第6章 病理组织切片常用特殊染色

病理检验技术

病理组织切片常用特殊染色高职高专医学检验技术专业系列教材目

录第一节结缔组织多色染色01第二节结缔组织多色染色02第三节弹性纤维染色03第四节网状纤维染色04目

录第五节肌肉组织染色05第六节脂质染色06第七节糖原染色07第八节黏液物质染色08目

录第九节色素染色09第十节病原微生物染色10学习目标知识目标能力目标素质目标掌握各种特殊染色的应用；熟悉特殊染色的的染色方法；了解特殊染色常用染液的配制。能够对常用特殊染色的结果判读；能熟练对组织进行特殊染色操作。培养严格遵守操作规程、规范操作的职业精神，严谨认真的工作态度、一丝不苟的工作作风。第一节

结缔组织多色染色一、结缔组织多色染色的应用一、结缔组织多色染色的应用结缔组织特殊染色的方法多数是使用混合染料或不同染料连续染色，通常能够以三种以上的颜色使结缔组织成分选择性着色。清晰地显示出胶原，软骨，粘液，淀粉样物质和纤维素等。这些方法被称为结缔组织多色染色法，是显示与鉴别结缔组织的重要方法。

二、常用染色方法Masson三色染色法1.染液配制（1）Weigert铁苏木素液：甲液：苏木素 1g95%乙醇或无水酒精100ml乙液：30%三氯化铁水溶液 4ml盐酸 1ml蒸馏水 95ml使用前将两液体等量混合。（2）丽春红酸性品红液：丽春红0.7g酸性品红0.3g冰醋酸1ml蒸馏水99ml（3）2%醋酸苯胺蓝染液：

苯胺蓝2g

2%冰醋酸水溶液100ml二、常用染色方法Masson三色染色法2.染色步骤（1）切片脱蜡至蒸馏水。（2）Weigert铁苏木素染色5-10分钟。流水稍洗。（3）1%盐酸乙醇分化，流水冲洗数分钟。（4）丽春红酸性品红液染色10分钟，蒸馏水稍冲洗。（5）1%磷钼酸水溶液处理3分钟，镜下控制见肌肉纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。（6）不经水洗，直接用苯胺蓝液染5分钟。（7）1%冰醋酸处理2分钟。（8）95%乙醇、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。二、常用染色方法Masson三色染色法3.染色结果染色结果胶原纤维呈蓝色，肌纤维、细胞质和红细胞呈红色，细胞核呈蓝褐色。第二节

胶原纤维染色一、胶原纤维染色的应用一、胶原纤维染色的应用1.识别和区分正常组织与病变组织中的胶原纤维含量、分布和形态变化，例如，在肿瘤组织学中。2.帮助判断肿瘤是否来源于纤维细胞或判断纤维化程度，如在心肌瘢痕灶、肝硬化的早期阶段以及纤维增生或纤维减少的各种疾病中。二、常用染色方法VanGieson苦味酸酸性品红染色发（VG染色法）1.染液配制（1）Weigert铁苏木素液：甲液：苏木素 1g95%乙醇或无水酒精100ml乙液：29%三氯化铁水溶液

4ml盐酸 1ml蒸馏水 95ml临用前将两液体等量混合。（2）VanGieson苦味酸酸性品红液：甲液：1.22%苦味酸饱和水溶液90ml乙液：1%酸性品红水溶液

10ml两液提前配制，临用前取甲液9份、乙夜1份混合后使用。三、结缔组织染色过程中的注意事项VanGieson苦味酸酸性品红染色发（VG染色法2.染色步骤（1）切片脱蜡至蒸馏水。（2）Weigert铁苏木素染色5-10分钟，流水稍洗。（3）1%盐酸乙醇分化，流水冲洗数分钟。（4）VanGieson染液染色2-5分钟。（5）倾去染液，直接用95%的乙醇迅速分化和脱水。（6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。三、结缔组织染色过程中的注意事项VanGieson苦味酸酸性品红染色发（VG染色法3.染色结果胶原纤维呈鲜艳的红色或粉红色，肌纤维、红细胞呈不同程度的黄色至橙黄色，细胞核呈蓝褐色。第三节

弹性纤维染色一、弹性纤维染色的应用一、弹性纤维染色的应用1.血管病变诊断2.心血管疾病诊断3.鉴别如弹力纤维瘤4.肺部疾病分析5.其他组织病变评估二、常用染色方法维多利亚蓝一丽春红s染色法1.染液配制（1）酸性高锰酸钾溶液甲液：高锰酸钾0.5g蒸馏水

100m1乙液：硫酸0.5ml蒸馏水

加至100ml使用前将两液等量混合。（2）1%草酸溶液草酸1g蒸馏水100ml二、常用染色方法（3）维多利亚蓝染液：维多利亚蓝2g

糊精0.5g

间苯二酚4g

蒸馏水200ml将上述试剂成分进行混合并加热，持续搅拌约5分钟直至煮沸。向沸腾的混合液中缓慢加入30%的三氯化铁水溶液25ml，并保持煮沸状态继续搅拌3分钟。在此期间，溶液会逐渐转变成胶体状，此时即可停止加热。待溶液冷却后过滤，滤纸及残留在滤纸上的物质应一起被放置到60℃恒温箱中烘干。经烘烤，残渣会形成深蓝色、质地细腻的粉末颗粒。将干燥后的细颗粒溶解于400ml70%的乙醇溶液。加4ml浓盐酸和5g苯酚，混合物需静置大约一周时间以充分成熟，才能使用。丽春红S染液：0.5%丽春红水溶液15ml，苦味酸饱和水溶液（1.22%）85ml。二、常用染色方法2.染色步骤（1）切片脱蜡至蒸馏水。（2）酸性高锰酸钾溶液氧化5分钟，水洗。（3）1%草酸溶液漂白1-2分钟，流水稍洗。（4）70%乙醇洗2分钟。（5）维多利亚蓝染液1-2小时。（6）70%乙醇分化数秒，直至切片不再脱色为止，水洗。（7）丽春红S染液5分钟。（8）倾去染液，直接用95%乙醇迅速分化和脱水。（9）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封闭。二、常用染色方法3.染色结果弹力纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。第四节

网状纤维染色一、网状纤维染色的应用1.网状纤维染色在诊断原位癌与早期浸润癌时至关重要：原位瘤保有完整基底膜，而浸润癌则破坏之。2.该染色法区分上皮性癌症和间叶性肉瘤：肉瘤中网状纤维散在分布，癌巢周围则包绕着网状纤维。3.显示病变组织网状纤维的结构变化（如完整性、破坏等），有助于评估疾病进程、严重程度及预后。4.分析网状纤维的数量和分布特征，可鉴别不同来源或类型的肿瘤，例如血管相关肿瘤或其他特定卵巢肿瘤。二、常用染色方法Gordon-Sweet网状纤维染色法1.染液配制（1）酸性高锰酸钾溶液（2）1%草酸溶液（3）2%硫酸铁铵溶液（4）Gordon-Sweet氨银染液（5）核固红染液二、常用染色方法2.染色步骤(1)石蜡切片，脱蜡至水。(2)酸化高锰酸钾水溶液氧化5分钟，水洗。(3)1%草酸水溶液漂白1-2分钟，水洗、蒸馏水洗。(4)入2.5%硫酸铁铵水溶液媒染5-15分钟，蒸馏水洗2次。(5)入Gordon-Sweet氨银液1-2分钟，蒸馏水洗3次。(6)10%福尔马林液还原1分钟，流水冲洗5-10分钟。(7)用核固红复染5-10分钟，稍水洗。(8）梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3.染色结果

网状纤维呈黑色，胶原纤维星黄棕色，细胞核呈红色第五节

肌肉组织染色一、肌组织的构成及形态特点肌组织分为三大类型：骨骼肌、心肌和平滑肌。二、肌组织染色的应用在心肌和骨骼肌出现病变时，常规的HE染色可能不足以清晰揭示肌纤维内部的变性病变，如肌质凝聚、断裂等病理改变。为了准确评估这些变化，并有效鉴别横纹肌肉瘤与各类未分化的间胚叶肿瘤，采用针对肌纤维的特殊染色技术进行观察是十分必要的。三、肌组织的染色方法Mallory磷钨酸苏木精染色法1.染液配制（1）酸性高锰酸钾溶液（2）1%草酸溶液：2.染色步骤(1)石蜡切片，脱蜡至水。(2)酸化高锰酸钾水溶液氧化5分钟，水洗。(3)1%草酸水溶液漂白1-2分钟，水洗、蒸馏水洗。(4)Mallory磷钨酸苏木精染液12-48小时。(5)95%乙醇快速分化。(6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

三、肌组织的染色方法3.染色结果橫纹肌纤维、神经胶质纤维、细胞核等呈紫蓝色，胶原纤维、网状纤维、软骨基质星棕红色。缺血缺氧早期病变心肌呈紫蓝色或棕黄色。第六节

脂质染色一、脂质的构成成分二、脂质染色的应用

能有效区分多种肿瘤类型，如脂肪肉瘤与黏液肉瘤、不同卵巢纤维源性肿瘤及肾实质恶性与良性肿瘤。同时，利用脂类物质染色技术，可以精准识别脂肪变性与空泡变性、糖原沉积等病变，并在判断疾病中脂质异常及诊断脂肪栓塞等方面发挥关键作用。三、常用染色方法苏丹III染色法1.染液配制2.染色步骤（1）冷冻切片厚8um-10um，蒸馏水稍洗。(2)harris苏木素1-2分钟。(3)自来水洗、盐酸酒精分化、返蓝，水洗、蒸馏水洗。(4)70%乙醇浸洗。(5)苏丹III染液30-60分钟，如果置于56℃温箱中可适当缩短时间。(6)70%乙醇分化数秒。(7)蒸馏水洗，在空气中稍晾干，甘油明胶液封固。3.染色结果

脂肪呈橘红色细胞核呈淡蓝色第七节

糖原染色一、糖原染色的应用1.通过糖原染色，可在HE染色无法区分的情况下，确定细胞内空泡成分是糖原还是溶解的脂质。2.糖原染色对于研究心肌病变及心血管疾病十分关键，能揭示心肌缺血时糖原含量的早期变化，如在坏死区域观察到糖原明显减少。3.在诊断糖原沉积病、糖尿病时，该技术直观展示受累器官和细胞内部糖原的具体分布与沉积程度。4.在特定肿瘤鉴别中，如肝癌、横纹肌肉瘤等，糖原染色有助于根据糖原的存在及其分布特点辅助诊断。二、糖原的组成成分和特性糖原是一种由多糖衍生的单纯的多糖，作为人体内糖分的主要储存形式，它主要存在于细胞质内，通常以形态各异的圆形颗粒结构存在，尤其在肝脏、心肌和骨骼肌中含量最为丰富。三、常用染色方法和注意事项过碘酸雪夫染色法(PAS法)1.染液配制2.染色步骤(1)使用Gendre液或Carnoy液对组织进行固定。(2)制作石蜡切片并进行脱蜡至水，蒸馏水冲洗。(3)在过碘酸氧化液中浸染5~10分钟，蒸馏水冲洗。(4)入Schiff液中10~30分钟，自来水冲洗10分钟。(5)苏木精对细胞核进行浅染3.5分钟左右，盐酸乙醇分化处理，稍水洗。(6）梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3.染色结果

糖原呈红色，细胞核呈蓝色。第八节

黏液物质染色一、黏液的构成成分及特性黏液可分为中性和酸性两类。二、黏液物质染色的应用1.黏液物质染色技术在病理学中广泛应用，能清晰揭示体内黏液相关异常，如水肿、变性及过度沉积等病变。2.在肿瘤诊断中，该技术对于识别多种含黏液成分的恶性肿瘤至关重要，包括胃癌、呼吸道肿瘤以及黏液瘤等多种类型。3.除了肿瘤，黏液染色还对非肿瘤疾病如动脉硬化、胶原病研究，以及评估慢性胃炎肠上皮化生状况提供关键信息。三、染色方法爱新蓝-过碘酸雪夫染色法(AB-PAS法）1.试剂配制（1）3%冰醋酸水溶液：（2）1%爱新蓝染液：（3）0.5%高碘酸溶液：（3）Schiff溶液（雪夫试剂）同第七节糖原染色中的PAS法。2.染色步骤(1)切片脱蜡至水，蒸馆水稍洗。(2)3%冰醋酸浴液3分钟。(3)1%爱新蓝染液10-30分钟，水洗。(4)0.5%高碘酸溶液氧化10分钟，稍水洗。三、染色方法爱新蓝-过碘酸雪夫染色法(AB-PAS法）

(5)入Schiff液中10-30分钟，自来水冲洗10分钟。(6)苏木精3-5分钟左右，盐酸乙醇分化处理，稍水洗。(7）梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3.染色结果

酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，中性和酸性黏液混合物星紫红色，细胞核星蓝色第九节

色素染色色素染色机体组织内出现的色素，可按来源和性质分为三大类：1.内源性色素2.外源性色素3.人为色素一、黑色素染色（一）黑色素染色的应用主要用于黑色素瘤的诊断，尤其是分化差的黑色素瘤;（二）Masson-Fontana染色法1.染液配制（二）Masson-Fontana染色法2染色步骤(1)切片脱蜡至水，蒸馆水稍洗。(2)Masson-Fontana染液室温避光浸染12~18小时或更长时间，蒸馏水洗。(3)0.2%氣化金溶液1分钟，蒸馏水洗