土壤脲酶的测定方法-征求意见版

T/NAIAXXXX—2020

ICS13.080.30

B10

团体标准

T/NAIAXXXX—2020

土壤脲酶活性的测定

（苯酚钠—次氯酸钠比色法）

2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施

宁夏化学分析测试协会发布

T/NAIAXXXX—2020

土壤脲酶的测定

（苯酚钠—次氯酸钠比色法）

1范围

本标准规定了土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）。

本标准适用于各类土壤脲酶的测定（苯酚钠—次氯酸钠比色法）。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适

用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T1121.1土壤检测第一部分：土壤样品的采集、处理和贮存

3原理

土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，经土壤脲酶酶促基质水解生成氨，氨与苯酚—

次氯酸钠在常温条件下作用生成蓝色靛酚，颜色深度与生成氨的量呈正比，用比色法测定氨

的量来表示脲酶活性。

4试剂和溶液

除非另有说明外，本方法均使用符合国家标准的分析纯试剂，分析用水为GB/T6682规

定的三级水。

4.1甲苯（C7H8）。

4.2尿素（CON2H4）。

4.3柠檬酸（C6H8O7）。

4.4氢氧化钾（KOH）。

4.5苯酚钠（C6H5ONa）。

4.6次氯酸钠溶液

根据市售次氯酸钠溶液浓度稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%。

4.7尿素溶液（100g/L）

称取10g（精确至0.01g）尿素，用水溶解，定容至100mL。

4.8柠檬酸盐缓冲液（pH6.7）

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称取184g（精确至0.01g）柠檬酸和147.50g氢氧化钾各溶于水中，将两溶液合并，

用1mol/L氢氧化钠将pH调至6.7，用水定容至1000mL。

4.9苯酚钠溶液（1.35mol/L）

称取62.5g（精确至0.01g）苯酚钠溶于少量乙醇，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，用乙

醇定容至100mL（A液）；称取27g（精确至0.01g）氢氧化钠，用水溶解后定容至100mL

（B液）。将A、B溶液保存在4℃冰箱中。使用前将A液、B液各20mL混合，用水定容至100mL。

4.10氨的标准溶液

精确称取0.4717g（精确至0.0001g）经干燥箱105℃烘干3h硫酸铵溶于水并定容至

1000mL，得到1mL含有0.1mg氨的储备溶液。使用前将上述溶液用水稀释10倍，配制成浓

度为0.01mg/mL的工作液。

5仪器设备

5.1电子天平：感量0.0001g和0.01g。

5.2恒温培养箱（37℃±1℃）。

5.3分光光度计（578nm）。

6分析步骤

称取5g土样（精确至0.0001g）（如含量高可适当减少称样量）于100mL具塞三角瓶

中，加入1mL甲苯（4.1），振荡均匀，15min后加入10mL100g/L尿素溶液（4.7）和20mL

pH6.7柠檬酸盐缓冲溶液（4.8），摇匀后在37℃±1℃恒温箱培养24h。培养结束后过滤，

过滤后吸取1.00mL滤液至50mL容量瓶中，再依次加入4mL苯酚钠溶液（4.9）和3mL次氯

酸钠溶液（4.6），边加边摇匀。20min后显色，用水定容至50mL。1h内在分光光度计578

nm波长处比色。（靛酚的蓝色在1h内保持稳定）。

标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别吸取0.00、1.00、3.00、5.00、7.00、9.00、

11.00、13.00mL工作液（4.10），移于50mL容量瓶中，然后加水20mL。再依次加入4mL

苯酚钠溶液（4.9）和3mL次氯酸钠溶液（4.6），边加边摇匀。20min后显色，定容，配成

浓度为0.0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2、2.6ug/mL的一组标准浓度。1h内在分光光

度计578nm波长处比色。然后以氨浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

注意事项:

①每一个样品应做一个无基质对照，以等体积的水代替基质（100g/L尿素水溶液），

其他操作与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。

②整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验试剂纯度

和基质自身分解，即空白试验。

③如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样。

7结果计算

脲酶活性以24h，1g风干土壤可水解生成氨量的毫克数表示，按式（1）计算：

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（CC)VN

X12(1)

mf1000

式中：

X样品中脲酶的含量（mg/g·24h）；

C1样品加基质吸光值由标准曲线求得的氨量（ug/mL）；

C2样品未加基质吸光值由标准曲线求得的氨量（ug/mL）；

V显色定容体积（mL）；

N为分取倍数=浸出液体积（mL）／吸取滤液体积（mL）；

M表示烘干土重（g）；

F表示风干土壤占新鲜土壤的比例。

结果保留三位有效数字。

8精密度

在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

_________________________________

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前言

本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》规定编写。

本标准由宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）提出。

本标准由宁夏化学分析测试协会归口。

本标准起草单位：宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）、宁夏大学、银川能源学院、

宁夏化学分析测试协会。

本标准主要起草人：白玲、王京、任亚丽、张亮亮、丁园、杨洁、鲁静、张小飞、刘娜

娜。

本标准于2020年XX月XX日首次发布。

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土壤脲酶的测定

（苯酚钠—次氯酸钠比色法）

1范围

本标准规定了土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）。

本标准适用于各类土壤脲酶的测定（苯酚钠—次氯酸钠比色法）。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适

用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T1121.1土壤检测第一部分：土壤样品的采集、处理和贮存

3原理

土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，经土壤脲酶酶促基质水解生成氨，氨与苯酚—

次氯酸钠在常温条件下作用生成蓝色靛酚，颜色深度与生成氨的量呈正比，用比色法测定氨

的量来表示脲酶活性。

4试剂和溶液

除非另有说明外，本方法均使用符合国家标准的分析纯试剂，分析用水为GB/T6682规

定的三级水。

4.1甲苯（C7H8）。

4.2尿素（CON2H4）。

4.3柠檬酸（C6H8O7）。

4.4氢氧化钾（KOH）。

4.5苯酚钠（C6H5ONa）。

4.6次氯酸钠溶液

根据市售次氯酸钠溶液浓度稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%。

4.7尿素溶液（100g/L）

称取10g（精确至0.01g）尿素，用水溶解，定容至100mL。

4.8柠檬酸盐缓冲液（pH6.7）

T/NAIAXXXX—2020

称取184g（精确至0.01g）柠檬酸和147.50g氢氧化钾各溶于水中，将两溶液合并，

用1mol/L氢氧化钠将pH调至6.7，用水定容至1000mL。

4.9苯酚钠溶液（1.35mol/L）

称取62.5g（精确至0.01g）苯酚钠溶于少量乙醇，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，用乙

醇定容至100mL（A液）；称取27g（精确至0.01g）氢氧化钠，用水溶解后定容至100mL

（B液）。将A、B溶液保存在4℃冰箱中。使用前将A液、B液各20mL混合，用水定容至100mL。

4.10氨的标准溶液

精确称取0.4717g（精确至0.0001g）经干燥箱105℃烘干3h硫酸铵溶于水并定容至

1000mL，得到1mL含有0.1mg氨的储备溶液。使用前将上述溶液用水稀释10倍，配制成浓

度为0.01mg/mL的工作液。

5仪器设备

5.1电子天平：感量0.0001g和0.01g。

5.2恒温培养箱（37℃±1℃）。

5.3分光光度计（578nm）。

6分析步骤

称取5g土样（精确至0.0001g）（如含量高可适当减少称样量）于100mL具塞三角瓶

中，加入1mL甲苯（4.1），振荡均匀，15min后加入10mL100g/L尿素溶液（4.7）和20mL

pH6.7柠檬酸盐缓冲溶液（4.8），摇匀后在37℃±1℃恒温箱培养24h。培养结束后过滤，

过滤后吸取1.00mL滤液至50mL容量瓶中，再依次加入4mL苯酚钠溶液（4.9）和3mL次氯

酸钠溶液（4.6），边加边摇匀。20min后显色，用水定容至50mL。1h内在