T∕CROAKER 009-2026 大黄鱼活体运输病原控制规程

1CCSB52T/CROAKERRegulationsforpathogencontrolinthetransport宁德市渔业协会发布I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由宁德市渔业协会提出并归口。本文件起草单位：福建省农业科学院生物技术研究所、宁德市渔业协会、东海水产研究所宁德创新研究院、中国水产科学研究院东海水产研究所、宁波市海洋与渔业研究院、福建夏威海洋牧场有限公司。本文件主要起草人：龚晖、韩承义、郭全友、林能锋、池洪树、沈伟良、许斌福、潘滢、张颀宜、蔡述秋、林娜、周帅。1大黄鱼活体运输病原控制规程本文件规定了大黄鱼（Larimichthyscrocea）活体运输前病原控制要求、运输过程管理、运输后管理和运输记录。本文件适用于继续养殖的大黄鱼运输的病原控制。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB11607渔业水质标准GB/T27638活鱼运输技术规范GB/T36191真鲷虹彩病毒病诊断规程GB/T34733海水鱼类刺激隐核虫病诊断规程SC/T7011.1水生动物疾病术语与命名规则第1部分：水生动物疾病术语SC/T7015病死水生动物及病害水生动物产品无害化处理规范SC/T7211传染性脾肾坏死病毒检测方法SC/T7216鱼类病毒性神经坏死病诊断方法DB51/T2913大口黑鲈诺卡氏菌病诊断和防治技术规程农业农村部水产养殖用药明白纸农业农村部饲料添加剂产品目录3术语和定义SC/T7011.1界定的术语和定义适用于本文件。4运输前病原控制要求4.1疾病正在流行的地区不应输出或输入大黄鱼。4.2出现以下情况的大黄鱼不应对外运输。4.2.1运输前出现批量死亡的大黄鱼。4.2.2出现刺激隐核虫病、盾纤毛虫病、淀粉卵涡鞭虫病、棘头虫病、本尼登虫病、涡虫病、锥体虫病等寄生虫病，肿大细胞虹彩病毒病、病毒性神经坏死病等病毒病，变形假单胞菌病、诺卡氏菌病等细菌病的病症并检出相应病原的大黄鱼。大黄鱼常见病症及病原检测参照表1。2表1大黄鱼常见病症及病原检测病病病病病死病病E4.2.3群体行为、外观、镜检和剖检未见明显异常，检出肿大细胞虹彩病毒、神经坏死病毒、锥体虫的大黄鱼。4.3活鱼运输前，宜使用列入《农业农村部水产养殖用药明白纸》和《农业农村部饲料添加剂产品目录》且具有免疫调节作用的投入品。4.4运输前大黄鱼宜停饵1d～2d。4.5运输和暂养过程用水水质应符合GB11607的规定。4.6运输前应做好运输设施和工具的消毒。5运输过程管理5.1宜使用活水车或活水舱运输，活水车和活水舱应符合GB/T27638的要求。5.2运输密度参照附录H，运输时长不宜超过72h。5.3活水舱运输，宜在小潮和平潮时进行装卸，养殖海区水温低于14℃或高于25℃,或遇到台风、暴雨等恶劣天气时不宜开展运输工作。5.4活水车运输时，输出地水温高于20℃时应将运输容器起始水温调至20℃,运输过程水温不宜超过22℃,运输水体溶氧量应达到8mg/L以上。卸苗前应将运输水温逐步调节至与目的地水温差不超过2℃。5.5运输过程中应随时检查运输水体水温、溶解氧等指标是否异常，并及时清理漂浮物和濒死鱼，濒死鱼应按SC/T7015处理。6运输后管理6.1运输结束后，应对运输的设施、工具进行消毒处理。6.2运输至目的地的大黄鱼可采取《农业农村部水产养殖用药明白纸》中许可使用的药物消毒。6.3运输至目的地的大黄鱼宜隔离养殖30d以上，确认无异常后方可投入养殖区。36.4运输至目的地的大黄鱼次日可少量投饵，若大黄鱼摄食积极，逐渐增加投饵量至正常水平。6.5开始摄食后，宜使用列入《农业农村部水产养殖用药明白纸》和《农业农村部饲料添加剂产品目录》且具有免疫调节作用的投入品。7运输记录应参照附录I做好记录，所有记录文件保存期限不应少于2年。4（规范性）盾纤毛虫检测A.1病原大黄鱼盾纤毛虫病的病原主要是贪食迈阿密虫（Miamiensisavidus）（图A.1），此外，水滴伪康纤虫（Pseudocohnilembuspersalinus）、后阿脑虫（Metanophryssp.）等盾纤毛虫也可感染大黄鱼。A.2患病鱼症状患病鱼游动迟缓、缺乏方向性，颌部及体表、鳍条基部发白，眼常白浊，严重时体表和鳃常出现充血和溃烂症状。A.3镜检镜检大黄鱼鳃、鳍条、脑、眼、体表黏液等组织，见前端稍尖，后端钝圆，体长约为20µm~40µm，体宽约为15µm～25µm的水滴型（瓜子形）活动虫体，虫体表面被有纤毛。据此可判断大黄鱼感染了盾纤毛虫。A.4PCR检测提取大黄鱼病灶组织DNA，以健康大黄鱼DNA为对照，PCR引物为：SSU244-R：5’-GTGAATCATAGTAACTGATCGA-3’，SSU1117-F：5’-TCCTTTAAGTTTCAGCCTTGCG-3’。PCR反应体系为：10×PCR缓冲液5μL，dNTPs2μL，TaqDNA聚合酶0.5μL，模板DNA1μL，浓度为10μmol/L的引物SSU244-R、引物SSU1117-F各2μL，灭菌超纯水补足至50μL。PCR反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s、54℃退火30s、72℃延伸1min，扩增35个循环；72℃终延伸7min。若病灶组织扩增出约877bp大小的条带且扩增出的条带与NCBI数据库中盾纤毛虫18SrDNA序列同源性高于98%，而对照样品为阴性。则判断为盾纤毛虫病原检测结果为阳性。56（规范性）淀粉卵涡鞭虫检测B.1病原淀粉卵涡鞭虫病的病原是眼点淀粉卵涡鞭虫（Amyloodiniumocellatum）。B.2患病鱼症状少量淀粉卵涡鞭虫寄生时，病鱼症状不明显，大量寄生时，病鱼摄食能力下降、游动缓慢、常磨擦固体物或在水面窜游，口常不能闭合，呼吸加快，鳃盖闭合无规律。肉眼可见病鱼体表、鳍条上有大量小白点，体表常出现米汤样白膜。剖检病鱼可见鳃部也可见白点。严重感染该病的鱼鳃丝呈灰白色。B.3镜检镜检大黄鱼体表黏液、鳃丝、鳍条等组织，见梨形或球形虫体，虫体直径大小通常为20µm~150µm，最大可达350µm，以假根状突起固着在鱼体上（图B.1）。据此可判断大黄鱼感染了淀粉卵涡鞭虫。7棘头虫检测C.1病原大黄鱼棘头虫病的病原主要是鲷长颈棘头虫（Longicollumpagrosomi）。C.2患病鱼症状患病大黄鱼表现出摄食量下降，肛门红肿，鱼体消瘦等症状,剖检可见大量棘头虫的吻和颈穿透中后肠壁（图C.1）。C.3镜检用解剖镜镜检带虫肠道或剖离的虫体，见体长9mm~15mm的虫体，由躯干、颈和吻端三部分组成，躯干为圆柱形，光滑无棘，颈杆状，吻的后端形成一球形泡（图C.2）。据此可判断大黄鱼感染了棘头虫。8（规范性）本尼登虫检测D.1病原大黄鱼本尼登虫病的病原主要是梅氏新本尼登虫（Neobenedeniamelleni）。D.2患病鱼症状患病鱼常表现出窜游或磨擦网衣行为、体表黏液增多、部分鳞片脱落、眼充血、头部或尾柄溃烂等症状，淡水浸泡后有白色椭圆扁平虫体脱落。D.3镜检用解剖镜和显微镜镜检虫体，虫体大小为（3.5～6.6）mm×（3.1～3.9）mm，虫体前突，两侧有两个小圆形的前吸器，后端有一个圆形的后吸器（图D.1）。据此可判断大黄鱼感染了本尼登虫。Neobenedeniagirellae9（规范性）涡虫检测E.1病原大黄鱼涡虫病的病原主要是拟格拉夫涡虫（Pseudografillasp.）。E.2患病鱼症状患病鱼出现食欲下降，鳃盖、唇部和鳍条出血、溃烂。E.3镜检镜检鳃组织和体表黏液组织，见游动较快的虫体，虫体大小为（0.247~0.598）mm×（0.124~0.278）mm，背腹扁平、两侧对称，体前端具1对明显眼点（图E.1）。据此可判断大黄鱼感染了涡虫。锥体虫检测F.1病原感染大黄鱼的锥体虫（Trypanosomasp.）与感染淡水鱼的锥体虫（Trypanosomacarassii）亲缘关系较近。F.2患病鱼症状早期发病鱼部分鳞片脱落，出现白斑，严重时体表大面积皮肤剥落、溃烂，病鱼表现出贫血症状，血色淡，红细胞数显著少于健康鱼。F.3镜检镜检大黄鱼血液或鳃、脾等内脏组织涂片，见扭曲运动的虫体，虫体体长约20µm～40µm，具波动膜，体前端有一较长自由鞭毛，细胞核位于体中央，体后端有具椭圆形动基体（图F.1）。据此可判断大黄鱼感染了锥体虫。（规范性）变形假单胞菌检测G.1病原变形假单胞菌病的病原是是变形假单胞菌（Pseudomonasplecoglossicida）。G.2发病鱼症状患病鱼摄食量减少，外观无明显异常，脾、肾、肝等内脏组织表面肉眼可看到白点。G.3镜检对白点取样进行压片或涂片40x显微镜观察，可见大量直杆状或微弯曲状，约（0.5～1.0）µm×（1.5～5.0）µm的活动菌体。据此可判断大黄鱼感染了细菌。G.4PCR检测PCR所用引物为：pfliC-F:5’CCGTTAACACCAACACCACC3’；pfliC-R:5’GTCAGCTGGGCAGTTTCAG3’，PCR反应体系50μL，10×PCR缓冲液5μL，dNTPs2μL，上、下游引物各1μL，TaqDNA聚合酶0.5μL，模板为从病灶处分离培养的单菌落，灭菌超纯水补足至50μL。扩增反应条件：95℃预变性5min；95℃变性30s，58℃退火40s，72℃延伸30s，共30个循环；72℃延伸10min。若扩增出大小约750bp的核酸片段，且所扩增出的核酸序列与参考序列（图G.1）置信度大于98%，而对照样品扩增结果为阴性。可判定变形假单胞菌检测结果为阳性。1CCGTTAACACCAACACCACCTCTCTGGGCGTTCAGAAAAACCTGAACCGTGCTTCCGATGCACTGAGCACCTCGATGACCCGTCTGTCCTCCGGCCTGAA101AATCAACAGCGCCAAAGACGACGCCGCCGGCCTGCAGATCGCTACCCGCA151TGACCTCGCAGATCCGCGGTCAGACCATGGCAATCAAAAACGCCAACGAC201GGTATCTCCATCGCCCAGACCGCTGAAGGCGCGATGCAAGAGCAGACCAA251CATCCTGCAGCGTATGCGCGAACTGGCAGTCCAGTCGCGAAACGACTCGA301ACAGCACCGAAGACCGCAAAGCGCTGAACAAAGAATTCGCTCAGATGTCC351GACGAGCTGAGCCGTATTGCCAAGTCCACCCAGCTGAACGGCAAGAACCT401GCTGGACGGCACCGCTGGCAAGCTGACCTTCCAGGTCGGTTCCAACTCGG451GCGCTGACAACCAGATCAGCATCAGCCTGGACAGCGGCTTCGACGCCGCCAGCCTGAGCGTTGACTCGGCTACCATCGCCATCACCGGTTCCACCAGCGACGAAGCCGAAGCCAGCATGAACGCTGCCCTGGACGCTATCGACCTGGCTC601CGCAGACCATCAACACCACCCGTGCCGACCTGGGTGCTTCGCAGAACCGT651CTGACCAGCACCGTCAACAACCTGCAAAACATCAACGAAAACGCCGAAGC701CGCTCGTGGCCGTGTACAGGACACCGACTTCGCTGCTGAAACTGCCCAGCACTGCCCAGC751TGACTGAC（规范性）活体大黄鱼运输密度表运输工具鱼体长运输密度活水舱≤7cm10000～8000尾／m³8cm～10cm4000～3000尾／m³30～50kg／m³活水车≤7cm12000～10000尾／m³8～10cm5000～4000尾／m³100～110kg／m³1（资料性）大黄鱼运输记录表记录单编号：一、输出地和输入地基本情况输出单位：；输出地（起运地）：；具体位置养殖方式：□陆基工厂化□池塘□近岸网箱□围网□海上养殖平台□养殖工船周边病害流行情况：□无□有，病种：；输入单位：：；输入地（目地）:具体位置养殖方式：□陆基工厂化□池塘□近岸网箱□围网□海上养殖平台□养殖工船；周边病害流行情况：□无□有，病种记录人：，记录时间：年月日。二、输出鱼情况：输出鱼规格（体长/体重）:cm/g；输出鱼数量：尾。鱼健康状态：；是否出现批量死亡:□无□有，原因是否有病症表现：□无□有，症状：；病症检测单位：；检测人：；时间；病原检测结果：。2三、运输基本信息动输前处理措施: