T∕CSF 0147-2026 联邦121制剂质量控制及其林间防治松材线虫病技术规程

TechnicalspecificationforqualitycontrolofFederaitsfieldapplicationagainstp中国林学会发布I 1 1 1 1 1 2 2 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 4 5 7 8 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利本文件由中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究局、泰安市泰山森林病虫害防治检疫站、烟重庆森科生物技术（集团）有限公司、湖北继锋、程庆明、韩永、刘桃生、胡平、刘杰恩、于少杰、李晓娟、杨海青、章彦君1联邦121制剂质量控制及其林间防治松材线虫病技术规程GB/T25415航空施用农药操作LY/T2024轻型直升机喷洒防治林业有害生物一种松材线虫病的预防性制剂，由松材线虫寄生性真菌线虫埃斯特菌（Esteyavermicola）Fxy121线虫埃斯特菌Esteyavermicola一种松材线虫寄生性真菌，在分类上属于真菌界（Fungi子囊菌门（Ascomycota粪壳菌纲线虫埃斯特菌水剂Esteyavermicolaaqueoussolution线虫埃斯特菌可湿性粉剂Esteyavermicolawettablepowder2疫木源小分子疫苗infectedwood-derivedsmallmoleculevac4制剂质量要求4.1线虫埃斯特菌制剂含孢量每毫升线虫埃斯特菌水剂中含有≥1×109个孢子。每克线虫埃斯特菌可湿性粉剂中含有≥1×108个4.2疫木源小分子疫苗质量指标4.3助剂质量控制指标助剂外观为浅黄色透明可流动液体，在水中可以任意比乳化，pH值为5.0～8.0。4.4贮存稳定性线虫埃斯特菌水剂和可湿性粉剂均应密封保存，在4℃~10℃条件下存放180d，孢子萌发率大于5.1联邦121制剂在运输过程中应采取密5.2线虫埃斯特菌水剂出厂后应采用冷藏（4℃~10℃)条件运输，并于冷藏（4℃~10℃)条件下储存；线虫埃斯特菌可湿性粉剂应在25℃以下运输，并于冷藏（4℃~10℃)条件下储存；疫木源小分子疫苗和助剂应在室温条件下运输及储存。运输与储适用于松材线虫病发生较轻的林地（林地受松材线虫侵染致死3或下午（16:00～19:00）作业。气温超过35℃或风速超过4m/s（3级风）时，停止作业。即每公顷添加300mL；在飞防现场将菌液与小分子疫苗和助剂混匀后装机。配制好的药液在2h内使4Rd00%…………（1）Rd——枯死松树减退率；Na——当年累计枯死松树数量，单位为棵。Rc00%…………（2）Rc——校正枯死松树减退率；Rd,c——对照区枯死松树减退率。5A.1线虫埃斯特菌的形态鉴定特征在PDA固体培养基上25℃黑暗培养1d后，产生白色菌丝。第3d分泌墨绿色色素，菌株背面由绿色变为墨绿色，呈绒毛状，菌落边缘光滑。在PDA固体培养基上会产生两种分生孢子，其中，1型分生图A.1给出了线虫埃斯特菌株Fxy121（原Fxy120）在PDA培养基25℃培养5d的菌落形态及分生孢22型分生孢子分生孢子梗1型分生孢子c20µmd20µm6A.2线虫埃斯特菌的分子鉴定特征通过提取试样真菌DNA作为模板，使用线虫埃斯特菌的特异性引物进行PCR扩增反应，琼脂糖凝——上游引物：5’-TCCCTTCTCTCTCTCTGCCC-3’，——下游引物：5’-GATTGGCGTTGATGGGGTTG-3’。线虫埃斯特菌株Fxy121（原Fxy120）特异性基因片段序列（含引物序列TCCCTTCTCTCTCTCTGCCCACTCCCGCCCTCCAGGCATATTCGTCGGGCACGGGTCAGCTCCATTGCCTCCTCCACGAGCTCCAACGCCGACTCCCAGTCCTCCTACACCGCCTCGTCCAACGGACCCAAGACACCCCCGTCGTCCCTTGCCGGCTCCGGCGTCCACCCCCACTCTGGCTCGCTCCTCCCCAGCTCCTTACATACCCCCCTCACACAGCCACCACACATTACCCTACGAGCAATACCAACAAGCTATGAATCAAGGAGCTGCAGACATGTACTACCAGCAATGCCTGGCGGTCAGGGCCCTCCGCCGCCCCCCGTCACGTCTGGTGCCCTCACTCAATACAGCACCAGCCCCCGCTGCTGCCGCCCGGCCCGGCCCAGTACACTAACCCCTCGCCCTACGGCTACCCGAGCGGCCTCACCTCTCCTCCCACCGGGCCCCCCGTGTCCAACCCCATCAACGCCAATC7线虫埃斯特菌水剂和可湿性粉剂含孢量测定将1mL水剂稀释至适当倍数，在显微镜下用血球计数板计孢子数量，然后计算含孢量，每毫升孢子悬浮液含有≥1×109个孢子为合格，具取深度为0.1mm、血球计数板格为25×16个中格，盖上配套专用盖玻片，用吸管吸取配制好的悬浮纸吸去。放在显微镜载物台上静置1min～2min，待浮动的孢子静止后，放大400倍检视计数。将孢子血球计数板计数格为25个中格，每个中格为16个小格，计算双线范围内任一斜对角线上的4个中格s04×T…………（B.1））；S1-S5——5个中格里孢子的数量，单位为个；用精度为千分之一的天平准确称取粉剂1g，加入0.1mL的吐温80和8首先确保pH计已经校准，检查电极是否干净，如有必要，用蒸馏水清洗电极。将电极浸入待测溶液中，确保电极的敏感部分完全浸没。轻轻搅拌溶液或等待读数稳定，记录pH值。测量完成后，取出通过酸碱滴定法对疫木源小分子疫苗的有机酸含量进行测定，有机酸质量分数为2.5%～5.5%为合称取4g氢氧化钠，溶于无CO2水中，并稀释至1L。以邻苯二甲酸氢钾标定其浓度。c（NaOH）——氢氧化钠标准溶液的浓度，单位摩尔每升（m——邻苯二甲酸氢钾的质量，单位为克（g）；V1——氢氧化钠溶液的用量，单位为毫升（mLV2——空白试验氢氧化钠溶液的用量，单位为毫升（mL0.2042——与1.00mL氢氧化钠标准溶液[c(NaOH)=1.0000mol/L]相当的以克表示的邻苯二甲酸取小分子疫苗1mL，稀释10倍，取2mL稀释液置于50mL三角瓶中，滴入2滴酚酞指示剂，用标定X00%…………（C.2）X——样品中有机酸的质量分数，单位为%；c（NaOH）——氢氧化钠标准溶液的浓度，单位摩尔每升（V——滴定消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；60——乙酸的摩尔质量，作为有机酸的平均摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol）；2——所取稀释液的体积，单位为毫升（mL9采用福林酚法测定疫木源小分子疫苗中总酚含量，总酚含量为15g/L～25g/L为合格。准确称取0.1g没食子酸，用50mL蒸馏水溶解、定容至100mL，得到质量浓度为1000mg/L的没食用蒸馏水定容至100mL，配制成质量浓度为0、12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100m取1mL标准液于15mL的试管中，分别加