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文档简介

试验二人血清蛋白质含量测定第1页蛋白质测定主要方法依据蛋白质元素组成——凯氏定氮法；依据蛋白质组成特点建立比色法——双缩脲法，lowry改良法，考马斯亮蓝染色法，BCA法；依据蛋白质吸收特征建立紫外分光光度法；第2页第3页蛋白质紫外吸收蛋白质分子中含有共轭双键芳香族氨基酸。它们含有吸收紫外光性质。其最高吸收峰在280nm波优点，且在此波长内吸收峰光密度值与其浓度成正比。第4页TyrTrp第5页双缩脲法测定蛋白质

试验原理——双缩脲反应180ºC第6页双缩脲在碱性条件下可与铜结合成紫红色复合物

第7页第8页Cu2+OH-蛋白质含有双缩脲结构，在碱性条件下也能与铜结合成紫红色复合物在一定范围内，颜色深浅与蛋白质浓度成正比——1-10mg，所以经过比色法能够测定蛋白质含量。第9页标准曲线作用和绘制依据Lambert-Beer定律，A与C成正比配制一系列标准液C1、C2、C3

，在

max下，测对应A1、A2、A3……。AxCx第10页判断测定误差，确定方法可靠性。大批样品分析时，可省略屡次计算，直接取得样品测定结果。

绘制曲线注意点：

1.横轴与纵轴百分比

2.各坐标点应与原点连成一条直线

3.直线经过尽可能多点，不在直线上点均匀分布在直线两边第11页试验步骤1234567

标准管测定管空白管试剂蛋白质标准液（ml）0.20.40.60.81.0

蛋白质测定液（ml）1.0

0.9%NaCL（ml）0.80.60.40.21.0

双缩尿试剂（ml）4.04.0

4.0

4.0

4.04.0

4.0

37ºC水温育20分钟，540nm比色，测定吸光值第12页双缩脲法测定蛋白质浓度123

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