（正式版）DB22∕T 3224-2021 《EGFR基因突变检测PCR技术规范》

2021-05-01实施2021-05-01实施I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由吉林省卫生健康委员会提出并归口。本文件起草单位：吉林大学本文件主要起草人：姜艳芳、何佳雪、张鹏、刘思文、刘勇、邹红雁、胡馨元、胡欣彤。1仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本GB/T6682分析实验室用水规格和试验FFPE福尔马林固定石蜡包埋组织(Formalin-FixedandParrffin-Embedded)6.1.3恒温加热器(56℃~90℃可调)。6.1.4恒温水浴锅(可达60℃)。26.1.7医用冰箱：2℃~8℃、-20℃、-80℃。6.1.8离心机：10mL转子，转速不低于10000g/min,可低温离心。6.1.9离心机：1.5mL转子6.1.10实时荧光定量PCR仪。6.2试剂6.2.1除另有规定，本方法试验用水应符合GB/T6682规定的二级水，所用化学试剂均为分析纯。7.2.1FFPE样本保存在2℃~8℃低温运输，最长可以保存3年。7.2.2streck管血液样本避光常温运输，忌暴晒、冷冻，在室温下最多可以保存3d。a)根据样本类型，按照样本数+2(阳性和阴性对照品各一)配制反应体系；b)将配好的PCR体系转移至样本制备间；3a)组织样本：刮取5片FFPE样品至1.5mL离心管中，通过脱蜡、去除RNA、柱提法等步骤提取DNA并进行洗脱及纯化，获得可用于荧光PCR反应的待检DNA,待检的样品的DNA浓度为1.5~b)血液样本通过进行离心、去除RNA、柱提法等步骤提取ctDNA并进行洗脱及纯化，获得可用于c)根据样本类型，将适量已提取的DNA与PCR反应体系进行混合；同时设置NTC阴性和阳性对a)实时荧光定量PCR仪中进行PCR反应，组织样本检测参数见表1。温度℃时间1123b)实时荧光定量PCR仪中进行PCR反应，血液样本检测参数见表2。温度℃时间1123410.1.1阳性对照品为临床阳性样本合成的质粒DNA与血浆DNA混合样本；阴性对照品为超纯水。11.1当检测指标值大于该指标阳性判断值时，11.2当检测指标值小于或等于该指标阳性判断值时11.3组织样本各指标阳性判断值见表3。指标名称阳性判断值26或△CtCut-off值<1126或△CtCut-off值<1126或△CtCut-off值<726或△CtCut-off值<926或△CtCut-off值<726或△CtCut-off值<826或△CtCut-off值<8DB22/T3224—2021511.4血液样本各指标阳性判断值见表4。指标名称阳性判断值E746_S752>AL747_T751>SE746_S752>VL747_T751delCt值FAM-Ct值HEX<11V769_D770insASVD770_N771insSVDV769_D770insASVH773_V7Ct值FAM-Ct值HEX<11Ct值ROX-Ct值HEX<1112.1废弃物应经121℃高压灭菌30min后再弃置。6(资料性)样本接收记录表样本接收记录表见表A