析了硫辛酸对应激颗粒蛋(Hum.Mol.Genet.27,1366-1381,2018)中描述了UAS-FUSWT、UAS-FUSP525L和UAS-FUS[0418]如前所述进行攀爬试验。简言之，在存在或不存在(±)-α-硫辛酸(0.43mM或敲击小瓶三次，并使用摄像机记录爬上小瓶壁上的蝇。记录在30秒内攀爬4cm的蝇的百分比。在GraphPadPrism6中使用学生T检验或单因素ANOVA与Tukey或Dunnet的多重比较测酰亚胺(660mg,5.60mmol)和(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基