《地理标志产品 施秉太子参 组织培养与脱毒种苗扩繁技术规程》

1范围

本规程规定了地理标志产品施秉太子参组织培养技术术语和定义，组织培养、驯化、

优质种苗快速繁育技术。

本规程适用于地理标志产品施秉太子参脱毒组培苗扩繁生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本

适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB437硫酸铜（农用）。

GB5749生活饮用水卫生标准。

GB19489实验室生物安全通用要求。

GB/T317白砂糖

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备。

GB/T628化学试剂硼酸。

GB/T647化学试剂硝酸钾。

GB/T659化学试剂硝酸铵。

GB/T664化学试剂七水合硫酸亚铁（硫酸亚铁）。

GB/T666化学试剂七水合硫酸锌（硫酸锌）。

GB/T671化学试剂硫酸镁。

GB/T1272化学试剂碘化钾。

GB/T1274化学试剂磷酸二氢钾。

GB/T1401化学试剂乙二胺四乙酸二钠。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

GB/T15899化学试剂一水合硫酸锰（硫酸锰）。

GB/T22278良好实验室规范原则。

T/SBZYC004地理标志产品施秉太子参种植技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1脱毒组培苗

选用优良太子参植株茎尖、茎段作为外植体，采用植物组织培养技术，培养再生出来的

脱毒试管苗。

4组织培养

4.1组培室要求

符合GB19489和GB/T22278规定。

4.2培养基选择

以MS为基础培养基，所用药品符合GB437、GB/T628、GB/T647、GB/T659、GB/T

664、GB/T666、GB/T671、GB/T1272、GB/T1274、GB/T1401、GB/T15899的规定。

4.3培养基制备

4.3.1母液配制和保存

将培养基配方扩大若干倍，一般为10倍~100倍的浓缩液体。药品配制严格按照GB/T603

规定方法配制，用水应符合GB/T6682规定要求。称取药品的药匙必须专药专用。将配制好

的母液分别贴上标签，注明母液名称、配制倍数和日期，贮存在2℃~4℃的冰箱中，贮藏时

间控制在90d内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配置。

4.3.2植物生长调节剂母液配制和保存

将各种植物生长调节剂单独配成浓度为50mg/100mL~100mg/100mL。多数植物生长调

节剂难溶于水，其溶解方法：NAA、IBA、IAA等常用少量95%的乙醇溶解，然后加热溶解，

再加蒸馏水定容。6-BA、KT等先用少量1mol/L盐酸溶解，再加蒸馏水定容。所用水要符

合GB/T6682的要求。

配制好植物生长调节剂分别贴上标签，标签写上名称、配制浓度和日期，贮存在2℃~4℃

的冰箱中，贮藏时间控制在90d内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配置。

4.3.3培养基配制

培养基由MS基础培养基、蔗糖、琼脂、水组成，蔗糖和水分别符合GB317和GB5749规

定。所需蔗糖浓度3g/L，琼脂粉浓度4g/L。

培养基配制流程，见图1。

水分

母液

生长调节剂→混合→加热溶解→定容→调节

蔗糖pH

琼脂分

培养容器→洗涤→干燥→↓装

播种←凝固←冷却←高压灭菌←封口

图1太子参培养基的配制流程图

4.3.3.1诱导培养基为:MS+6-BA0～1.0+NAA0～0.1，按照培养基配制程序配制。

4.3.3.2继代增殖培养基为:MS+6-BA0.5～1.5+NAA0.01～0.1，按照培养基配制程序配制。

4.3.3.3壮苗及生根培养基为:MS+6-BA0+NAA0，按照培养基配制程序配制。

4.3.4pH值调节

太子参培养基最佳pH值控制在5.6~5.8，一般用pH计或pH试纸测试，常用（1mol/L）

NaOH或HCl进行调整。

4.3.5培养基分装和灭菌

将配制好的培养基趁热分装，分装量以占培养容器的1/4～1/3为宜。操作时，尽量避免

将培养基粘到容器口和容器壁上，否则容易引起污染。将已分装好培养基封口并注明配制日

期和培养基种类后即进行灭菌，灭菌锅内压力为0.105MPa、温度达121℃状态下保持

15min～20min进行灭菌。

4.4环境灭菌

对环境进行定期灭菌。方法是用75%乙醇或0.1%新吉尔灭进行喷洒。对无菌操作室（接

种室）、培养室和准备室采用紫外灯灭菌方法。接种所用的超净工作台在空气过滤灭菌的基

础上再配合使用紫外灯照射灭菌20min~30min，再用75%乙醇对超净工作台表面进行擦拭。

4.5接种工具灭菌

接种用的工具、无菌水等必须在灭菌锅内压力为0.105MPa、温度达121℃状态下保持

15~20min进行灭菌。

4.6外植体选择与处理

4.6.1选择生长健壮、无病虫害的优良太子参植株为外植体材料。

4.6.2将太子参的茎尖、茎段用5%~10%洗衣粉漂洗2min~3min，洗去茎尖、茎段上的蜡

质层及泥土、粉尘，用自来水冲洗30min后拿到接种室，用75%酒精表面消毒20s，无菌水

冲洗2次；再用0.1%Hg消毒3min~8min，无菌水冲洗8次~10次，以除去残留消毒液。

4.7外植体诱导培养

将处理好的太子参外植体，在无菌条件下，用解剖刀和解剖针在显微镜下剥离

0.5mm~1mm的茎尖，切取茎段（每段留一个节），分别接种于诱导培养基。茎尖、茎段应

插入培养基，芽不能陷入培养基中。接种后做好标记。经7d~10d培养，芽开始萌动生长，

30d后芽长到1cm~2cm，同时有少量丛芽分化。

4.8继代增殖培养

将诱导出的不定芽转接于继代增殖培养基中，经30d培养，形成丛生芽，并有少量根系

分化。

4.9脱毒检验

获得的丛生芽须经有资质的检验单位检测，确认无毒后，进入壮苗及生根培养。

4.10壮苗及生根培养

将丛生芽转接到壮苗及生根培养基中，经30d左右，形成完整的试管苗，并有根系的分

化。

4.11培养条件

培养温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000LX~3000LX。太子参组织培养技

术流程见图2。

优良单株

↓

块根芽头或种子

↓

微茎尖

↓→未脱毒苗淘汰

病毒检测

↓

脱毒苗

↓

增殖培养→生根培养→炼苗栽培

↓

商品种←2-3代繁殖←原原种

图2太子参组织培养技术流程

5驯化

5.1大棚与基质消毒

移栽前，用0.02%~0.04%高锰酸钾和0.1%~0.5%甲醛对大棚进行熏蒸消毒。用0.04%高锰

酸钾溶液对基质消毒灭菌。

5.2炼苗

试管苗移栽前，将生长健壮、根5条~6条，长0.cm5~1.0cm，带3叶~4叶的试管苗连

同培养瓶放置移栽大棚2d~3d，然后打开瓶口再放置2d~3d，使试管苗逐渐适应外界环境。

5.3脱毒苗移栽

将驯化后的脱毒苗用镊子小心取出，洗去根部培养基，用500倍多菌灵或甲基拖布津浸

泡30min，用自来水冲洗干净后，定植于已灭菌的基质（珍珠岩:腐殖土=1:2）中。移栽后用

遮阳率75%的遮阳网搭小拱棚遮阳，待苗生长5d~7d后拆除。

5.4脱毒苗管理及种参收获

5.4.1脱毒苗移栽后要注意保湿，基质内含水量保持在5%0~60%。移栽一周后，每周喷施

1/2MS营养液1次~2次，定期用500倍多菌灵或甲基拖布津喷洒杀菌剂，预防病虫害发生，

在整个生长期要及时除草。

5.4.2脱毒苗生长180d~210d后，即可收获太子参原原种。

5.5脱毒检验

获得的原原种