第11章 病理检验前沿技术

病理检验技术

病理检验前沿技术高职高专医学检验技术专业系列教材目

录第一节

分子病理学技术01第二节组织芯片技术02学习目标知识目标能力目标素质目标掌握原位核酸分子杂交的基本原理；熟悉分子病理学技术的操作步骤；了解组织芯片技术的应用。能运用病理检验前沿技术进行科学研究；能熟练进行分子病理学技术常规操作。培养严格遵守规范操作的职业精神；培养临床思维能力及科学严谨的学习态度。第一节

分子病理学技术一、原位核酸分子杂交（一）基本原理

在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知DNA或RNA核苷酸片段，按核酸杂交中碱基配对原则(A=T，A=U，C=G)，将探针（含放射性或非放射性的外源性核酸)与染色体、细胞或组织上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经过一定的检测手段将待测核酸在染色体、细胞或组织上的位置显示出来。一、原位核酸分子杂交（二）原位核酸分子杂交技术的材料和步骤1.材料：冰冻切片、石蜡切片、细胞涂片或贴片2.步骤：（1）杂交前（2）杂交（3）杂交后二、原位聚合酶链反应技术

（一）原位聚合酶链反应技术基本原理

聚合酶链反应在体外对DNA特定序列进行高效快速扩增的一项新技术，经过高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环，将细胞核内的双股DNA经过加热变性形成两条单链的DNA链，可以成百万倍地特异性扩增某一DNA片段，其反应过程类似于体内的DNA半保留复制过程。

原位聚合酶链反应技术是PCR和原位杂交两种技术原理的综合，根据检测信号的不同，可分为直接法和间接法两种。

二、原位聚合酶链反应技术（二）原位聚合酶链反应技术基本步骤

包含：标本制备、预处理、反转录反应(检测mRNA要做此步)、扩增、扩增后处理及原位检测。三、DNA序列测定DNA序列测定也称DNA测序技术，即分析特定DNA片段的碱基序列的排列顺序，可进一步研究或改造目的片段。测序的目的是确定重组DNA的方向与结构，其广泛应用于肿瘤诊断、生物技术、法医生物学等领域，已成为不可缺少的技术，极大地推动了生物学和医学的研究和发现。

根据出现时间的顺序不同及测序方案的不同，目前DNA测序技术大致可分为一代测序(Sanger测序)、二代测序及三代测序。第二节

组织芯片技术

（一）概述

组织芯片技术又称“组织微阵列（tissuemicroarray，TMA）技术”，是以形态学为基础的分子生物学新技术，通过微加工和微电子等微缩技术，将大量生物检测相关的材料依靠生物分子间的特异性相互作用、整齐有序的集成于同一张芯片表面，建立一个微型的生化分析系统，从而实现对基因、蛋白质等生物分子准确、快速、高通量的检测。

（二）制备组织芯片蜡块的常用设备

主要包含：组织阵列仪、电热恒温箱、-20℃及4℃冰箱、医用高压锅、医用烤箱、电子分析天平、光学倒置显微镜、小型高速离心机、全自动组织脱水机、全自动石蜡组织包埋机、石蜡切片机、摊片烤片机。（三）制备组织芯片蜡块的工作步骤

组织芯片制作的基本步骤包括：蜡块的制备及选取、提取组织芯片、构建阵列及数据库、组织芯片的裱片等。（四）组织芯片技术的应用

组织芯片技术不论是在人类基因组的研究方面，还是在人类疾病的基础研究、临床病理的研究与诊断、药物的筛选、癌基因的寻找，乃至肿瘤发生、发展及预后相关的生物分子标记物的确定，甚至整个生命科学的基础研究、应用研究领域都得到广泛的应用。（五）组织芯片技术的优缺点