鬼针草多糖提取工艺优化及其抗氧化活性研究

目录TOC\o"1-3"\h\u18566摘要 鬼针草多糖提取工艺优化及其抗氧化活性研究摘要：目的：本研究聚焦于鬼针草多糖的提取工艺优化及其抗氧化活性机制解析。方法：本研究采用超声辅助提取技术，采用以鬼针草为研究对象，以多糖得率作为评价指标，通过单因素实验设计系统考察关键工艺参数的交互效应。具体因变量有液料比、超声时长、超声功率、超声温度等，通过响应曲面分析，优选出最佳的超声提取条件；再以苯酚-浓硫酸为指标，测定其多糖的理化性质，并测定其体外抗氧化性。研究了超声波对鬼针草多糖的影响，确定了超声波对鬼针草多糖得率的影响因素。该工艺重复3次可使多糖的浸出率分别为13.36%,13.61%,12.59%，平均得率13.19%，与预期结果基本一致。在以0.043mg/mL为浓度的鬼针草多糖溶液时，鬼针草多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和2,2’-联氨-双-3-乙基苯并噻唑-6-磺酸（ABTS）的去除效果分别为90.36%和98.89%。对羟基自由基的去除效果可达35.56%。结论：该方法的最优条件符合要求。而鬼针草多糖对DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基的清除效率呈现显著的正向剂量-效应关联。在浓度范围内，鬼针草多糖对三类自由基的清除率随浓度升高而递增，其中对ABTS自由基的清除效能最为突出，表明其具有广谱且高效的自由基清除特性。鬼针草多糖展现出作为天然抗氧化剂的显著开发潜力。关键词：多糖；鬼针草；超声波辅助提取；响应面法；抗氧化活性前言概述鬼针草（BidenspilosaLinn）俗名：金盏银盘、三叶鬼针草、白花鬼针草，为菊科（Compositae）鬼针草属（BidensL）1年生植物，鬼针草的干燥全草，在亚洲，美洲等地区具有分布，在我国主要分布在华北、华东、华中、华南、西南各省区。作为传统的中药材，鬼针草资源丰富，药用历史悠久，有广泛的治疗作用。功效是清热解毒，利尿等，味甘淡苦，性微寒，归肝、肺、大肠经；临床用于治疗肾炎、痢疾、肠胃炎等症状。新近的报道表明，鬼针草属植物具有抗糖尿病，抗炎，抗高血压等作用ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>孙萌</Author><Year>2019</Year><RecNum>128</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[1]</style></DisplayText><record><rec-number>128</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">128</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>孙萌</author><author>周洪雷</author><author>张玲</author><author>李传厚</author><author>倪琳琳</author><author>李梓欣</author><author>孔晓妮</author></authors></contributors><auth-address>山东中医药大学;</auth-address><titles><title>鬼针草总黄酮有效部位质量控制研究</title><secondary-title>当代化工</secondary-title></titles><periodical><full-title>当代化工</full-title></periodical><pages>467-469+473</pages><volume>48</volume><number>03</number><keywords><keyword>鬼针草总黄酮</keyword><keyword>含量</keyword><keyword>HPLC</keyword></keywords><dates><year>2019</year></dates><isbn>1671-0460</isbn><call-num>21-1457/TQ</call-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.13840/21-1457/tq.2019.03.007</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[1]。根据现代研究，鬼针草的主要成分是：黄酮类，聚乙炔类、三萜类和酚类物质。此外，还包含了甾醇类化合物，生物碱、糖、维生素、挥发油、胆碱等。还含有多种氨基酸及9种常量微量元素ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>刘娜</Author><Year>2019</Year><RecNum>127</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[2]</style></DisplayText><record><rec-number>127</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">127</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>刘娜</author></authors></contributors><auth-address>福建医科大学附属龙岩市第一医院;</auth-address><titles><title>鬼针草药理作用研究进展</title><secondary-title>海峡药学</secondary-title></titles><periodical><full-title>海峡药学</full-title></periodical><pages>64-67</pages><volume>31</volume><number>12</number><keywords><keyword>鬼针草</keyword><keyword>药理作用</keyword><keyword>开发利用</keyword></keywords><dates><year>2019</year></dates><isbn>1006-3765</isbn><call-num>35-1173/R</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[2]。当前中药多糖的提取技术体系主要涵盖以水为介质溶剂浸提法、生物酶解法、以酸或碱为试剂的化学助提法、以超声波或微波辅助提取技术的物理场强化法等。超声辅助提取技术基于声空化效应与机械扰动耦合机制，通过高频声波在液体介质中诱导产生瞬态空化气泡，对细胞壁上的物质进行破碎，从而加快萃取速度。研究表明，与传统热水浸提相比，超声辅助提取多糖提取效率高、更节能省时ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[3-5]。苯酚-浓硫酸法ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>何佩娟</Author><Year>2019</Year><RecNum>129</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[6]</style></DisplayText><record><rec-number>129</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">129</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>何佩娟</author><author>张宇洁</author></authors></contributors><auth-address>西安医学院药学院;</auth-address><titles><title>多糖含量测定的方法综述</title><secondary-title>现代食品</secondary-title></titles><periodical><full-title>现代食品</full-title></periodical><pages>27-31</pages><number>02</number><keywords><keyword>多糖</keyword><keyword>含量测定</keyword><keyword>综述</keyword></keywords><dates><year>2019</year></dates><isbn>2096-5060</isbn><call-num>41-1434/TS</call-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.16736/41-1434/ts.2019.02.008</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[6]是测定多糖含量的方法，它具有简便、快速、高敏感性等优点，已被用于各种实验中。其基本原理是：将一定浓度的硫酸与多糖混合液混合，在浓硫酸的强氧化性条件下，多糖类化合物催化水解生成单糖，继而单糖分子在高温酸性介质中发生环状结构开环与醛基氧化，形成糖醛酸衍生物；当将一定浓度的苯酚溶液添加到适当的浓度时，该糖醛衍生物将与苯酚发生反应，形成橙黄色光谱，波长为490nm。响应面Design-Expert是一款试验设计软件，这款软件可以在短时间内设计和分析产品的生产过程，节约耗能。Design-Expert操作流程简便，对试验数据进行专业而又全面的分析后，呈现出直观科学的模型，便于找到更加高效的实验方案ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>姚昕利</Author><Year>2018</Year><RecNum>130</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[7]</style></DisplayText><record><rec-number>130</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">130</key></foreign-keys><ref-typename="Thesis">32</ref-type><contributors><authors><author>姚昕利</author></authors><tertiary-authors><author>朱开梅,</author></tertiary-authors></contributors><titles><title>采用响应面法对超声波辅助提取桂北金槐中芦丁与槲皮素的工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1AgriculturalGeneticsInstitute,TuLiem,Hanoi,Vietnam.GRID:grid.499672.7</auth-address><titles><title>ChemistryandpharmacologyofBidenspilosa:anoverview</title><secondary-title>JPharmInvestig</secondary-title></titles><periodical><full-title>JPharmInvestig</full-title></periodical><pages>91-132</pages><volume>46</volume><number>2</number><edition>2016/01/01</edition><keywords><keyword>Bidenspilosa</keyword><keyword>Biologicalactivity</keyword><keyword>Flavonoids</keyword><keyword>Phenolics</keyword><keyword>Polyacetylenes</keyword><keyword>Terpenes</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>2093-5552(Print) 2093-5552</isbn><accession-num>32226639</accession-num><urls></urls><custom2>PMC7099298</custom2><electronic-resource-num>10.1007/s40005-016-0231-6</electronic-resource-num><remote-database-provider>NLM</remote-database-provider><language>eng</language></record></Cite></EndNote>[12]。国外大多对鬼针草的黄酮类化合物，聚乙炔类化合物研究较多，如研究黄酮类化合物异卡宁的抗炎机制ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[13]，研究聚乙炔葡糖苷的抗念珠菌作用ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>CY</Author><Year>2016</Year><RecNum>146</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[14]</style></DisplayText><record><rec-number>146</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681442340">146</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>ChungCY</author><author>YangWC</author><author>LiangCL</author><author>LiuHY</author><author>LaiSK</author><author>ChangCL</author></authors></contributors><titles><title>-Cytopiloyne,apolyacetylenicglucosidefromBidenspilosa,actsasanovel</title><secondary-title>JEthnopharmacol</secondary-title></titles><periodical><full-title>JEthnopharmacol</full-title></periodical><pages>72-80</pages><volume>184</volume><keywords><keyword>p-20160226</keyword><keyword>-0(AntifungalAgents)</keyword><keyword>-0(Glucosides)</keyword><keyword>-0(cytopiloyne)</keyword><keyword>-25067-58-7(Polyynes)</keyword><keyword>-9000-07-1(Carrageenan)</keyword><keyword>-EC3(ProteinKinaseC)</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><urls></urls></record></Cite></EndNote>[14]，关于多糖的研究报道较少。多糖的提取方法多种多样，基于多糖类成分的热敏性特征，超声辅助提取技术有三大核心优势：低温保护机制、时空效率优化、设备极简配置，较传统酶解法设备成本降低且无有机溶剂残留风险。超声波的时空效率优化还能够不破坏多糖的结构；且超声提取得到的多糖比水提得到的多糖有更好的抗氧化能力。考虑到实验室的具体条件，决定不直接将多糖分离出来，而是对多糖提取液采用苯酚-浓硫酸法进行含量测定。经过大量阅读文献，发现鬼针草具有多种生理活性，其中就包括抗氧化作用。而前人的研究中，大多研究人员的研究对象多为鬼针草中黄酮和挥发油等成分，研究鬼针草多糖的抗氧化作用的文献较少，便确定此次课题研究其抗氧化活性。本实验选用响应面法而不是正交试验来挑选出鬼针草多糖的最佳提取工艺参数，考虑到响应面该款软件的优点是能通过算法给出大量直观又科学的数据模型，可以直接从软件中得出此次试验的效果，大大简化了优选时的复杂过程。且经过阅读大量的文献，发现前人在响应面法结合超声提取来优化鬼针草多糖提取工艺上的研究较少，所以本研究首次尝试将响应面结合起来，填补了该领域的部分空白。研究目的及意义植物多糖作为具有明确构效关系的天然大分子聚合物，近年来在生物活性评价与产业化应用领域取得突破性进展。其药效有免疫调节功能，同时通过抑制细胞色素酶活性发挥肝脏保护作用。在全球天然药物市场年增长率的产业趋势，植物多糖在功能食品、创新药物及生物医用材料领域展现出巨大的商业化潜力。目前关于鬼针草的报道主要集中在黄酮类化学成分提取及药理作用方面，而采用响应面法和超声波提取技术相结合来优选出最佳提取工艺这一领域还未见报道。本项目拟以超声辅助提取技术，采用以鬼针草为研究对象，以多糖得率作为评价指标，通过单因素实验设计系统考察关键工艺参数的交互效应。具体因变量有液料比、超声时长、超声功率、超声温度等，通过响应曲面分析，优选出最佳的超声提取条件；再以苯酚-浓硫酸为指标，并用检测它们对DPPH自由基、羟基自由基和ABTS自由基的清除作用，来评估它们的体外抗氧化活性。以期为该植物资源的综合利用奠定基础。材料与方法材料与试剂本研究采用菊科鬼针草属一年生植物鬼针草的干燥全草作为供试材料样本。采用粉碎机将鬼针草研磨至粉末状，过筛网（孔径6.7mm，对应中国药典3号筛）获得均匀细粉。精密称取100g鬼针草细粉置于圆底烧瓶中，加入500mL的95%乙醇溶液，进行2次回流提取，每一次均需要1h，之后进行过滤，得到滤渣。滤渣的乙醇挥发后，得脱脂及去除单糖和低聚糖的鬼针草粉，备用ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>白淑敏</Author><Year>2017</Year><RecNum>142</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[8]</style></DisplayText><record><rec-number>142</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681402808">142</key></foreign-keys><ref-typename="Thesis">32</ref-type><contributors><authors><author>白淑敏</author></authors><tertiary-authors><author>陈光,</author></tertiary-authors></contributors><titles><title>三叶鬼针草化学成分及其生物活性研究</title></titles><keywords><keyword>三叶鬼针草</keyword><keyword>化学成分</keyword><keyword>DPPH自由基</keyword><keyword>NO抑制效应</keyword></keywords><dates><year>2017</year></dates><publisher>北京化工大学</publisher><work-type>硕士</work-type><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[8]。实验所选用的其他材料与试剂见表1。表1实验材料与试剂材料/试剂纯度/批号厂家95%乙醇分析纯广州化学试剂厂无水乙醇分析纯广州化学试剂厂葡萄糖标准品MUST-11020603-苯酚分析纯天津市永大化学试剂有限公司浓硫酸分析纯广州化学试剂厂铁氰化钾分析纯天津市福晨化学试剂厂水杨酸分析纯广州化学试剂厂硫酸亚铁分析纯天津市永大化学试剂有限公司30%过氧化氢分析纯天津市富宇精细化工有限公司抗坏血酸分析纯天津市天新精细化工有限公司过硫酸钾分析纯天津市福晨化学试剂厂2，2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）分析纯合肥巴斯夫生物科技有限司1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)分析纯国药集团化学试剂有限公司仪器与设备实验所选用的仪器和设备见表2。表2实验仪器与设备仪器规格型号厂家多功能粉碎机1000Y永康市铂欧五金制品有限公司电子天平JA5003N上海佑科仪器仪表有限公司数控超声波清洗器KQ-500DB昆山市超声仪器有限公司可见分光光度计721N上海精密科学仪器有限公司旋转蒸发器RE52CS上海亚荣生化仪器厂台式离心机TDL80-2B上海安亭科学仪器厂电热恒温水浴锅HWS-26上海一恒科学仪器有限公司综合型超纯水机FAMO-10FV南京权坤生物科技有限公司单因素试验试验中基于单因素试验与正交设计，系统筛选了乙醇超声提取工艺中的关键控制变量，重点考察液固比（mL/g）、超声处理温度（℃）、超声功率密度（W）及作用时长（min）。固定其中三个，改变一个，每一个因子都设定了5个水平，分别研究该因子对鬼针草多糖的提取效率的影响，并采用苯酚-浓硫酸法对不同工艺参数下鬼针草多糖的提取效率进行分析。参考文献ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陈阳</Author><Year>2016</Year><RecNum>131</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[15]</style></DisplayText><record><rec-number>131</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">131</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陈阳</author><author>杨小生</author><author>杨娟</author></authors></contributors><auth-address>贵州大学药学院;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室;</auth-address><titles><title>响应面法优化罗汉果多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究</title><secondary-title>食品科技</secondary-title></titles><periodical><full-title>食品科技</full-title></periodical><pages>180-184</pages><volume>41</volume><number>08</number><keywords><keyword>罗汉果</keyword><keyword>多糖</keyword><keyword>响应面法</keyword><keyword>超声提取</keyword><keyword>抗氧化性</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>1005-9989</isbn><call-num>11-3511/TS</call-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.13684/ki.spkj.2016.08.043</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[16]的方法并稍作修改，分别进行葡萄糖对照品溶液，6%苯酚溶液和供试液的配制，配制溶液的试剂用量及操作如下图1所示。图1试剂用量操作图葡萄糖标准曲线的绘制：参考文献ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陈阳</Author><Year>2016</Year><RecNum>131</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[15]</style></DisplayText><record><rec-number>131</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">131</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陈阳</author><author>杨小生</author><author>杨娟</author></authors></contributors><auth-address>贵州大学药学院;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室;</auth-address><titles><title>响应面法优化罗汉果多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究</title><secondary-title>食品科技</secondary-title></titles><periodical><full-title>食品科技</full-title></periodical><pages>180-184</pages><volume>41</volume><number>08</number><keywords><keyword>罗汉果</keyword><keyword>多糖</keyword><keyword>响应面法</keyword><keyword>超声提取</keyword><keyword>抗氧化性</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>1005-9989</isbn><call-num>11-3511/TS</call-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.13684/ki.spkj.2016.08.043</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[16,17]的方法并稍作修改，以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。曲线回归方程：y=7.8166x+0.0199，R2=0.9992，标准曲线图见图2。图2曲线图鬼针草多糖含量的测定：采用苯酚-浓硫酸法测定鬼针草多糖含量。由公式（1）计算鬼针草多糖提取率ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>安星亮</Author><Year>2022</Year><RecNum>124</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[18]</style></DisplayText><record><rec-number>124</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">124</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>安星亮</author><author>赵永亮</author><author>王欢</author><author>姚启悦</author><author>李飞寰</author></authors></contributors><auth-address>河南工业大学生物工程学院;</auth-address><titles><title>银耳多糖提取工艺的响应面法优化及抗氧化和保湿性研究</title><secondary-title>食品研究与开发</secondary-title></titles><periodical><full-title>食品研究与开发</full-title></periodical><pages>123-130</pages><volume>43</volume><number>15</number><keywords><keyword>银耳多糖</keyword><keyword>响应面</keyword><keyword>抗氧化性</keyword><keyword>吸湿率</keyword><keyword>保湿率</keyword></keywords><dates><year>2022</year></dates><isbn>1005-6521</isbn><call-num>12-1231/TS</call-num><urls><related-urls><url>/kcms/detail/12.1231.TS.20220606.1503.002.html</url></related-urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[18]公式（1）式中：C为上清液取0.2mL于10mL容量瓶中稀释后的多糖浓度，mg/mL；V0为吸取稀释后的多糖提取液的体积（即2mL），mL；N为稀释倍数（即液料比）；M为超声提取时加入的鬼针草细粉质量，mg。图3葡萄糖标准曲线液料比对鬼针草多糖提取率的影响表3液料比对多糖提取率的影响组别12345液料比（mL/g）4550556065超声温度（℃）5050505050超声时间（min）3030303030超声功率(W)300300300300300参考文献ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陈阳</Author><Year>2016</Year><RecNum>131</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[15]</style></DisplayText><record><rec-number>131</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">131</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陈阳</author><author>杨小生</author><author>杨娟</author></authors></contributors><auth-address>贵州大学药学院;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室;</auth-address><titles><title>响应面法优化罗汉果多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究</title><secondary-title>食品科技</secondary-title></titles><periodical><full-title>食品科技</full-title></periodical><pages>180-184</pages><volume>41</volume><number>08</number><keywords><keyword>罗汉果</keyword><keyword>多糖</keyword><keyword>响应面法</keyword><keyword>超声提取</keyword><keyword>抗氧化性</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>1005-9989</isbn><call-num>11-3511/TS</call-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.13684/ki.spkj.2016.08.043</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[18]的方法并稍作修改，分别称取5份鬼针草细粉，每份精密称定1.0g于锥形瓶中。每份样品实验的具体条件见表3。超声温度对鬼针草多糖提取率的影响表4超声温度对多糖提取率的影响组别12345液料比（mL/g）4040404040超声温度（℃）3040506070超声时间（min）3030303030超声功率(W)300300300300300参考文献ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陈阳</Author><Year>2016</Year><RecNum>131</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[15]</style></DisplayText><record><rec-number>131</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">131</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陈阳</author><author>杨小生</author><author>杨娟</author></authors></contributors><auth-address>贵州大学药学院;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室;</auth-address><titles><title>响应面法优化罗汉果多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究</title><secondary-title>食品科技</secondary-title></titles><periodical><full-title>食品科技</full-title></periodical><pages>180-184</pages><volume>41</volume><number>08</number><keywords><keyword>罗汉果</keyword><keyword>多糖</keyword><keyword>响应面法</keyword><keyword>超声提取</keyword><keyword>抗氧化性</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>1005-9989</isbn><call-num>11-3511/TS</call-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.13684/ki.spkj.2016.08.043</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[18]的方法并稍作修改，分别称取5份鬼针草细粉，每份精密称定1.0g于锥形瓶中。每份样品实验的具体条件见表4。超声时间对鬼针草多糖提取率的影响表5超声时间对多糖提取率的影响组别12345液料比（mL/g）4040404040超声温度（℃）5050505050超声时间（min）3040506070超声功率(W)300300300300300参考文献ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陈阳</Author><Year>2016</Year><RecNum>131</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[15]</style></DisplayText><record><rec-number>131</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">131</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陈阳</author><author>杨小生</author><author>杨娟</author></authors></contributors><auth-address>贵州大学药学院;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室;</auth-address><titles><title>响应面法优化罗汉果多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究</title><secondary-title>食品科技</secondary-title></titles><periodical><full-title>食品科技</full-title></periodical><pages>180-184</pages><volume>41</volume><number>08</number><keywords><keyword>罗汉果</keyword><keyword>多糖</keyword><keyword>响应面法</keyword><keyword>超声提取</keyword><keyword>抗氧化性</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>1005-9989</isbn><call-num>11-3511/TS</call-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.13684/ki.spkj.2016.08.043</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[18]的方法并稍作修改，分别称取5份鬼针草细粉，每份精密称定1.0g于锥形瓶中。每份样品实验的具体条件见表5。超声功率对鬼针草多糖提取率的影响表6超声功率对多糖提取率的影响组别12345液料比（mL/g）4040404040超声温度（℃）5050505050超声时间（min）3030303030超声功率(W)100200300400500参考文献ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陈阳</Author><Year>2016</Year><RecNum>131</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[15]</style></DisplayText><record><rec-number>131</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">131</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陈阳</author><author>杨小生</author><author>杨娟</author></authors></contributors><auth-address>贵州大学药学院;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室;</auth-address><titles><title>响应面法优化罗汉果多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究</title><secondary-title>食品科技</secondary-title></titles><periodical><full-title>食品科技</full-title></periodical><pages>180-184</pages><volume>41</volume><number>08</number><keywords><keyword>罗汉果</keyword><keyword>多糖</keyword><keyword>响应面法</keyword><keyword>超声提取</keyword><keyword>抗氧化性</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>1005-9989</isbn><call-num>11-3511/TS</call-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.13684/ki.spkj.2016.08.043</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[18]的方法并稍作修改，分别称取5份鬼针草细粉，每份精密称定1.0g于锥形瓶中。每份样品实验的具体条件见表6。响应面试验设计在单因素实验结果为依据，将超声功率（A）、超声时间（B）、超声温度（C）、液料比（D）4个因子作为自变量，将多糖的提取率作为评估因子ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陈阳</Author><Year>2016</Year><RecNum>131</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[15]</style></DisplayText><record><rec-number>131</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">131</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陈阳</author><author>杨小生</author><author>杨娟</author></authors></contributors><auth-address>贵州大学药学院;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室;</auth-address><titles><title>响应面法优化罗汉果多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究</title><secondary-title>食品科技</secondary-title></titles><periodical><full-title>食品科技</full-title></periodical><pages>180-184</pages><volume>41</volume><number>08</number><keywords><keyword>罗汉果</keyword><keyword>多糖</keyword><keyword>响应面法</keyword><keyword>超声提取</keyword><keyword>抗氧化性</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>1005-9989</isbn><call-num>11-3511/TS</call-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.13684/ki.spkj.2016.08.043</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[15]。基于Deign Expert 10.0.1统计软件平台，采用中心复合设计中的星点响应面法，针对乙醇提取工艺中的液固比（mL/g）、超声功率密度（W）、提取温度（℃）及时间（min）4个关键变量开展三水平优化试验，试验安排见表7。表7响应面分析实验影响因素与水平影响因素水平-101A/W200300400B/min405060C/℃405060D/(mL/g)505560鬼针草多糖抗氧化活性试验自由基是导致人机体受到损伤的重要因素，且人体内的自由基产生量与人体的年龄呈正相关关系，年龄越大，体内产生的自由基量越多。抗氧化剂可以抓捕和中和自由基，从而清除自由基，以此使得被自由基造成的组织细胞的损伤可以降低，最终达到保护细胞的目的。所以衡量一种化合物是否具有抗氧化活性，可以通过测定其对自由基的清除能力的程度ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>王自凡</Author><Year>2022</Year><RecNum>121</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[19]</style></DisplayText><record><rec-number>121</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">121</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>王自凡</author><author>张振</author></authors></contributors><auth-address>贵州大学酿酒与食品工程学院;贵州省分析测试研究院;</auth-address><titles><title>醇沉分级白芨多糖理化性质及抗氧化、吸湿保湿活性研究</title><secondary-title>日用化学品科学</secondary-title></titles><periodical><full-title>日用化学品科学</full-title></periodical><pages>30-34+38</pages><volume>45</volume><number>07</number><keywords><keyword>白芨</keyword><keyword>分级醇沉</keyword><keyword>抗氧化</keyword><keyword>吸湿保湿</keyword></keywords><dates><year>2022</year></dates><isbn>1006-7264</isbn><call-num>14-1210/TQ</call-num><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[19]。取鬼针草细粉1.0g，按照拟合得出的最佳提取组合进行提取，经3500r/min离心15min得到提取原液，再将提取原液浓缩，将浓缩后的提取原液按照苯酚-浓硫酸法测定出其浓度为3.6mg/mL，并放置冰箱保存。多糖样品液的制备：分别移取0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL的3.5mg/mL的提取液置于50mL容量瓶中，超纯水稀释定容后得到浓度分别为0.0144mg/mL，0.0216mg/mL，0.0288mg/mL，0.036mg/mL，0.0432mg/mL，0.504mg/mL的溶液待用（若浓度太高，则适当稀释）。抗坏血酸储备液配制与梯度稀释：精密称取0.362g抗坏血酸置于100mL洁净容量瓶中，以超纯水为溶剂进行溶解定容，制备得浓度为3.62mg/mL的抗坏血酸母液。采用移液器（A级，量程0.1-1mL精度±0.005mL）分别量取0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL母液，转移至50mL棕色容量瓶（避光保存）中，超纯水稀释定容后得到浓度分别为0.01448mg/mL，0.02172mg/mL，0.02896mg/mL，0.0362mg/mL，0.04344mg/mL，0.5068mg/mL的溶液，可以被用来作为下列抗氧化实验的阳性对照，并将其保存备用（若浓度太高，则适当稀释）。工艺流程将处理得到的鬼针草粉，按一定的液料比添加超纯水、设置一定的参数值进行超声提取，3500r/min离心15min，得上清液，对上清液采用苯酚-浓硫酸法对其进行多糖的含量测定，最后研究其体外抗氧化活性ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陈阳</Author><Year>2016</Year><RecNum>131</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[15]</style></DisplayText><record><rec-number>131</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">131</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陈阳</author><author>杨小生</author><author>杨娟</author></authors></contributors><auth-address>贵州大学药学院;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室;</auth-address><titles><title>响应面法优化罗汉果多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究</title><secondary-title>食品科技</secondary-title></titles><periodical><full-title>食品科技</full-title></periodical><pages>180-184</pages><volume>41</volume><number>08</number><keywords><keyword>罗汉果</keyword><keyword>多糖</keyword><keyword>响应面法</keyword><keyword>超声提取</keyword><keyword>抗氧化性</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><isbn>1005-9989</isbn><call-num>11-3511/TS</call-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.13684/ki.spkj.2016.08.043</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[15]。DPPH自由基清除活性DPPH自由基是一个非常稳定的含N的基团，该自由基的乙醇溶液（无水乙醇为溶剂）呈现特征性深紫色，其紫外-可见吸收光谱在517 nm波长处呈现最大摩尔消光系数。当向该体系中引入含抗氧化活性物质的测试液时，DPPH分子中的单电子将通过电子转移或氢原子转移机制与抗氧化剂发生氧化还原反应，该反应导致溶液中自由基浓度随抗氧化剂浓度增加呈指数级衰减。也就是利用在517nm波长下测定试样溶液对DPPH自由基的去除作用来推算其抗氧化活性ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[20,21]。参考文献ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陈阳</Author><Year>2016</Year><RecNum>131</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[15]</style></DisplayText><record><rec-number>131</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="0weffd55yp2vpte5rtrxvffdaee2dfr0v02v"timestamp="1681131083">131</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>陈阳</author><author>杨小生</author><author>杨娟</author></authors></contributors><auth-address>贵州大学药学院;