技术原理讲解及人的基因扩增

技术原理讲解及人的基因扩增第一页，共24页。DNA的结构第二页，共24页。DNA的复制模板：基因组DNA原料：游离的核苷酸

A、G、C、T催化剂：DNA聚合酶需要的条件：活细胞内的微观环境第三页，共24页。DNA的复制第四页，共24页。体内invivo体外invitroDNA的复制第五页，共24页。PCR技术的发明KaryB.Mullis

Californianhighway第六页，共24页。Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。

1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。

1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术。

1989年美国《Science》杂志列PCR为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。第七页，共24页。第八页，共24页。PCR技术的特点1）高度的灵敏性2）特异性3）操作简便易行4）用途广泛30轮循环扩增量达230个拷贝（109拷贝）第九页，共24页。生命科学：DNA重组、转基因生物医学工程：基因疫苗、产前诊断疾病诊断：艾滋病、禽流感法医学：血迹、精斑等痕迹DNA考古学：远古人类、猛犸DNAPCR技术的应用第十页，共24页。人的性别决定第十一页，共24页。人的性别决定FatherMother22pairs+XY22pairs+XX22+X22+Y22+Xspermegg22pairs+XX22pairs+XYGirlBoy第十二页，共24页。1959年生物学家发现Y染色体决定人（和老鼠）的男性特征;1975年，Wachtel等提出Y染色体上有一个组织相容性抗原的基因H-Y和男性决定有关;1987年,DavidPage认为Y染色体上一个特定的基因ZFY是决定男性的基因;1988年,澳大利亚的Sinclair实验室发现袋鼠类的ZFY基因不在Y染色体上，而是在常染色体上;1990年，澳大利亚女科学家MarshallGraves和英国的Lovell-Badge两个实验室发现另外一个基因SRY。第十三页，共24页。人的性别决定————————YSRY男性第十四页，共24页。利用PCR技术检测SRY基因男性，有SRY——阳性结果女性，无SRY——阴性结果应用：奥运会运动员的性别鉴定犯罪现场血痕、毛发的性别鉴定野生动物的性别鉴定······男女第十五页，共24页。反应体系第十六页，共24页。移液器（pipette）枪头（tips）反应管（tube）第十七页，共24页。95℃3min；94℃30s、52℃30s、72℃30s30个循环；72℃延伸5min.第十八页，共24页。核酸电泳1.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液。第十九页，共24页。2.放入到微波炉内加热熔化第二十页，共24页。3.冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固。凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内第二十一页，共24页。4.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面1mm为宜，如样品孔内有气泡，应设法除去。第二十二页，共24页。5.在DNA样