（正式版）DB63∕T 2552-2026 《牛病毒性腹泻监测技术》

DB63I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。1牛病毒性腹泻监测技术GB/T18637牛病毒性腹泻/黏膜病诊断技NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范牛病毒性腹泻（BovineViralDiarrhea，BVD）又称为牛病毒性腹泻/黏膜病，是由牛病病毒（BovineViralDiarrheaVirus，BVD进行牛病毒性腹泻监测时，能够独立代表某一特定群体特征的最小牛群单2妊娠母牛在怀孕早期(约120d前)感染BVDV后可导致病毒的垂直传播,从而感染胎牛,感染的胎牛出4监测目的和对象4.1监测目的掌握并跟踪BVD在牛群中的分布，识别PI牛，评价其危害程度，4.2监测对象5.1被动监测以兽医技术人员或养殖场（户）的BVD疑似病例报5.2主动监测近三年内频发或者暴发过BVD的地区，或正在暴发疫情或实施净化计划地区，增加监测频率，每六5.3监测结果处理收集养殖场（户）基本信息，填写动物疫病流行病学最初调查3最小群体单位，不超过200头的抽检数量无菌采集抗凝全血；血清、组织样品、鼻拭子、精液、牛奶样品的采集、保存、贮GB/T18637执行。新鲜粪便样品使用一次性粪便采集器或手套等采集，采集量为3g～5g，4℃保存和对血清、全血、新鲜粪便样品、组织中的病48.2.2.3试剂a)无核糖核酸酶（Ribonuclease-FreeWater，RNase）水、TRIzol（2℃~25℃)、氯仿（2℃~8℃)、异丙醇、75%乙醇、DL2000DNAMarker；c)1×TAE电泳液、1.0%琼脂糖凝胶及其使用注意事项见附录B；d)逆转录聚合酶链式反应（ReverseTransch)RT-PCR阳性对照可从BVDVAV69株或其它毒株细胞培养物提取，也可委托生物公司将毒株b)在反应混合物配置区进行反应液配制；5f)利用含凝胶红（GelRedN制方法见附录B.2，目的条带的大小分别为2941、BVDV-2和BVDV-3三种基因型。实验操作遵循分区管理原则，并设置相应基因型的阳性对照。具体检a)套式RT-PCR检测引物序列、反应液配方见附录D；b)在反应混合物配置区进行反应液配制；h)利用含核酸染料的1%琼脂糖凝胶电泳，经凝胶成像仪观察目的片段大小。目的条带的大小分别为：BVDV-1，505bp；BVDV-2，833ba)在一反应管中同时检测BVDV-1和BVDV-2，在另一反应管中对BVDV-3单独进行检测；BVDV分b)在反应混合物配置区进行反应液配制；）；6符合8.2.1且符合8.2.2（8.2.2.5或8.2.2.6或8.2.2.7中核酸阳性条件）阳性判定指标的均判定为9监测数据分析9.1感染率计算9.1.1群体感染率检测阳性牛群占全部调查牛群的比例。群体感染率见式（1）:HT——总调查牛群数。9.1.2个体感染率检测阳性牛只占全部检测牛只的比例。个体感染率见式（2）:BVDV抗体阳性的牛比例，反映牛群既往感染或疫苗免疫情况。抗体阳性率见式（3）:Ab+——抗体阳性率（%NT——检测牛总数。79.2空间分布分析9.4群体特征分析9.5调查数据分析收集养殖场/户的背景信息、饲养管理和PI牛淘汰情况等，识别8图A.1给出了最初发现动物疫病时开展的流行病学调查单的模板，图A.2给出了动物疫病流行病学畜主：地址：联系电话：养殖场户地貌特征：山地口丘陵口湿地口草场口荒漠半荒漠口其他饲养方式：放牧口舍饲口半舍词半放牧口发病动物种类：存栏数：发病数：同群数：死亡数：无害化处理数：动物来源：购进时间：检疫证号：近一月出栏及去向：免疫时间：疫苗种类、来源、生产厂家及批号：饲草料种类及来源：防疫消毒设施及消毒情况：其他：9畜主：地址：联系电话：接报时间：接报途径：饲养方式：放牧口舍饲口半舍词半放牧口发病动物种类：存栏数：发病数：同群死亡数：无害化处理数：动物来源：近一月出栏及去向：免疫时间：疫苗种类、来源、生产厂家及批号：与野生动物交集情况：饲养管理及人员：临床症状：样品类型：实验室检则：隔离病畜口；2.立即上报疫情；3.禁止易感动物流动；4.全面消毒；5.采样送检；调查日期：调查人员：调查人员单位：养殖场户地貌特征及饲养方式：平原口山地口丘陵口湿地口草场口封闭圈舍口舍词口半舍词半放牧口放牧口死亡数：无害化处理：动物来源：近期出栏及去向：疫苗种类、来源、生产厂家及批号：周围畜离及野生动物情况：圈舍：饲料：防疫消毒设施及消毒情况：无害化处理/消毒灭源情况：人畜共患病人员感染情况：1.隔离病畜；2.立即上报疫情；3.禁止易感动物流动；4.全面严格；5.采样送检；6.病畜扑杀；7.封锁疫点、疫区，人员、车辆进出严格消毒；8.周边紧急免疫，建立免疫带。调查时间：调查人员：调查人员单位：溶液配制Tris碱，4.48g；冰醋酸，1.14121℃下蒸汽灭菌20min。倒入已封好的凝胶灌制平台上，插上样品梳，凝固后移去样品梳，BVDVRT-PCR引物见表C.1。CTAGCCATGCCCTTAGTAGGCAACTCCATGTGCCATGTAC每个反应体系用量(μL）111ATCCTGACCAATGCTAGGTCCBVDV套式RT-PCR第一轮反应液配方见表D.2。每个反应体系用量(μL）111BVDV套式RT-PCR第二轮反应液配方见表D.每个反应体系用量(μL）1111FAM-TAGCAACAGTGGTGAGTTCGTTGGATGGCT-BTxR-TAGCGGTAGCAGTGAGTTCGTTGGATGGCC-FAM-ACTCGGGGCTTCGGT