庾更绪开-题-报-告

导师：唐灵副教授

研究生：庾更绪专业：内科学

2型糖尿病肾病患者血清中

MMP-9和TIMP-1的表达及意义提纲立题依据研究内容1研究目标技术路线研究方法统计学分析拟解决的关键问题

预期结果可行性分析工作进度安排经费预算一、立项依据糖尿病(diabetesmellitus，DM)是以高血糖为主要标志的内分泌代谢性疾病。2型糖尿病(type2diabetesmellitus，2型DM)在糖尿病患者中所占比例最大，有资料预测到2030年将上升到3.66亿，患病率可达到4.4％。糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病最常见的微血管并发症之一,是终末期肾病(ESRD)的常见原因,是糖尿病患者的主要死亡原因之一，其发生发展严重影响患者的生活质量和存活时间,但它的发病机制和发展过程尚未完全阐明。

近来多数学者对DN发病机制有了新的认识,认为ECM的合成增加和降解减少并重,都可以促进肾小球进行性硬化。细胞外基质(ECM)是胰岛细胞微环境中的重要组成成分,与胰岛细胞的活力和功能密切相关。基质金属蛋白酶和组织基质金属蛋白酶抑制剂是参与ECM合成和降解的一个关键酶系。MMP-9及TIMP-1与可能与糖尿病肾病的发生、发展最为相关。MMP-9是目前所知的肾组织内活性最强的MMPs之一，具有降解多种ECM成分的强大能力，MMP-9／TIMP-1表达失衡是引起ECM异常积聚的重要因素之一。而在众多MMPs家族成员中，MMP-9能够降解肾脏组织明胶和基底膜胶原,TIMP-1是MMP-9特异性的抑制因子，因此MMP-9及TIMP-1与可能与糖尿病肾病的发生、发展最为相关。近年随着研究的深入，人们发现MMP-9水平的增高并不一定会出现ECM减少的结果，MMP-9的活性受到TIMP-1水平的影响。相对于MMPs，ECM与MMPs/TIMP-1比值的关系更为密切。目前，MMPS、TIMPS在糖尿病肾病中的作用越来越受到关注，对MMP一9/TIMP一1的深入研究将有助于阐明糖尿病肾病的发病机制，并为新的糖尿病肾病药物的开发提供研究方向。二、研究内容

2型糖尿病肾病中MMP-9和TIMP-1的表达及意义

现在认为ECM的合成增加和降解减少并重,都可以促进肾小球进行性硬化,甚至后者的作用更大,因此ECM降解过程备受人们重视。MMP-9／TIMP-1表达失衡是引起ECM异常积聚的重要因素之一。三、研究目标研究验证MMP-9、TIMP-1与DN（糖尿病肾病）的发生、发展的相关性。糖尿病肾病的发病机制错综复杂，至今仍未能完全阐明。MMP一9和TIMP一1的表达变化尤其是MMP一1/TIMP一1比值的变化影响了糖尿病时肾脏细胞外基质的降解，参与了DN的发生与发展过程。研究对象NC组2型糖尿病患者NA组(UAER<20μg/min)MA组(UAER20~200μg/min)ODN组(UAER>200μg/min)检测血清MMP-9、TIMP-1、FPG、CRP、HbA1C、Cr、BUN、Fins、C-P水平试验数据统计学处理、比较、分析撰写并发表论文四、技术路线五、研究方法(1)收集2012年11月—2013年6月在桂林医学院附属医院住院及门诊的75例2型糖尿病患者，所有病例诊断符合1999年WHO糖尿病诊断及分型标准。以上人员均除外近期（1个月）有急性损伤、感染及风湿等炎症反应性疾病，并排除原发性肾病、高血压病及心力衰竭等疾病。各组间年龄、性别、体重指数（BMI）、血压等参数经方差分析差异无显著性，具有可比性。(2)根据24小时尿白蛋白排泄率(UAER)分为三组：正常白蛋白尿组(NA组)25例(UAER<20μg/min)，微量白蛋白尿组(MA组)25例(UAER20～200μg/min)，临床白蛋白尿组(ODN组)25例(UAER>200μg/min)。另选健康体检者25例为正常对照组（NC组）。(3)所有入选者测量血压、腰臀比（用皮尺平脐水平环绕一周测量腰围，环绕臀部最宽处一周测量臀围，求得腰臀比），以身高、体重计算体重指数（BMI），即BMI=体重（Kg）/身高(m)2。均于空腹10小时后采集静脉血液5ml，肝素抗凝，采血前避免剧烈活动及应激等，血标本保存于-70℃冰箱中待测血清MMP-9和TIMP-1浓度。同时抽血应用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖（FPG）、应用全自动生化分析仪测血清C反应蛋白（CRP）、糖化血红蛋白（HbA1c）、血肌酐（Cr）、尿素氮(BUN)。应用放射免疫分析法测血胰岛素（Fins）、C-肽（C-P）。采用稳态模式评估法评价胰岛素抵抗程度，即HOMA-IR=FPG×FINS/22.5。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清MMP-9、TIMP-2浓度。六、统计学分析所有数据均应用SPSS13.0统计软件处理，结果用均值±标准差（）表示。计数资料比较用χ2检验，多组计量资料分析采用方差分析，多组间两两比较采用SNK检验。方差不齐时作秩和检验。所有检验均采用双侧检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。计算Pearson相关系数，判断两个变量的相关关系。影响血清MMP-9、TIMP-1浓度的多因素分析采用多元线性逐步回归分析。七、拟解决的关键问题通过合理的实验设计，对合并有糖尿病肾病改变的2型糖尿病患者进行血清MMP-9、TIMP-1以及其他相关指标的检测，观察血清MMP-9、TIMP-1与糖尿病肾病的关系，进一步探讨糖尿病肾病发生的多重机制，对DN的诊断及防治提供更充分、更可靠和更有利的依据，为临床延缓糖尿病肾病的进展提供一个新思路。八、预期成果（1）本课题若能顺利完成，将有助于了解MMP-9、TIMP-1在糖尿病肾病中的作用，对糖尿病肾病的发病机制的研究提供新的思路。为以后糖尿病肾病更进一步的实验以及临床研究提供实验依据。（2）预期研究成果在该研究领域达到国内先进水平，填补此领域的研究空白，成果以科学研究论文形式在国内刊物上公开发表论文1-2篇。九、可行性分析本课题负责人唐灵副教授在临床、科研、教学上经验丰富，先后参与了多项省厅级的科研课题，科研能力强，水平高，是确保本课题研究工作顺利进行的有力保障。课题其他组成人员有内分泌学教授、副教授、硕士研究生及其他科研技术人员，技术力量雄厚，保证了本科研课题的科学性、合理性及可行性，以上是本课题能够顺利进行的坚实基础。十、工作进度安排准备阶段：（2012-6-1至2012-10-31）完成实验条件、试验设备，以及所需物品的配备、人员分工准备工作。病例采集阶段：（2012-11-1至2013-6-30）主要完成病例采集。实施阶段：（2013-7-1至2013-7-31）完成各项指标的检测、数据的收集和整理以及统计学处理。总结阶段：（2013-8-1至2013-10-31）进行讨论分析、论文撰写及发表。十一、经