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DB22DB22/T1675—2012蔬菜中单核细胞增生李斯特菌微生物分子MolecularsubtypingofmonocytogenesListeriainvegetables——PFGE吉林省质量技术监督局发布I1本标准适用于蔬菜中单核细胞增生李斯特氏凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有4.2Half-Fraser培养基：见附录A.25g(mL)-225mL增菌培养基（Half-Fraser均PFGE分子分型37.3.4生化鉴定：挑取纯培养的单个可疑菌落，进行过氧化氢酶试验显的箭头状溶血现象，其他单核细胞增生李斯特氏菌++-+--V---4+-+-+（-）-+--V+--------V---），），5μL/胶块μL/10小胶块μL/15小胶块μL/胶块μL/10胶块μL/15胶块2μL4μL脂糖凝胶置于凝胶成像系统中采集图像。确保图像是整胶图像并且以.tif形式保存，便于后续分析。6A.1.1基本成份胰蛋白胨5.酵母浸膏氯化钠A.1.2氯化锂溶液氯化锂A.1.3萘啶酸钠溶液7A.1.4盐酸吖碇黄素溶液水柠檬酸铁(Ⅲ)铵水将柠檬酸铁(Ⅲ)铵溶于水中，过滤除菌。A.1.6全培养基柠檬酸铁(Ⅲ)铵溶液（A.1.5）8A.2Fraser肉汤A.2.1基本成份水A.2.4全培养基使用前，在各个试管（10mL）分别加0.1mLA.2.2溶液和A.2.3溶液，缓缓混合均匀。A.3.1琼脂基础哥伦比亚琼脂9柠檬酸铁(Ⅲ)铵水A.3.2.1.1成分放线菌酮40硫酸黏菌素盐20.0mg头孢双硫唑甲氧将上述成分物质溶解于乙醇/水溶液中，过滤A.3.3制备全培养基高压灭菌的琼脂基础（A.3.1）冷至47℃时，在无菌条件A.4.1琼脂基础胰蛋白胨6.0g酵母浸膏水A.4.2萘啶酸钠溶液萘啶酸钠0.02A.4.3头孢他啶溶液头孢他啶0A.4.4硫酸多粘菌素B溶液水A.4.5放线菌酮溶液水A.4.5.3补充液然后冷却至48℃~50℃。A.4.6全培养基待琼脂基础冷至约47℃时，分别加入上述A.4.2至A.4.6溶液。每只平板内A.5胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-水A.6胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-水A.7糖类利用肉液（鼠李糖和木糖）水糖（鼠李糖和木糖）5.0gA.8.2.2制备各糖分别加入100mL水中溶解，过滤除菌。A.7.3全培养基A.8动力试验琼脂水将各组份加入水中加热溶解（如必要如需要调节PH值使其灭菌处理后25℃时pH值为A.9CAMP培养基和试验菌株A.9.1琼脂基础A.9.2绵羊血培养基A.9.3全培养基只培养皿不多于3mL，凝固。如基础培养基是以前就准备好的，应先置于37℃温箱保温20min，然后A.9.4CAMP反应菌株执行CAMP反应需要β-溶血的金黄色葡萄球菌（例如N斜面（A.5.235℃或37℃培养24h～28h，或直到开始生长，然后储存于冰箱3℃±2℃,至少每月A.11蛋白酶K（ProteinaseK）储液无菌超纯水中
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