2026年生物医药研究进展-基于基因工程技术 考试试卷

2026年生物医药研究进展——基于基因工程技术考试试卷2026年生物医药研究进展——基于基因工程技术考试试卷适用：医学研究生、生物制药、生物技术、检验医学、继续教育考核

总分：100分考试时间：120分钟一、单项选择题（每题2分，共30分）基因工程的核心技术环节是（）

A.目的基因的获取

B.基因表达载体的构建

C.目的基因导入受体细胞

D.目的基因检测与鉴定CRISPR-Cas9系统中，负责特异性识别靶DNA序列的组分是（）

A.Cas9核酸酶

B.sgRNA向导RNA

C.DNA连接酶

D.逆转录酶2026年临床应用最广泛、免疫原性最低的体内基因治疗病毒载体为（）

A.逆转录病毒

B.腺病毒Ad5

C.腺相关病毒AAV

D.慢病毒LV生产具有完整糖基化修饰的重组人单克隆抗体，首选受体细胞是（）

A.大肠杆菌

B.枯草芽孢杆菌

C.CHO哺乳动物细胞

D.酿酒酵母首个获批用于β-地中海贫血的CRISPR基因编辑疗法，编辑的靶细胞是（）

A.外周血T细胞

B.造血干细胞

C.肝细胞

D.肺上皮细胞碱基编辑器（ABE/CBE）相比传统CRISPR-Cas9最大优势是（）

A.不产生DNA双链断裂，降低脱靶与染色体异常

B.可插入大片段外源基因

C.转染效率高于病毒载体

D.可以直接编辑线粒体DNA重组基因工程药物不包含以下哪一种（）

A.重组人胰岛素

B.干扰素α

C.青霉素

D.组织纤溶酶原激活物t-PACAR-T细胞治疗的核心改造手段属于（）

A.体外细胞基因重组与基因转导

B.体内原位基因编辑

C.RNA干扰沉默致病基因

D.染色体整条替换用于微量病原核酸早期筛查的体外基因扩增技术是（）

A.Southern杂交

B.PCR及数字dPCR

C.基因芯片

D.Westernblot非病毒基因递送载体LNP（脂质纳米颗粒）主要用于递送（）

A.质粒DNA

B.mRNA、sgRNA

C.大片段基因组DNA

D.病毒基因组cDNA文库构建必须用到的工具酶是（）

A.限制性内切酶

B.T4DNA连接酶

C.逆转录酶

D.TaqDNA聚合酶生殖细胞基因编辑被全球严格限制，主要风险是（）

A.体细胞免疫排斥

B.基因突变可世代遗传，改变人类生殖基因组

C.载体整合导致插入突变

D.蛋白表达过量引发细胞毒性2026年现货型通用型CAR-NK细胞的制备依托的基因工程技术为（）

A.敲除TCR基因避免排异，同时导入CAR表达框

B.直接注射裸DNA进行体内转染

C.仅使用RNA瞬时转染，无基因组整合

D.利用农杆菌介导转化基因诊断的分子基础是（）

A.抗原-抗体特异性结合

B.核酸碱基互补配对杂交

C.酶促生化反应

D.细胞形态学改变目的基因导入动物受精卵最常用的物理方法是（）

A.农杆菌转化法

B.显微注射法

C.电穿孔法

D.基因枪法二、多项选择题（每题3分，共15分，多选少选均不得分）基因工程在生物医药领域三大应用方向包含（）

A.重组蛋白与多肽药物研发

B.基因治疗与细胞免疫治疗

C.基因诊断与分子筛查技术

D.转基因农作物培育降低CRISPR基因编辑脱靶效应的新技术（2026前沿进展）（）

A.高保真Cas9突变体

B.碱基编辑器精准单碱基修正

C.瞬时mRNA转染，不整合基因组

D.延长sgRNA长度增强非特异性结合AAV载体的技术局限性有（）

A.外源基因插入容量＜4.7kb

B.人群预存中和抗体导致给药失效

C.几乎不整合入染色体，长期表达存在波动

D.极易诱发强烈急性免疫风暴原核工程菌生产重组药用蛋白容易形成包涵体，解决策略包括（）

A.低温诱导降低蛋白聚集

B.共表达分子伴侣基因

C.改造信号肽实现胞外分泌

D.直接在大肠杆菌中完成糖基化修饰体外基因治疗的完整流程包含（）

A.分离患者原代细胞

B.体外进行基因转染/基因编辑

C.筛选阳性改造细胞并扩增培养

D.回输至患者体内发挥疗效三、名词解释（每题3分，共15分）重组DNA技术（基因工程）基因编辑（CRISPR-Cas9）离体（exvivo）基因治疗表达载体标记基因脂质纳米颗粒（LNP）非病毒递送系统四、简答题（每题6分，共24分）简述基因工程四大基本操作步骤。对比病毒载体与LNP非病毒载体在基因治疗中的优缺点。简述重组人胰岛素工程菌构建的技术路线。简述CAR-T细胞构建涉及的基因工程关键操作。五、论述题（共16分）结合2026年全球生物医药前沿进展，论述基因编辑技术在单基因遗传病、肿瘤细胞治疗两大领域的临床突破、现存技术瓶颈与未来改进方案。参考答案与详细解析一、单选（每题2分）1.B解析：载体构建是基因工程核心步骤

2.B

3.C

4.C解析：原核细胞无法完成糖基化修饰

5.B

6.A

7.C解析：青霉素为微生物发酵抗生素，不属于重组基因工程药物

8.A

9.B

10.B

11.C

12.B

13.A

14.B

15.B二、多选（每题3分）1.ABC

2.ABC

3.ABC

4.ABC

5.ABCD三、名词解释基因工程：在体外人工剪切、拼接重组DNA分子，将外源目的基因导入受体细胞，使其稳定复制与表达，定向改造生物性状的分子生物技术，又称重组DNA技术。CRISPR基因编辑：利用向导RNA定位靶序列，Cas核酸酶精准切割基因组DNA，实现基因敲除、插入、点突变的定向基因组修饰技术。exvivo离体基因治疗：先取出患者细胞，体外完成基因改造，筛选扩增后再回输体内，安全性更高，是当前细胞治疗主流方案。标记基因：载体上用于快速筛选阳性转化细胞的基因，常用抗生素抗性基因、荧光蛋白基因。LNP脂质纳米颗粒：阳离子脂质形成纳米囊泡，包裹核酸物质，高效穿透细胞膜，无基因组整合风险，是mRNA药物、瞬时基因编辑的主流递送工具。四、简答题四大步骤

①目的基因的获取（PCR扩增、cDNA合成、化学合成）；

②基因表达载体的构建（限制酶切割+DNA连接酶连接）；

③将重组载体导入受体细胞；

④目的基因的分子检测与蛋白表达鉴定。载体对比

（1）病毒载体（AAV、慢病毒）

优点：转染效率极高，可实现基因组整合，长期稳定表达；

缺点：插入片段容量有限，存在免疫反应、插入突变风险，生产成本高。

（2）LNP非病毒载体

优点：无插入突变，安全性高，装载mRNA/sgRNA便捷，规模化生产成本低；

缺点：仅瞬时表达，难以长期稳定转录，体内靶向组织特异性不足。胰岛素工程菌构建路线

①从人胰岛细胞mRNA反转录获得胰岛素A、B链cDNA；

②选用限制酶切割质粒与目的基因，T4连接酶构建重组表达质粒；

③将重组质粒转化大肠杆菌；

④抗生素筛选阳性工程菌，发酵诱导表达；

⑤分离包涵体，复性、酶切得到成熟重组人胰岛素。CAR-T基因工程操作

①克隆嵌合抗原受体CAR基因；

②构建慢病毒重组表达载体；

③体外分离患者外周血T淋巴细胞；

④慢病毒感染T细胞，将CAR基因稳定整合入T细胞基因组；

⑤筛选CAR阳性T细胞，大规模扩增，制备细胞制剂用于回输。五、论述题（16分）1.临床突破（2026最新进展）（1）单基因遗传病：CRISPR编辑造血干细胞疗法正式获批用于β-地中海贫血、镰状细胞贫血；碱基编辑器实现血友病B、亨廷顿病单碱基无痕修复，无需DNA双链断裂，大幅降低染色体畸变风险。AAV体内递送技术实现肝脏、视网膜遗传病的原位体内基因治疗。

（2）肿瘤治疗：基因编辑敲除T细胞抑制性受体（PD-1、TCR），降低免疫抑制；通用型CAR-NK通过基因修饰实现异体现货供应，大幅降低制备成本，在实体瘤临床试验取得明显疗效；体内原位基因编辑直接改造肿瘤浸润淋巴细胞，简化细胞制备流程。2.当前技术瓶颈①脱靶效应：CRISPR易造成非目标位点突变，存在致癌风险；

②递送难题：体内靶向效率不足，核酸药物易被体液降解；

③载体安全：AAV预存抗体导致半数患者无法用药，病毒整合存在插入突变隐患；

④实体瘤屏障：改造后的免疫细胞难以浸润肿瘤微环境。3.