2026 基因工程与生物制药技术题库（完整版含答案解析）

2026基因工程与生物制药技术题库（完整版含答案解析）模块一单项选择题（60题）第一部分基因工程基础（25题）基因工程中切割双链DNA特异性位点的工具酶是（）

A.DNA连接酶B.Taq聚合酶C.限制性核酸内切酶D.逆转录酶

答案：C原核生物最常用的克隆载体是（）

A.Ti质粒B.质粒pBR322C.逆转录病毒D.λ噬菌体

答案：BPCR扩增DNA的指数公式为（）

A.n²B.2ⁿC.2nD.N²

答案：BPCR三步循环顺序为（）

A.退火→变性→延伸

B.变性→退火→延伸

C.延伸→变性→退火

D.变性→延伸→退火

答案：B植物转基因首选载体是（）

A.普通质粒B.农杆菌Ti质粒C.腺病毒D.酵母载体

答案：C目的基因导入大肠杆菌最常用方法（）

A.显微注射B.钙离子制备感受态细胞C.脂质体转染D.电穿孔

答案：B蓝白斑筛选依靠的标记基因是（）

A.氨苄抗性基因B.lacZ基因C.潮霉素基因D.GFP基因

答案：B连接黏性末端DNA片段的酶是（）

A.限制性内切酶B.T4DNA连接酶C.反转录酶D.解旋酶

答案：BCRISPR-Cas9系统中负责识别靶DNA的分子是（）

A.Cas9蛋白B.sgRNAC.引物D.载体DNA

答案：B真核mRNA反转录得到的DNA称为（）

A.基因组DNAB.cDNAC.质粒DNAD.载体DNA

答案：B下列哪项不属于基因工程五大基本步骤（）

A.获取目的基因B.构建重组表达载体

C.细胞融合D.转化受体细胞

答案：C基因治疗最常用病毒载体（）

A.逆转录病毒B.痘苗病毒C.腺相关病毒AAVD.疱疹病毒

答案：C无法对蛋白进行糖基化修饰的表达系统是（）

A.大肠杆菌B.毕赤酵母C.CHO细胞D.昆虫细胞

答案：A包含体主要出现在哪种宿主中（）

A.CHO细胞B.大肠杆菌C.酵母D.杂交瘤细胞

答案：B检测重组菌是否插入目的基因，首选初筛手段（）

A.ELISAB.菌落PCRC.蛋白电泳D.活性测定

答案：B同尾酶切割产生的末端可以（）

A.直接连接，不再被原酶识别

B.不能连接

C.只能平端连接

D.只能用于真核载体构建

答案：A平端DNA片段连接效率低，常用增强手段（）

A.提高连接酶浓度B.提高温度

C.增加EDTAD.降低DNA浓度

答案：A不属于表达载体必备元件的是（）

A.启动子B.终止子C.复制原点D.内含子

答案：D原核强启动子（如T7启动子）的作用是（）

A.启动DNA复制

B.启动基因转录

C.促进mRNA翻译

D.提高质粒拷贝数

答案：B基因敲除依靠的核心技术（）

A.PCRB.CRISPR-Cas9C.细胞融合D.凝胶层析

答案：B从总RNA制备cDNA文库需要（）

A.逆转录酶B.限制性内切酶C.Taq酶D.连接酶

答案：A下列属于报告基因的是（）

A.卡那霉素抗性基因B.GFP绿色荧光蛋白基因

C.复制起点D.终止子

答案：B外源基因在宿主内稳定遗传的前提是（）

A.高拷贝复制原点

B.载体含有筛选标记

C.载体能自主复制或整合入染色体

D.强启动子

答案：C用于定点突变改造蛋白质氨基酸序列的技术为（）

A.普通PCRB.重叠延伸PCR定点诱变

C.菌落PCRD.RT-PCR

答案：BRT-PCR用来检测（）

A.基因组DNAB.mRNA转录水平C.质粒拷贝数D.蛋白浓度

答案：B第二部分生物制药技术（35题）全球第一个基因工程药物重组人胰岛素商品名（）

A.HumulinB.EPOC.t-PAD.干扰素

答案：A促红细胞生成素EPO不能用大肠杆菌生产，原因是（）

A.大肠杆菌无法完成糖基化修饰

B.产物被蛋白酶降解

C.基因不稳定

D.产生内毒素直接灭活蛋白

答案：A大规模生产治疗性单抗首选宿主细胞（）

A.大肠杆菌B.毕赤酵母C.CHO中国仓鼠卵巢细胞D.昆虫细胞

答案：C单克隆抗体制备核心技术是（）

A.基因克隆B.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合

C.PCR扩增抗体基因D.蛋白定点突变

答案：B杂交瘤细胞筛选的选择性培养基是（）

A.LB培养基B.HAT培养基C.酵母YPDD.DMEM基础培养基

答案：B单克隆抗体初步检测方法（）

A.SDSB.ELISAC.高效液相HPLCD.微生物检定

答案：B重组蛋白分离纯化顺序一般为（）

A.细胞破碎→粗提→层析精制→成品

B.层析→破碎→粗提

C.先精制再粗提

D.直接层析无需粗提

答案：A依据分子大小进行分离的层析技术（）

A.离子交换层析B.凝胶过滤（分子筛）层析

C.亲和层析D.疏水层析

答案：B依靠抗原-抗体特异性结合的纯化技术（）

A.离子交换B.蛋白A亲和层析C.分子筛D.反相层析

答案：B去除热原（内毒素）最常用工艺（）

A.超滤+阴离子交换层析

B.凝胶过滤

C.盐析沉淀

D.有机溶剂萃取

答案：A发酵罐培养工程菌，控制参数不含（）

A.温度、pHB.溶氧量DOC.搅拌转速D.光照强度

答案：D大肠杆菌高密度发酵容易积累的副产物（）

A.乙醇B.乙酸C.乳酸D.甘油

答案：B包含体复性的关键条件是（）

A.高浓度尿素变性后梯度稀释复性

B.直接加热溶解

C.高盐直接沉淀

D.蛋白酶降解杂质

答案：A基因工程亚单位疫苗优势（）

A.不含完整病原体，安全性高

B.减毒毒株增殖能力强

C.不需要纯化

D.可直接口服无需冷链

答案：C以下属于重组多肽药物的是（）

A.青霉素B.生长激素C.肝素D.阿莫西林

答案：B生物技术药物质量控制首要项目（）

A.分子量与纯度B.外观颜色C.包装密封性D.运输温度

答案：A细菌内毒素经典检测方法（）

A.家兔热原试验B.鲎试验C.ELISAD.HPLC

答案：B动物细胞培养必须添加（）

A.琼脂凝固剂B.胎牛血清C.抗生素D.葡萄糖

答案：B接触抑制现象出现在（）

A.肿瘤细胞B.原代正常动物细胞

C.大肠杆菌D.酵母细胞

答案：B固定化酶技术优势（）

A.酶可反复回收使用，产物易分离

B.提高酶分子量

C.无需无菌环境

D.只适用于胞内酶

答案：A第一代基因治疗药物主要针对（）

A.遗传病B.肿瘤C.传染病D.代谢病

答案：A生物制药下游工艺指（）

A.载体构建与菌种改造

B.发酵与细胞培养

C.蛋白分离、纯化、制剂

D.基因测序

答案：CSDS电泳中，蛋白质迁移速率取决于（）

A.电荷多少B.分子量大小C.空间结构D.等电点

答案：B等电聚焦电泳依靠哪种性质分离蛋白（）

A.分子量B.等电点C.疏水性D.配体结合能力

答案：B毕赤酵母表达系统最大优势（）

A.高密度发酵+真核蛋白糖基化修饰

B.培养温度42℃快速增殖

C.无内毒素污染

D.不需要诱导剂

答案：A不属于生物大分子药物的是（）

A.单抗药物B.重组干扰素C.小分子靶向药D.核酸药物

答案：A盐析法沉淀蛋白质原理（）

A.中和电荷、破坏水化膜

B.使肽键断裂

C.改变一级结构

D.降低分子量

答案：A重组工程菌菌种保藏长期保存方法（）

A.4℃斜面冷藏

B.-80℃甘油冷冻保藏

C.室温干粉保存

D.液体培养基静置保存

答案：B病毒载体药物必须严格控制（）

A.空载体、复制型病毒残留

B.葡萄糖残留量

C.无机盐浓度

D.渗透压

答案：A治疗性抗体药物中，人源化抗体主要目的是（）

A.降低人体抗鼠抗体HAMA反应

B.提高分子量

C.更容易被蛋白酶降解

D.简化纯化工艺

答案：A生产重组t-PA溶栓药物优先选用（）

A.CHO细胞表达系统

B.大肠杆菌

C.乳酸菌

D.枯草杆菌

答案：A生物药品无菌检查控制的主要微生物不包括（）

A.细菌B.真菌C.支原体D.大型藻类

答案：D超滤膜在制药下游的作用（）

A.浓缩蛋白、脱盐、去除小分子杂质

B.裂解菌体细胞

C.蛋白结晶

D.层析分离

答案：A基因工程菌高密度发酵要避免碳源过量导致（）

A.碳分解代谢物阻遏（葡萄糖效应）

B.质粒丢失

C.菌体自溶

D.蛋白提前降解

答案：A生物制药GMP质量管理覆盖（）

A.仅成品检验

B.从菌种构建、培养、纯化到制剂全流程

C.只控制下游纯化

D.只控制发酵工段

答案：B模块二填空题（20空）基因工程三大工具酶：限制性内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶。基因工程四大要素：目的基因、载体、受体细胞、工具酶。PCR三要素：模板DNA、上下游引物、TaqDNA聚合酶。表达载体核心元件：启动子、复制原点、筛选标记、终止子、SD序列（原核）。外源蛋白在大肠杆菌中以不溶性聚集体形式存在，称为包含体。单克隆抗体制备三步骤：细胞融合、HAT筛选、阳性克隆ELISA鉴定。蛋白质纯化三步：粗提（盐析）、初步层析、精细层析精制。动物细胞培养两大污染防控：微生物污染、支原体污染。去除内毒素常用层析：阴离子交换层析。基因治疗两大策略：体外exvivo、体内invivo。模块三名词解释（15题）重组DNA技术（基因工程）：将不同来源的DNA体外切割、拼接，构建重组载体并导入宿主细胞，实现基因复制与表达的技术。cDNA文库：以细胞mRNA反转录得到的cDNA构建而成，不含内含子，适合真核基因在原核细胞表达。感受态细胞：经CaCl₂处理，细胞膜通透性提高，能够摄取外源质粒DNA的大肠杆菌细胞。包含体：重组蛋白在大肠杆菌胞内错误折叠形成的无活性不溶性颗粒。单克隆抗体：单一杂交瘤细胞无性繁殖产生的高度均一、特异性强的免疫球蛋白。亲和层析：利用蛋白质与配体特异性可逆结合实现高选择性分离。下游工程：发酵结束后，菌体破碎、蛋白提取、纯化、制剂的全部工艺。葡萄糖效应：葡萄糖优先利用抑制其他碳源启动子表达，造成外源基因转录抑制。热原（内毒素）：革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖，进入人体引发发热。蓝白斑筛选：利用lacZ基因失活，重组菌落为白斑，空载菌落为蓝斑。CRISPR-Cas9：向导RNA介导Cas9核酸酶定点切割基因组DNA，实现基因敲除/插入。人源化抗体：将鼠源抗体可变区保留、恒定区替换为人源序列，降低免疫排斥。高密度发酵：通过补料控制碳源浓度，大幅提高工程菌菌体密度与目标产物产量。RT-PCR：先将mRNA反转录为cDNA，再PCR扩增，用于检测基因转录水平。基因工程亚单位疫苗：仅表达病原体保护性抗原蛋白，无完整活病原体，安全性高。模块四简答题（10道高频考题）简述基因工程完整操作五步流程

①获取目的基因（PCR扩增、人工合成、基因组/cDNA文库筛选）；

②载体与目的基因双酶切；

③T4连接酶构建重组表达载体；

④重组质粒转化感受态宿主细胞；

⑤抗性筛选+PCR鉴定阳性菌株，诱导表达产物。大肠杆菌不能表达糖基化真核蛋白的原因？举例说明解决方案

原核细胞无内质网与高尔基体，无法完成蛋白糖基化修饰；

对策：改用毕赤酵母、CHO哺乳动物细胞表达系统。如EPO改用CHO细胞生产。包含体蛋白的处理工艺流程

菌体破碎→离心收集沉淀→尿素/盐酸胍变性溶解→梯度稀释透析复性→层析纯化获得活性蛋白。单克隆抗体制备简要流程

小鼠免疫→取脾脏B细胞→与骨髓瘤细胞PEG融合→铺板HAT选择性培养基→ELISA筛选阳性杂交瘤→有限稀释获得单克隆细胞株→细胞培养生产单抗。重组蛋白常用层析组合路线

盐析粗提→离子交换层析→疏水层析→蛋白A亲和层析→分子筛除聚体。PCR反应三阶段温度与作用

94~95℃变性：双链DNA解链；

50~62℃退火：引物结合单链模板；

72℃延伸：Taq酶合成新DNA链。病毒载体与非病毒载体优缺点（基因治疗）

病毒载体：转染效率极高；缺点：免疫反应、插入突变风险。

脂质体等非病毒载体：安全性高；缺点：转染效率低、表达时间短。工程菌发酵过程防止质粒丢失的措施

①添加抗生素维持选择压力；

②使用高拷贝稳定型质粒；

③降低菌体传代次数；

④补料发酵控制生长速率。生物制药中GMP对下游纯化的核心质控项目

蛋白纯度、生物学活性、分子量、聚体含量、内毒素、宿主蛋白残留、微生物无菌。简述重组人胰岛素工业化生产路线

人胰岛素A、B链基因PCR扩增→插入pBR322质粒→转化大肠杆菌→发酵培养→收集包含体→变性复性→蛋白纯化→A、B链体外折叠组装→制剂灌装。模块五论述题（考试压轴题，4题）论述四种主流表达系统优缺点及药物应用场景

（1）大肠杆菌：成本极低、发酵快；无糖基化，适合胰岛素、干扰素等非糖基化重组蛋白；

（2）毕赤酵母：高密度发酵+简单糖基化，适合胞外分泌型蛋白；

（3）昆虫细胞：复杂糖基修饰，适