生物工程实验指导-课件 12-药物分析检测实验

药物分析检测实验实验一

灭菌注射用水一般杂质检测实验二

小儿止咳糖浆的质量鉴别实验三

维生素C注射液的检验实验四

多酶片的检验实验五

维生素B12

注射液的鉴别和含量测定实验六

维生素AD胶丸中维生素A的含量测定实验七

枸橼酸铋钾胶囊质量分析实验一

灭菌注射用水一般杂质检测1实验目的通过对灭菌注射用水的质量分析,了解药物的一般杂质检测项目和意义;掌握氯化物、硫酸盐、钙盐、易氧化物、硝酸盐与亚硝酸盐、不挥发物,以及重金属限度检查的原理和方法。2实验原理氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银发生反应,生成氯化银的胶体微粒而显白色浑浊,以此来判断药品中的氯化物是否符合限量规定;硫酸盐与氯化钡在酸性条件下生成浑浊的硫酸钡,以此来测定药品中硫酸盐的限度;钙盐与草酸铵试剂反应,产生白色细小结晶即草酸钙沉淀,以此来测定药品中钙盐的含量;二苯胺在酸性条件下被硝酸根离子氧化,生成蓝色的醌式联二苯;亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺反应,生成重氮盐,再与盐酸萘乙二胺偶联生成红色偶氮染料;稀硫酸为反应提供酸性环境,高锰酸钾在酸性条件下具有氧化性,与易氧化物反应产生还原产物,分别为二价锰离子、二氧化锰、锰酸根,导致溶液褪色;重金属能与硫代乙酰胺反应呈色,在特定波长处具有紫外吸收,紫外吸收的强度与重金属浓度成正比。3实验材料及设备3.1实验材料灭菌注射用水。3.2仪器设备酸度计,水浴锅,试管,纳氏比色管,烘箱,天平、pH试纸(精确到个位)。3.3试剂及其配制方法硝酸,硝酸银试液,氯化钡试液,草酸铵试液,硫代乙酰胺试液,10%氯化钾溶液,0.1%二苯胺硫酸溶液,标准硝酸盐溶液,对氨基苯磺酰胺稀盐酸溶液,盐酸萘乙二胺溶液,稀盐酸,亚硝酸钠,稀硫酸,高锰酸钾,标准铅溶液。①标准硝酸盐溶液:称取硝酸钾0.163g,加水溶解并稀释至100mL,摇匀。精密量取1mL上述硝酸钾溶液,加水稀释成100mL,再精密量取10mL,加水稀释至100mL,摇匀,即得。②

标准亚硝酸盐溶液:称取亚硝酸钠0.75g(按干燥品计算),加水溶解,稀释至100mL,摇匀。精密量取上述亚硝酸钠溶液1mL,加水稀释至100mL,摇匀。再精密量取1mL,加水稀释至50mL,摇匀,即得。③醋酸盐缓冲液(pH=3.5):取醋酸铵25g,加水25mL溶解后,加7mol/L盐酸溶液38mL。用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH至3.5,用水稀释至100mL,即得。4实验步骤(1)性状通过观察,本品为无色的澄明液体,无臭。(2)检查①pH:取本品100mL,加饱和氯化钾溶液0.3mL,依法[《中华人民共和国药典》(2020年版)通则0631]采用酸度计测定,pH应为5.0~7.0。②氯化物、硫酸盐、钙盐:取本品,分别置于3支试管中,每管各50mL,第一管中加入硝酸5滴与硝酸银试液1mL;第二管中加入氯化钡试液5mL;第三管中加入草酸铵试液2mL;均不得发生浑浊。③硝酸盐:取本品5mL置于试管中,于冰浴中冷却,加入0.4mL10%氯化钾溶液与0.1mL0.1%二苯胺硫酸溶液,摇匀,缓缓滴加稀硫酸5mL,摇匀,将试管于50℃水浴中放置15min。观察溶液产生的蓝色,并与标准硝酸盐溶液0.3mL,加无硝酸盐的水4.7mL,用同一方法处理后的颜色进行比较,本品的颜色不得更深。④亚硝酸盐:取本品10mL,置于纳氏管中,加对氨基苯磺酰胺稀盐酸溶液(1→100)1mL与盐酸萘乙二胺溶液(0.1→100)1mL。观察产生的粉红色,并与标准亚硝酸盐溶液0.2mL,加无亚硝酸盐的水9.8mL,用同一方法处理后的颜色进行比较。本品的颜色不得更深。⑤

易氧化物:取本品100mL,加稀硫酸10mL,煮沸后,加高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)0.1mL,再煮沸10min,粉红色不得完全消失。⑥不挥发物:取本品100mL,置于105℃恒重蒸发皿中,在水浴上蒸干,并在105℃干燥至恒重,遗留残渣不得超过1mg。⑦重金属:取本品100mL,加水19mL,蒸发至20mL,放冷。加醋酸盐缓冲液(pH=3.5)2mL与水适量,定容至25mL。加硫代乙酰胺试液2mL,摇匀,放置2min,溶液产生的颜色与标准铅溶液1mL加水19mL用同一方法处理后的颜色进行比较,本品的颜色不得更深。5结果与分析①重金属的存在对药物质量有哪些影响?②氯离子、硫酸根离子可能来源于哪些制备环节,它们的存在能反映什么?实验二

小儿止咳糖浆的质量鉴别1实验目的根据《中华人民共和国药典》(2020年版)相关内容和方法,分析小儿止咳糖浆的性状、鉴别和检查项目,了解中药制剂质量分析的特点,并掌握其操作方法。薄层色谱是以涂布于支持板上的支持物作为固定相,以合适的溶剂作为流动相,对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。小儿止咳糖浆的质量控制主要采用专属性较强的薄层色谱鉴别法。此鉴别及检查方法重现性好、干扰少,且实验所用设备、仪器、试剂简单,时间较短,符合化验室的实际工作情况,可行性高。2实验原理3实验材料及设备3.1实验材料小儿止咳糖浆。3.2仪器设备烘箱、紫外灯、水浴锅、回流装置。3.3试剂及其配制方法稀盐酸、氨试液、氢氧化钠、稀硝酸、硝酸银、正丁醇、甲醇、甘草、硅胶GF254薄层板、三氯甲烷、甲醇、10%硫酸乙醇溶液、pH计。①稀盐酸:取盐酸2340mL,加水稀释至10000mL。②氨试液:取氨水4000mL,加水至10000mL。③氢氧化钠溶液:取4g氢氧化钠固体溶于水,定容至1000mL。④稀硝酸:取硝酸10.5mL,加水稀释至1000mL。⑤水饱和的正丁醇:在正丁醇中加入足量的水,混合均匀,然后静置分层,取上层正丁醇使用。⑥

正丁醇饱和的水:在水中加入足量的正丁醇,混合均匀,然后静置分层,取下层水使用。4实验步骤(1)性状小儿止咳糖浆为红棕色半透明黏稠液体,味甜。(2)鉴别①取小儿止咳糖浆20mL,加水60mL,摇匀,滤过。取滤液10mL,加稀盐酸数滴,生成白色沉淀。再加氨试液适量,沉淀可溶解。②取①步骤中的滤液,加过量的氢氧化钠溶液后,加热,即分解,产生氨臭。取上述溶液,加稀硝酸使成酸性后,滴加硝酸银溶液,生成白色乳状沉淀;分离沉淀,加氨试液后溶解。③取小儿止咳糖浆200mL,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次200mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次150mL。将正丁醇液蒸干,残渣中加入50mL甲醇溶解,作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g,加甲醇200mL,加热回流20min,滤过,滤液蒸干,残渣中加入50mL甲醇,使其溶解,作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各1μL,点于同一硅胶GF254薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(9∶1)为展开剂,展开,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置于紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置,显相同颜色的荧光斑点。(3)检查按照《中华人民共和国药典》(2020年版)通则0631。使用pH计测定样品的pH,应为5.0~7.0。5结果与分析①为什么止咳糖浆加盐酸会生成沉淀,加氨水后沉淀又消失?实验三

维生素C注射液的检验1实验目的掌握滴定法的定量操作方法;掌握薄层层析法的操作方法和原理;掌握注射剂含量测定的计算方法。维生素C可被亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜试液、磷钼酸等氧化剂氧化为脱氢维生素C,并使这些试剂褪色、产生沉淀或显色。维生素C具有还原性,可被I2定量氧化,因而可用I2标准溶液直接滴定。用直接碘量法可测定药片、注射液、饮料、蔬菜、水果等中的维生素C含量。由于维生素C的还原性很强,较易被溶液和空气中的氧氧化,在碱性介质中这种氧化作用更强,因此滴定宜在酸性介质中进行,以减少副反应的发生。考虑到I2在强酸性溶液中也易被氧化,故一般选在pH为3~4的弱酸性溶液中进行滴定。2实验原理3实验材料及设备3.1实验材料维生素C注射液。3.2仪器设备水浴锅、紫外-可见分光光度计、硅胶GF254薄层板、酸式滴定管。3.3试剂及其配制方法乙酸乙酯、乙醇、氯化钙、盐酸溶液、亚甲蓝乙醇溶液、丙酮、冰醋酸、草酸、氯化钙、淀粉指示剂、碘、碘化钾。①盐酸(0.1mol/L):取8.3mL盐酸,加水定容至1000mL。②亚甲蓝乙醇溶液(0.05%):称取0.05g亚甲蓝,加无水乙醇定容至100mL。③稀醋酸(6%):取60mL冰醋酸,加水稀释至1000mL。④氯化钙溶液(0.02mol/L):取1.47g氯化钙,加水500mL,用0.1mol/L盐酸和氢氧化钠调节pH至6.2。⑤碘滴定液(0.05mol/L):取13g碘,加36g碘化钾与50mL水溶解,加入3滴盐酸,定容至1000mL。4实验步骤(1)性状本品为无色至微黄色的澄明液体。(2)鉴别①取本品,用水稀释制成1mL中含10mg维生素C的溶液,取4mL,加0.1mol/L的盐酸溶液4mL,混匀,加0.05%亚甲蓝乙醇溶液4滴,置于40℃水浴中加热,3min内溶液应由深蓝色变为浅蓝色或完全褪色。②取本品,用水稀释制成1mL中约含1mg维生素C的溶液,作为供试品溶液;另取维生素C对照品,加水溶解并稀释制成1mL中约含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各20μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(体积比为5∶4∶1)为展开剂,展开,晾干,立即(1h内)置于紫外灯下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。(3)检查①按照《中华人民共和国药典》(2020年版)通则0631。经pH计测量,pH应为5.0~7.0。②用水将样品稀释制成每1mL中含50mg维生素C的溶液,按照《中华人民共和国药典》(2020年版)通则0401,在420nm波长处测定吸光度,吸光度不得超过0.06。③取本品,用水稀释制成每1mL中约含50mg维生素C的溶液,精密量取5mL,加稀醋酸1mL与氯化钙试液0.5mL,摇匀,放置1h,作为供试品溶液;精密称取草酸3.2g,置于1000mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5mL,加稀醋酸1mL与氯化钙试液0.5mL,摇匀,放置1h,作为对照溶液。供试品溶液的浑浊度不得深于对照溶液,即草酸限量不得超过0.3%。(4)含量测定(滴定法)精密量取本品适量(约相当于0.2g维生素C),加水15mL与丙酮2mL,摇匀,放置5min,加稀醋酸4mL与淀粉指示液1mL,用碘滴定液(0.05mol/L)滴定,至溶液显蓝色并持续30s不褪色。每1mL碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg维生素C。5结果与分析①配制维生素C固体试样溶液时,为何要加入新煮沸并冷实验四

多酶片的检验1实验目的掌握紫外分光光度法的定性定量操作方法;掌握胃蛋白酶和胰蛋白酶紫外分光光度法检测的原理、操作条件及注意事项;熟悉紫外分光光度计的构造和使用操作,了解生化药物质量检测的特点。以血红蛋白作为底物,在规定的实验条件下,胃蛋白酶可以催化水解血红蛋白。在一定范围内其颜色深浅与胃蛋白酶活力成正比。用酪氨酸做对照,以确定胃蛋白酶的活力单位。单位定义:在一定条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmol酪氨酸的酶量,定义为一个胃蛋白酶活力单位。采用以酪蛋白为底物的方法来测定胰蛋白酶活性。酪蛋白作为底物,主要用于测定胰蛋白酶粗制品的活力。在一定浓度范围内,酶的水解滤液在波长275nm处的吸光度增加值与胰蛋白酶的活力单位成正比。测定中以标准酪氨酸溶液的吸光度做对照,确定样品中胰蛋白酶的活性。2实验原理3实验材料及设备3.1实验材料胃蛋白酶、胰蛋白酶。3.2仪器设备水浴锅、紫外分光光度计。3.3试剂及其配制方法氯化钡、酪氨酸、盐酸、血红蛋白、三氯醋酸、硼酸盐缓冲液、氯化钙。①盐酸溶液:1mol/L盐酸溶液65mL,加水定容至1000mL。②供试品溶液:取适量本品,加1mol/L盐酸稀释至每1mL含0.2~0.4单位的溶液。③血红蛋白溶液:取牛血红蛋白1g,加1mol/L盐酸溶解,定容至100mL。④5%三氯醋酸溶液:取5mL三氯醋酸,加水定容至100mL。⑤氯化钙溶液:取氯化钙1.47g,加水500mL使其完全溶解,用0.1mol/L盐酸溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.0~6.2。⑥硼酸盐缓冲溶液:取硼砂2.85g,硼酸10.5g与氯化钠2.5g,加水使其完全溶解,定容至1000mL,调节pH至7.5±0.1。⑦酪蛋白溶液:取酪蛋白对照品1.5g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液13mL和水40mL,在60℃水浴中加热使其溶解,放冷后,用水稀释至100mL,调节pH至8.0。4实验步骤4.1胃蛋白酶的检验(1)性状本品为白色至淡黄色的粉末,无霉败臭,有引湿性,水溶液显酸性反应。(2)鉴别取本品的水溶液,加25%氯化钡溶液,即生成沉淀。(3)效价测定①对照品溶液的制备:精密称取酪氨酸对照品适量,加盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含0.5mg的溶液。②供试品溶液的制备:取本品适量,精密称定,加上述盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含0.2~0.4单位的溶液。③测定法:取6支试管,其中3支各精密加入对照品溶液1mL,另3支各精密加入供试品溶液1mL,置于(37±0.5)℃水浴中,保温5min。精密加入预热至(37±0.5)℃的血红蛋白试液5mL,摇匀,并准确计时,在(37±0.5)℃水浴中反应10min。立即精密加入5%三氯醋酸溶液5mL,摇匀,滤过,取续滤液备用。4实验步骤4.1胃蛋白酶的检验

4实验步骤4.2胰蛋白酶的检验(1)性状本品为糖衣片,除去包衣后显微黄色。(2)鉴别取本品的水溶液,加25%氯化钡溶液,即生成沉淀。(3)效价测定①胰蛋白酶对照品溶液的制备:取酪氨酸对照品,精密称定,加0.2mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1mL中约含50μg的溶液。②供试品原液的制备:取本品约0.1g,精密称定,置于乳钵中,加冷至5℃以下的氯化钙溶液少量,研磨均匀,移至100mL量瓶中,用上述氯化钙溶液稀释至刻度,摇匀;精密量取适量,用冷至5℃以下的硼酸盐缓冲液定量稀释制成每1mL中约含胰蛋白酶0.12单位的溶液。③测定法:取试管3支,分别精密量取供试品原液1mL与上述硼酸盐缓冲液2mL,在40℃水浴中保温10min。分别精密加入在40℃水浴中预热的酪蛋白溶液5mL,摇匀,立即置于(40±0.5)℃水浴中准确反应30min,再各精密加入5%三氯醋酸溶液5mL终止反应,混匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。4实验步骤4.2胰蛋白酶的检验

5结果与分析蛋白酶的最适pH是多少?pH对胰蛋白酶稳定性有何影响?实验五

维生素B12

注射液的鉴别和含量测定1实验目的掌握吸收系数法测定维生素B12注射液的含量,以及含量的计算方法。

2实验原理3实验材料及设备3.1实验材料维生素B12

注射液。3.2仪器设备紫外分光光度计、pH计。4实验步骤

5结果与分析①维生素B12

含量测定时有哪些注意事项?②试比较吸光系数和工作曲线定量方法,你认为哪种方法好?为什么?实验六

维生素AD胶丸中维生素A的含量测定1实验目的掌握三点校正紫外分光光度法的基本原理和方法;掌握维生素A三点校正法测定含量的原理、方法及校正公式、换算因数、计算等;熟悉紫外分光光度计的构造和使用操作。三点校正法是在三个波长处测得吸光度,根据校正公式计算较正后的吸光度

A(校正)值,再计算含量,故称三点校正法。其原理基于以下两点:(1)杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线,且随波长的增大吸光度变小。(2)物质对光的吸收具有加和性。即在某一样品的吸收曲线中,各波长的吸光度是维生素A与杂质吸光度的代数和,因而吸收曲线也是它们吸收曲线的叠加。2实验原理3实验材料及设备3.1实验材料维生素AD胶丸。3.2仪器设备紫外分光光度计、回流装置、皂化瓶、分液漏斗。3.3试剂三氯化锑、三氯甲烷、环己烷、乙醇、氢氧化钾、乙醚、酚酞指示液。4实验步骤

4实验步骤如果吸收峰波长在326~329nm,且所测得的各波长吸光度比值不超过表中规定的±0.02,可直接用下列公式计算含量如果吸收波长在326~329nm,但所测得的各波长吸光度比值超过表中规定值的±0.02,应按下列公式求出校正后的吸光度,然后再计算含量如果在328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过±3%,则不用校正,仍以未经校正的吸光度计算含量。如果校正吸光度与未校正吸光度相差在-3%至-15%,则以校正吸光度计算含量。如果校正吸光度超出未校正吸光度的-3%至-15%,或者吸收峰波长不在326~329nm,则供试品须按下述方法测定:①精密称取供试品适量(约相当于维生素A总量500单位以上,重量不多于2g),置于皂化瓶中,加入30mL乙醇和3mL50%氢氧化钾溶液,置于水浴中煮沸回流30min。冷却后,自冷凝管顶端加水10mL冲洗冷凝管内部管壁,将皂化液移至分液漏斗中(分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂),皂化瓶用水60~100mL分数次洗涤,洗液并入分液漏斗中。②用不含过氧化物的乙醚振摇提取4次,每次振摇约5min,第一次60mL,以后各次40mL。合并乙醚液,用水洗涤数次,每次约100mL,洗涤应缓缓旋动,避免乳化,直至水层遇酚酞指示液不再显红色。乙醚液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的滤器滤过,滤器用乙醚洗涤,洗液与乙醚液合并,置于250mL量瓶中,用乙醚稀释至刻度,摇匀。精密量取适量,置于蒸发皿内,微温挥去乙醚,迅速加异丙醇溶解并定量稀释制成每1mL含维生素A9~15单位。在300nm、310nm、325nm与334nm四个波长处测定吸光度,并测定吸收峰的波长。吸收峰的波长应在323~327nm,且300nm波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值应不超过0.73,按下式计算校正吸光度4实验步骤

5结果与分析为何不直接以紫外分光光度法测定维生素A的含量,而要采用较为烦琐的三点校正法?实验七

枸橼酸铋钾胶囊质量

分析1实验目的了解化学药质量分析检测的特点;掌握胶囊剂质量分析的项目;巩固容量分析法测定药物含量的操作