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备案号：41840-20142014-04-30实施2014-04-30实施吉林省质量技术监督局发布I本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准主要起草单位：吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。本标准主要起草人：史艳宇、刘金华、王伟、刘晓晖、赵立群、侯宇、柴竹林、张涛。1件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测2c)探针：5'-FAM-TTATTGGCGATAGCCTGGCGGTGGGTTTTGTTG-TAMRA-3'5.3dNTP:dATP(deoxyadenosinetriphosphate,脱氧鸟苷三磷酸)、dCTP(deoxycyt(deoxythymidinetriphosphate,脱氧胸苷三磷酸)。5.510×PCR缓冲液：含200mmol/LTris-HCl(pH8.4),200mmol/L氯化钾(KCl)6.1实时荧光PCR仪。取BPW增菌液1mL于1.5mL无菌离心管中，12000r/min离心5min,尽量吸弃上清液，使用细菌基3式中：c——DNA浓度，单位为纳克每微升(ng/μL);A—260nm处的吸光值；N—核酸稀释倍数。7.4实时荧光PCR检验7.4.1实时荧光PCR反应体系10×PCR缓冲液2.5μL、引物对(10μmol/L)各1μL、探针(10μmol/L)1μL、dNTP(10mmol/L)1μL、TaqDNA聚合酶(5U/μL)0.5μL、模板DNA2μL、用灭菌去离子水补足体积至25μL。94℃预变性2min,94℃变性20s,64℃退火延伸1min,同时收集FAM荧光，共进行40个循环。反应产物可在4℃保存。不同仪器、不同TaqDNA聚合酶可根据要求将反应条件做适当调整。检验过程中分别设空白对照、阴性对照、阳性对照。空白对照设为以无菌水代替DNA模板；阴性对照采用非沙门氏菌的DNA作为实时荧光PCR反应的模板；阳性对照采用沙门氏菌DNA作为实时荧光PCR反应的模板。8结果与判断8.1质量控制——阴性对照：无扩增曲线，Ct值≥40.0;——阳性对照：出现典型的扩增曲线，Ct值应≤35.0;否则，视为无效。8.2结果判定——Ct值≥40.0,可判定样品实时荧光PCR结果为阴性。——Ct值≤35.0,可判定该样品实时荧光PCR结果为阳性，按GB/T13091进行确证。——35.0<Ct值<40.0,此时应适当增加DNA模板量重做实时荧光PCR检测。重做结果Ct值≥40.0者为阴性，否则实时荧光PCR结果为阳性，按GB/T13091进行确证。9结果表述9.1实时荧光PCR结果阴性，可直接报告未检出沙门氏菌。9.2确证试验结果为检出沙门氏菌，则报告检出沙门氏菌。9.3确证试验结果为未检出沙门氏菌，则报告未检出沙门氏菌。10生物安全措施

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