第5章 病理组织切片常规染色

病理检验技术

病理组织切片常规染色高职高专医学检验技术专业系列教材目

录第一节病理切片染色概述01第二节苏木精-伊红染色02学习目标知识目标能力目标素质目标

树立良好的医德医风和科学严谨的工作作风能够独立配置苏木精-伊红染色液，独立完成HE染色掌握常用染色术语的含义，掌握苏木精-伊红染色第一节

病理切片染色概述一、染色的目的

它的主要目的是增强组织中各种成分在光学显微镜下的可见性和辨识度。当病理组织标本被制作成切片后，需要通过特定的染色剂进行处理。这些染料能够选择性地与目标组织或细胞成分结合，使它们呈现出特定的色彩。这些色彩的变化不仅使组织和细胞成分更加鲜明可见，更重要的是，它们改变了组织和细胞的折射率，使得在显微镜下观察时，各种组织结构的界限更加清晰，极大地促进了我们对组织结构和病变的深入理解和准确诊断。二、染色机制

染色，作为一个将染色剂与组织细胞紧密结合的过程，其背后的反应机制显得尤为复杂，且至今科学家们仍在努力探索其完整细节。当前，学术界普遍认为，这一反应过程不仅涉及了深层次的化学作用，同时也涵盖了物理作用的参与。换句话说，组织细胞的染色效果，实际上是这两种作用共同交织、协同作用的结果。这种综合作用的机制，为我们理解和应用染色技术在医学、生物学等领域提供了重要的基础。(一)染色的物理作用1.渗透作用

组织具有许多微小的孔隙，染料通过渗透进入组织，它并非与组织牢固地结合，而是通过简单的物理过程进入。这可以被视为染料与组织之间的简单物理交互，类似于混合过程。2.吸附作用

吸附作用是指一种物质从其周围将另一种物质的分子、原子或离子集中到界面上的过程。3.吸收作用

又称溶解作用。组织吸收染料并形成牢固的结合。(二)染色的化学作用三、常用染色剂

(一)染色剂的性质染色剂又称染料，染色剂又称染料，是一类有色的无机或有机化合物。在组织学染色中常用的染料主要为含有苯环和杂环的有机化合物。

1.发色团

也称为色原，是染料分子中能够产生颜色的基团。2.助色团

助色团是染料分子中的一种基团，它能够与发色团产生电离并形成盐类，从而加深染料分子的颜色，并与被染物质分子形成亲和力。三、常用染色剂(二)染色剂的分类1.按染色剂的来源分类(1)天然染料；(2)人工合成染料；(3)无机化合物2.按染色剂的化学反应分类(1)碱性染料；(2)酸性染料；(3)中性染料3.按染料的主要用途分类(1)细胞染料；(2)组织染料四、常用染色术语1.普通染色2.特殊染色3.单一染色4.复染色5.多种染色6.直接染色、间接染色7.媒染剂、促染剂、分化剂8.异染性染色9.蓝化

五、染色方法的分类

1.按染色的手段分类2.按染色对象的成分分类3.按染色对象的种类分类

六、进行性染色与退行性染色

(一)进行性染色

进行性染色是一种逐渐加深染色的方法，从浅到深地染色组织成分，直至达到所需的染色强度为止。在这种方法中，通常使用较低浓度的染料溶液，以获得适当的染色效果。在染色过程中，需要不断在显微镜下观察样品，以控制染色的程度，避免过度染色。相比于其他方法，进行性染色不需要使用盐酸乙醇等分化剂。(二)退行性染色

退行性染色的特点是先使组织过度染色，超过所需的程度，然后再使用某些溶液（如盐酸乙醇）来去除过多的染色剂，最终达到适当的染色深度,同时使不应着色的组织细胞脱色，这个脱色步骤被称为“分化”。在分化过程中，通过显微镜下的观察来控制染色的程度是必不可少的。HE染色中用苏木精染细胞核多用退行性染色。第二节

苏木精-伊红染色苏木精(Hematoxylin)和伊红(Eosin)染色，简称HE染色，是组织学、病理学最广泛应用的基本染色方法，也被称为常规染色。HE染色主要用于显示各种组织和病变的一般形态结构，可以进行全面的观察。因此，在病理诊断、教学和科研方面都具有重要的价值。一、染色的原理

(一)苏木精染色的基本原理

通常，苏木精被称为碱性染料，因为它在碱性条件下呈现出蓝色。但实际上，苏木精本身并不是碱性染料，而是一种前体物质。在氧化的过程中，苏木精转变为酸性染料苏木红。当苏木红与铝结合时，形成一种带正电荷的蓝色色精。只有这种蓝色色精在碱性条件下才表现出碱性。细胞核的染色质主要由DNA组成，DNA的磷酸基在双螺旋结构中呈现负电荷，因此具有酸性。在染色过程中，带负电荷的细胞核与带正电荷的蓝色色精通过离子键或氢键结合，从而完成染色。因此，苏木精在碱性溶液中呈现出蓝色，使细胞核染成蓝色。一、染色的原理

(二)伊红染色的基本原理

伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中会离解成带负电荷的阴离子。细胞质内主要成分是蛋白质，蛋白质是一种两性化合物，在其等电点(pH4.7～5.0)时，不表现出电性。在这种情况下，酸性或碱性染料很难染色细胞质。当pH调至6.7～6.8时，高于蛋白质的等电点，蛋白质呈酸式电离，此时带负电荷的阴离子就能被带正电荷的染料染色，同时也会染色胞核，造成胞核和胞质难以区分。为了解决这个问题，需要将pH调至低于细胞质的等电点，这样细胞质中的蛋白质就会带正电荷(阳离子)，从而可以被带负电荷的伊红染料染色。通常情况下，细胞质、红细胞和结缔组织会被伊红染成红色或粉红色，与被苏木精染成蓝色的细胞核形成鲜明对比。二、染液的配制

(一)苏木精液1.Harris苏木精液，最常用；2.Ehrlich苏木精液的配制；3.Gi11改良苏木精液的配制4.Mayer改良苏木精液的配制(二)分化液(三)氢氧化氨液蓝化液(四)伊红染液三、染色的程序

苏木精伊红染色简称HE染色，是组织学技术中常用的标准染色方法。在优质的HE染色切片中，红色和蓝色相互映衬，层次清晰，色彩浓淡均匀。(一)常规石蜡切片HE染色1.脱蜡至水2.染色3.脱水、透明4.封固(二)冷冻切片HE染色(三)快速石蜡切片染色四、染色的结果

HE染色是一种常规染色方法，能够使细胞核呈现出鲜明的蓝色，软骨基质和钙盐颗粒染成深蓝色，黏液染成灰蓝色。同时，细胞质被伊红染成淡红色，胶原纤维呈淡粉红色，细胞质内的嗜酸性颗粒呈鲜红色，而红细胞呈橘红色。在优质的HE染色切片中，细胞核和细胞质呈现出蓝色和红色相映，色彩鲜艳美丽。胞核清晰可见，核膜和核染色质颗粒也十分清晰。此染色方法能够展示组织或细胞的一般形态和多种物质成分，并且能够长期保存而不褪色。