LYT 3308-2026《植物花青素》（纯净版）

1植物花青素1范围本文件规定了植物花青素的技术要求、取样、检验规则和标志、包装、运输及贮存,描述了相应产品的试验方法。本文件适用于以落叶松树皮、越橘果实、桑葚及黑枸杞为原料制得的植物花青素。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定GB5009.4食品安全国家标准食品中灰分的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T2640—2014植物源性食品中花青素的测定高效液相色谱法3术语和定义下列术语适用于本文件术语和定义。3.1原花青素procyanidins由不同数量的儿茶素或表儿茶素通过缩合或聚合形成的一类物质。注:结构式见图1。OHHOHHOOHOHOHOHOHOHHOOH图1原花青素结构式3.2花青素anthocyanidin是一种以糖苷形式存在于植物细胞液中的水溶性色素。注:结构式见图2。2RR4R4+R4A).R2-O、R4A).R2R4R,和R2是H、OH或OCH3R3是H或糖基R4是OH或糖基图2花青素结构式4技术要求4.1感官指标产品感官指标应符合表1及表2要求。表1原花青素产品感官指标项目指标落叶松树皮原花青素越橘果实原花青素色泽红棕色粉红色至紫红色气味气微,味微,具落叶松特有的气味气微,具越橘特有的气味形状固体粉末状固体粉末状表2花青素产品感官指标项目指标黑枸杞花青素越橘果实花青素桑葚花青素色泽暗红色粉红色至紫色红色至棕色气味具黑枸杞特有的气味,无异味气微,具越橘特有的气味具桑葚特有的气味,无异味形状固体粉末状固体粉末状固体粉末状4.2理化指标原花青素理化指标应符合表3规定,花青素理化指标应符合表4规定。3表3原花青素理化指标项目落叶松树皮原花青素越橘果实原花青素优等品一等品合格品优等品一等品合格品原花青素含量/%≥水分/%≤灰分/%≤细度(180μm筛通过率)/%≥表4花青素理化指标项目黑枸杞花青素越橘果实花青素桑葚花青素花青素含量/%≥水分/%≤灰分/%≤细度(180μm筛通过率)/%≥5取样5.1取样规则应采用不锈钢或硬质塑料材质的取样器。取样过程中不应带进杂质,应避免在取样过程中引起样品吸水、氧化等。取样以批为单位,每批次取样数应不少于3个。随机从包装单位3个不同部位共采取约400g样品,混合均匀后以四分法缩分。5.2样品贮存将试样平均分装于2个棕色磨口瓶中,一瓶待检,一瓶留样备用。标签标明取样名称、来源、编号、样6试验方法6.1感官指标检验取少许样品,置于白瓷盘中,在自然光下采用目测、鼻嗅等方法。6.2原花青素含量按照附录A中规定的试验方法进行测定。6.3花青素含量6.3.1高效液相色谱法(仲裁法)按照NY/T2640—2014规定执行。46.3.2紫外分光光度法越橘花青素、桑葚花青素按照附录B中规定的检验方法进行测定,黑枸杞花青素含量测定按照附录C中规定的检验方法进行测定。6.4水分按照GB5009.3规定执行。6.5灰分按照GB5009.4规定执行。6.6细度称取25g样品,置于孔径为180μm不锈钢筛,加盖振摇。按水平方向旋转振摇至少3min,并在垂直方向轻叩筛。取筛下粉末称量,计算其所占比例(%)。重复上述操作,直至药筛遗留粉末质量差不超过前次遗留粉末质量的5%或两次质量的差值不大于0.1g。试样中细度通过率,按式(1)进行计算:M…(1)式中:M—试样中细度(过180μm筛)通过率,单位为%;m1—试样的质量,单位为克(g);m2—180μm药筛筛下的颗粒及粉末质量,单位为克(g);计算结果保留3位有效数字。7检验规则7.1检验分类出厂检验项目为感官及含量,检验合格后方可出厂。7.1.2型式检验出现下列情况之一时,应进行型式检验。a)首次批量生产时,长期停产后恢复生产时;b)产品正常生产时,每半年至少进行一次;c)当原辅材料及生产工艺发生较大变动时;d)质量监督机构提出型式检验要求时。型式检验包括第4章相应产品的所有项目。7.2判定规则和复检规则7.2.1检验结果中,如有指标不符合要求时,应加倍抽样进行复检。如复检仍不符合要求,则判定该批5产品为不合格。7.2.2供需双方对检验结果如有争议,可由双方按标准引用的取样方法共同取样3份,各存1份,另1份委托具有相应资质的检验机构进行仲裁分析。7.3组批规则同一生产批的产品组成1批。8.1标志8.2包装固体产品用瓦楞纸桶装,内衬塑料袋,或按客户要求包装。8.3运输运输应轻卸轻放,防止日晒、雨淋,并远离热源,不应与有害、有毒和易污染物品一起混运。8.4贮存6(规范性)原花青素的测定方法A.1试剂和溶液A.1.1纯水:色谱纯。A.1.2硫酸铁铵:分析纯。A.1.3正丁醇:分析纯。A.1.4盐酸:分析纯。A.1.5甲醇:分析纯。A.1.6原花青素标准品:原花青素CAS号4852226,纯度≥95%。A.1.72mol/L盐酸溶液:准确量取盐酸20mL于烧杯中,加100mL水,摇匀。A.1.82%硫酸铁铵溶液:精确称取2.0g硫酸铁铵,置于100mL小烧杯中,加入30mL~50mL的2mol/L盐酸溶解后,放冷至室温,转移到100mL容量瓶中,再用2mol/L盐酸溶液定容至刻度,摇匀。A.1.95%盐酸正丁醇(V/V)溶液:于100mL小烧杯中添加大约2/3体积的正丁醇,量取5.0mL盐酸加入,放冷至室温,转移到100mL容量瓶中,再用正丁醇定容至刻度,摇匀。A.2仪器设备A.2.1分析天平:感量0.0001g。A.2.2紫外可见光分光光度计:波长范围至少覆盖110900nm,适配原花青素280nm、500nm等常用检测波长;波长精度≤±1nm,确保特征吸收峰精准定位;吸光度线性范围至少03Abs;杂散光低,避免低浓度样品检测失真,保障定量准确性;连续测量中吸光度示值漂移小;具备基线自动校正功能,减少光学系统误差。A.2.3容量瓶:10mL、50mL、100mL。A.2.4电热恒温水浴锅:温度精度±1℃。A.2.5涡旋混合仪。A.2.6具盖安瓿瓶:10mL。A.2.7封口钳。A.2.8超声波提取机:常用频率20100kHz;功率密度可调节,适配不同原料细度,防止功率过高破坏原花青素结构;应带控温或恒温组件,温度控制在3060℃为宜,因原花青素受热易分解,避免提取过程中温度过高导致其活性和得率下降;具备精准定时功能,定时范围应覆盖1060min的常用提取时长。A.3操作方法A.3.1标准溶液的配制A.3.1.1原花青素标准储备液(1.0mg/mL):精密称取原花青素标准品10mg,精确到0.1mg,置于10mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,即得浓度为1.0mg/mL标准储备液,溶液现用现配。2.5mL分别置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得浓度为50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL的标准系列工作溶液。7A.3.2供试品溶液配制精密称取供试品50.0mg~100.0mg,精确到0.1mg,加甲醇溶解并稀释定容至100mL容量瓶中,10mL,置于100mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。A.3.3标准曲线的绘制准确吸取原花青素标准系列工作液各1mL放置于安瓿瓶中,加入5%盐酸正丁醇溶液(A.1.9)6mL,2%硫酸铁铵溶液(A.1.8)0.2mL,混匀,用封口钳将其密封。置于沸水浴中加热反应40min,取出,立即置于冰水浴中冷却至室温,以甲醇为空白,于550nm波长处测定吸光度,显色在1h内稳定以吸光度为纵坐标,原花青素浓度为横坐标绘制标准曲线。A.3.4样品溶液的测定精密吸取A.3.2中供试品溶液1mL,置于安瓿瓶中,以相应试剂为空白,测定样品吸光度,用标准曲线计算试样中原花青素含量。A.4结果计算原花青素含量以质量分数X计,数值以%表示,按式(A.1)计算:X……(A.1)式中:X—原花青素含量,%;C—供试品中原花青素的含量,单位为微克每毫升(μg/mL);f—稀释倍数;V—供试品溶液总体积,单位为毫升(mL);m—供试品的质量,单位为克(g);计算结果表示到小数点后一位。A.5精密度两次重复测定结果相对标准偏差应不大于5%。附录B(规范性)8花青素的测定方法(紫外分光光度法)B.1试剂和溶液B.1.1纯水:GB/T6682规定的二级水。B.1.2盐酸:分析纯。B.1.3甲醇:分析纯。B.1.42%的盐酸甲醇溶液(m/V):准确量取盐酸47mL,加入800mL甲醇中,再用甲醇稀释至1000mL,摇匀,即得。B.1.5矢车菊素3O葡萄糖苷:CAS号7084244,纯度:≥95%(HPLC)。B.2仪器设备B.2.1分析天平:感量0.0001g。B.2.2超声波清洗仪:常用频率20100kHz;功率密度可调节,适配不同原料细度,防止功率过高破坏花青素结构;需带控温或恒温组件,温度控制在3060℃为宜,因花青素受热易分解,避免提取过程中温度过高导致其活性和得率下降;具备精准定时功能,定时范围需覆盖1060min的常用提取时长。B.2.3紫外可见分光光度计:波长范围至少覆盖190900nm,适配花青素520531nm左右的特征吸收波长;波长精度≤±0.5nm,保证检测波长定位精准;吸光度测量范围≥02A;透射比准确度≤±0.5%;需配备1cm石英比色皿;支持吸光度、透射比测量模式,能完成标准曲线拟合,一阶拟合相关系数R2≥0.999;连续测量时吸光度漂移小;具备基线自动校正和波长自动校准功能。B.3操作方法B.3.1供试品溶液配制精密称取供试品15~20mg(精确至0.1mg),加入60mL2%盐酸甲醇溶液(m/V),在80℃水浴中回流水解0.5小时后冷却至室温,用2%盐酸甲醇溶液(m/V)转移完全并定容至100mL,摇匀,得试液A。然后精密吸取5mL试液A到50mL容量瓶中,用2%盐酸甲醇溶液(m/V)定容至刻度,摇匀,制得待测试液B。溶液应澄清透明,若混浊,则用滤纸过滤,开始的滤液约10mL弃去,之后的滤液用作检测。B.3.2测定方法以2%盐酸甲醇溶液(m/V)作空白,在528nm吸收波长、1cm比色杯条件下测吸光度A。B.4结果计算花青素含量以矢车菊素的质量分数Y计,数值以%表示,按式(B.1)计算:Y……(B.1)式中:Y—花青素含量,%;A—供试品溶液B在吸收波长528nm下的吸光度;9V—供试品溶液的稀释体积,mL;718—矢车菊素3O葡萄糖苷的百分吸光系数(E);m—供试品称样量,g;计算结果表示到小数点后一位。B.5精密度两次重复测定结果相对标准偏差应不大于5%。附录C(规范性)10黑枸杞花青素的测定方法(pH示差法)C.1试剂和溶液C.1.1纯水:GB/T6682规定的二级水。C.1.2氯化钾:分析纯。C.1.3结晶乙酸钠:分析纯。C.1.4浓盐酸:分析纯。C.1.5无水乙醇:分析纯。C.1.6氯化矮牵牛素3O芸香糖苷(反对香豆酰)5O葡萄糖苷,CAS号69915099,纯度:≥98%(HPLC)。C.1.7氯化矮牵牛素3,5二氧葡萄糖苷,CAS号25846735,纯度:≥95%(HPLC)。C.1.82mol/L盐酸溶液:准确量取盐酸20mL于烧杯中,加100mL水,摇匀。C.1.980%乙醇溶液:准确量取无水乙醇800mL于1000mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。C.1.100.025mol/L氯化钾缓冲溶液:称取0.93g氯化钾,置于1000mL烧杯中,加入490mL水溶解后,加浓盐酸1.5mL,用2mol/L稀盐酸溶液调节pH值至1.0,转移到500mL容量瓶中,再用水定容至刻度,摇匀。C.1.110.4mol/L乙酸钠缓冲溶液:称取27.22g结晶乙酸钠固体,置于1000mL烧杯中,加入480mL水溶解后,加浓盐酸9.5mL,用2mol/L稀盐酸溶液调节pH值至4.5,转移到500mL容量瓶中,再用水定容至刻度,摇匀。C.2仪器设备C.2.1分析天平:感量0.0001g。C.2.2紫外可见光分光光度计:波长范围至少覆盖110900nm,波长精度≤±1nm,确保特征吸收峰精准定位;吸光度线性范围至少03Abs;杂散光低,避免低浓度样品检测失真,保障定量准确性;连续测量中吸光度示值漂移小;具备基线自动校正功能,减少光学系统误差。C.2.3pH计:精度0.01。C.2.4超声波清洗机:常用频率20100kHz;功率密度可调节,适配不同原料细度,防止功率过高破坏原花青素结构;应带控温或恒温组件,因花青素受热易分解,避免提取过程中温度过高导致其活性和得率下降,温度控制在3060℃;具备精准定时功能,定时范围应覆盖1060min的常用提取时长。C.2.5台式离心机:转速≥8000r/min。C.3操作方法C.3.1供试品溶液配制精密称取供试品10mg(精确至0.1mg),加入50mL提取液(浓盐酸和80%乙醇溶液,体积比为3∶97)稀释2~10倍,得到试液A。取1mL试液A