（正式版）DB43∕T 1959-2020 《辣椒炭疽病菌检测技术规程》

ICS65.020CCSB16DB43DB43/T1959—2020辣椒炭疽病菌检测技术规程TechnicalRegulationsforDetectionofColletotrichumcomplexofCapsciumannuumL.2020-12-29发布2021-03-29实施湖南省市场监督管理局发布I Ⅲ 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 3 3 4 4 5 71辣椒炭疽病菌检测技术规程本文件规定了辣椒炭疽病菌高效、快速检测和种类鉴GB/T6682分析实验室用水规格和辣椒炭疽病菌属半知菌亚门、类腔菌纲、黑盘菌目、刺盘孢属真菌（Colletot前我省已经报的辣椒炭疽菌有辣椒胶孢炭疽菌（Colletotrichumgloeosporioides）、辣椒尖孢炭疽菌（Colletotrichumacutatum）、辣椒平头孢炭疽菌（Colletotrichumtruncatum）、辣椒红色炭疽菌利用真菌高度保守的核糖体基因转录间隔区（Internaltranscrib苷酸重复序列（Simplesequencerepeat,SSR）和真菌基因组中诱导坏死基因（Necgene，NIS）进行相应特异性扩增片4.1ITS进化速率较编码区快，在真菌的种间存在着丰富的变异，而在种内不同菌株间却高度保守，ITS-PCR鉴定不能区分不同种和相同种菌株间差异。根据辣椒胶孢炭疽病菌（Colletotrichum4.3NIS基因在真菌遗传中比较保守，但是不同菌株之间存在明显差异，为病原菌的分子检测提供靶2辣椒种子、茎秆、叶片和果实中炭疽病菌的检测和田间复合种群的PCR检测仪、凝胶成像仪、台式离心机、土壤取样器、纯水仪、电泳仪、旋涡振荡器等。苯酚/氯仿/异戊醇、乙醇、二甲基亚砜、氢氧化钠、除特别说明以外，本文件所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682的规定。3NISATGCAGTTCCGCGCTTCCATCGCCTTACTGGCTGCCGACGTAGTTC辣椒炭疽病菌PCR检测反应条件为：反应体积为25μL，其中包括10×PCRbuffer2.5μL，24NIS扩增出492-600bp左右的条带，其中492bp为辣椒胶孢炭疽病菌，512bp为辣椒尖孢炭疽病菌，其他不同炭疽病菌为不同大小的条带，可以判定辣椒样品经登记和经手人签字后妥善保存。对辣椒炭疽病菌PCR检测5(资料性)辣椒炭疽病菌相关资料A.1分布地区辣椒炭疽病是辣椒生产上的世界性病害，我国能够种植辣椒的产区均有发生和危害。在高温高湿条件下，流行蔓延快，为害时间长，为害重，损失大。辣椒炭疽病发生后一般减产20%～40%,严重的减产达50%以上，严重影响辣椒的产量，品质和种植效益。A.2为害症状辣椒炭疽病是辣椒生产上的主要病害，分布普遍且为害严重。叶片染病多发生在老熟叶片上，产生近圆形的褐色病斑，亦产生轮状排列的黑色小粒点，严重时可引致落叶(图A.1)。茎和果梗染病，出现不规则短条形凹陷的褐色病斑，干燥时表皮易破裂。果实染病，先出现湿润状、褐色椭圆形或不规则形病斑，稍凹陷，斑面出现明显环纹状的橙红色小粒点，后转变为黑色小点(图A.2)。天气潮湿时溢出淡粉红色的粒状粘稠状物。天气干燥时，病部干缩变薄成纸状且易破裂。图A.1辣椒炭疽病叶片和