（正式版）DB22∕T 1252-2011 《粮谷中黄曲霉毒素的快速测定方法超高效液相色谱法》

粮谷中黄曲霉毒素的快速测定方法超高效液相色谱法吉林省质量技术监督局发布I本标准编写的格式、结构和内容均按照GB/T1.1-2009给出的规则进行起草。本标准的附录A为资料性附录。本标准由吉林省粮食局提出并归口。本标准起草单位：吉林省粮油科学研究设计院、国家粮食局科学研究院。本标准主要起草人：朱铁军、王松雪、谢刚、孟凡刚、矫珑、王曼、李莉、张艳、张忠杰、曹阳、薛恩儒。1粮谷中黄曲霉毒素的测定超高效液相色谱法用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法试样经过甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层4.1甲醇(CH30H):色谱纯。4.5甲醇-水(45+55):取45mL甲醇加55mL水。4.6苯-乙腈(98+2):取2mL乙腈加98mL苯。4.7甲醇-水(7+3):取70mL甲醇加30mL水。4.8黄曲霉毒素标准品(黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2):纯度≥99%。4.9黄曲霉毒素标准贮备溶液：用苯-乙腈(98+2)溶液或甲醇溶液分别配制0.100mg/mL的黄曲霉毒℃下，氮气吹干仪吹干，用适量的甲醇-水(4.5)定容为混合标准工作液：黄曲霉毒素B1、B2、G1、保存7d。24.13黄曲霉毒素免疫亲和柱。5.1天平：感量0.001g。5.2超高效液相色谱仪：配有荧光检测5.3高速万能粉碎机：转速10000r/min。5.4高速均质器：转速大于10000r/min。将粮谷样品用高速万能粉碎机(5.3)磨细，并通过试验筛(5.5),不要磨成粉末。准确称取经过磨碎(粒度小于1mm)的试样25g(精确到0.01g)于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠，准确加入125mL(V₁)甲醇-水(7+3),混匀，转移至均质器中高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，准确移取15.0mL(V₂)滤液并加入30.0mL(V₃)水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1~2次，至滤液澄6.2.1将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。6.2.2准确移取15.0mL(V4)样品澄清滤液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，6.2.3以10.0mL水淋洗柱子2次，流速为1滴/s～2滴/s,弃去全部流出液，并使2mL～3mL空气通6.2.4用经过校准的1mL移液枪准确加入1.0mL(V)色谱级甲醇洗脱，流速为1滴/s,收集全部洗a)色谱柱：Ci₈柱(柱长50mm,内径3.0mm,填料直径1.7μm),或性能相当者；b)流动相：甲醇-水(45+55);3f)荧光检测器：激发波长360nm,发射波长440nm。7.2定量测定以黄曲霉毒素标准工作液(4.10)浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，分别绘制黄曲霉毒素7.3空白试验7.4平行试验7.5结果计算检测结果按公式(1)计算：c—最终试样溶液中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁或G₂的含量，单位为微克每升(μg/L);co—空白试验中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁或V一最终甲醇洗脱液体积，单位为毫升(mL);m一试样称取量，单位为克(g);V₁—样品提取液体积，单位为毫升(mL);V₃—稀释液体积，单位为毫升(mL);V₄—通过亲和柱的样品提取液体积，单位为毫升(mL8精密度